2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、本論文采用基因工程、分子生物學(xué)、細(xì)菌培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、ELISA、Western-blotting等技術(shù),以pIPES為載體,分別將含有乙肝表面抗原的生長(zhǎng)抑素(SS)基因和粒細(xì)胞·巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)連接到載體的多克隆位點(diǎn)B和多克隆位點(diǎn)A上,從而同時(shí)表達(dá)這兩種蛋白,旨在研究該基因疫苗對(duì)仔豬的促生長(zhǎng)作用。
   從pVGS/2SS-asd基因上通過(guò)PCR的方法,分別獲得目的片段GM-CSF和2SS基因。將pIRES載

2、體的MCSA位點(diǎn)用NheⅠ和EcoRⅠ酶切開(kāi),將GM-CSF片段插入。然后在MCSB位點(diǎn)用NotⅠ、SalⅠ酶切開(kāi),將2SS基因片段插入其中。并將構(gòu)建好的質(zhì)粒命名為pIRES-GM-CSF/2SS,獲得質(zhì)粒后,通過(guò)酶切和測(cè)序鑒定基因的正確性,測(cè)序結(jié)果顯示基因序列完全正確。
   通過(guò)RT-PCR試驗(yàn),確定GM-CSF蛋白和生長(zhǎng)抑素蛋白可以在RNA水平上表達(dá),通過(guò)Western-blotting檢測(cè),生長(zhǎng)抑素基因和GM-CSF基因

3、能在蛋白水平表達(dá),從而確定該質(zhì)粒可以在真核細(xì)胞中表達(dá)。
   選擇來(lái)源、體重相近的28日齡的杜×長(zhǎng)×大斷奶仔豬40頭隨機(jī)分為4個(gè)組,每組10頭,其中A組為對(duì)照組,B、C、D組為試驗(yàn)組、A組肌肉注射生理鹽水,試驗(yàn)組分別肌肉注射不同劑量的pIRES-GM-CSF/2SS基因疫苗,免疫劑量分別為0.25 mg、0.5 mg和1.0 mg,第一次免疫加入DDA佐劑,15 d后同樣劑量加強(qiáng)免疫1次,但沒(méi)有加入DDA佐劑。檢測(cè)仔豬的生長(zhǎng)抑素

4、抗體水平、仔豬增重和料重比等指標(biāo),研究該基因疫苗對(duì)仔豬的促生長(zhǎng)作用。結(jié)果表明:
   1.pIRES-GM-CSF/2SS疫苗免疫后對(duì)仔豬的死亡率和腹瀉率的影響
   該疫苗經(jīng)過(guò)去內(nèi)毒素處理,免疫斷奶仔豬后,仔豬的死亡率和腹瀉率為0。
   2.對(duì)仔豬血漿中生長(zhǎng)抑素抗體的影響
   在試驗(yàn)第15 d,與對(duì)照組(A組)相比,B、C和D組的抗體水平分別提高了11.33%(P>0.05)、20.0%(P>0.0

5、5)和62.67%(P<0.05),并隨著注射劑量的增加,抗體也有所提高。
   第30d,與對(duì)照組(A組)相比,B、C和D組的抗體水平分別提高了15.74%(P>0.05)、14.81%(P>0.05)和8.33%(P>0.05),差異均不顯著。
   3.對(duì)仔豬增重的影響
   在注射疫苗0-15 d,與對(duì)照組相比,B、C和D組的日增重分別提高了35.88%(P<0.05)、21.17%(P>0.05)和25

6、.61%(P>0.05)。B、C和D組的料重比分別提高了16.67%、10.0%和4.67%。
   在試驗(yàn)的15-30 d,與對(duì)照組相比,B和C組的日增重有所降低,D組日增童提高了6.35%。B、C和D組料重比分別提高了5.06%、7.30%和3.37%。
   從全期來(lái)看,A、B、C和D組的日增重分別為491.00g、521.33 g、517.67 g和554.00g。與對(duì)照組相比,B、C和D組日增重分別提高了6.1

7、8%、5.43%和12.83%。A、B、C和D組的料重比分別為1.66、1.50、1.53、1.60,與對(duì)照組相比,B、C和D組料重比分別提高了9.64%、7.83%和3.61%。
   綜上所述,通過(guò)酶切和測(cè)序試驗(yàn)證明pIRES-GM-CSF/2SS基因疫苗的構(gòu)建是正確的;Western-blotting、ELISA試驗(yàn)證明基因疫苗的GM-CSF基因和SS基因可以在蛋白水平上表達(dá);通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn),這種基因疫苗可在一定程度提高仔豬

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