絨山羊絨毛生長相關(guān)基因的篩選、鑒定和多態(tài)性分析.pdf

1、絨山羊是重要的絨用經(jīng)濟動物，其絨毛生長具有較強的季節(jié)性，但不同品種之間有很大的差異，大多數(shù)絨山羊在非長絨季節(jié)（5-8月份）不長絨，而遼寧絨山羊一些品系可以常年長絨（6月開始長絨）。埋植褪黑激素可以促進絨山羊在非長絨季節(jié)長絨，從而達到四季長絨的目的。本研究以內(nèi)蒙古白絨山羊為主要研究對象，采用分子標記和基因芯片技術(shù)，從候選基因和差異表達基因篩選入手，研究絨山羊產(chǎn)絨經(jīng)濟性狀的遺傳多態(tài)性和非長絨季節(jié)埋植褪黑激素絨山羊皮膚組織差異表達基因，初步探

2、討促進絨山羊絨毛生長的因素及其分子調(diào)控機理。
　　1、絨山羊內(nèi)分泌激素類基因SNP分析
　　應用PCR-SSCP和DNA測序技術(shù)，以內(nèi)蒙古阿爾巴斯型、阿拉善型、二郎山型以及罕山白絨山羊4個品種（系）共456個樣本為實驗材料，分析PRL、PRLR、MLTR1a、MLTR1b、IGF-I和TG6個候選基因共16個位點的遺傳多態(tài)性，結(jié)果表明：
　　（1）在絨山羊PRL基因Exon5區(qū)域P2引物位點存在X76049:g.576

3、bp處C-A突變，該突變導致第176個密碼子CCC變成ACC，從而使脯氨酸變成蘇氨酸（Pro-Thr）,該位點SNP對絨山羊絨厚度存在顯著影響(P＜0.01)，同時還對阿爾巴斯絨山羊產(chǎn)羔數(shù)存在邊際顯著影響(P=0.055)；在PRLR基因Exon10區(qū)域P3引物位點存在HQ266606:g.1076bp處T-C突變，該突變導致第359個密碼子CTT變成CCT，從而使亮氨酸變成脯氨酸（Lue-Pro），該位點SNP對阿爾巴斯絨山羊羊絨細度

4、存在顯著影響(P＜0.05)；
　?。?）在絨山羊MLTR1b基因Exon2區(qū)域P8引物位點存在NM_001206907:g.648bp處C-G突變，該突變沒有導致氨基酸的改變，還存在NM_001206907:g.665bp處G-A，該突變導致第223個密碼子CGC變成CAC，從而使精氨酸變成組氨酸(Arg-His)，該位點SNP對絨山羊產(chǎn)絨量有顯著影響（P＜0.05）。同時，該多態(tài)位點基因型與年齡互作效應對絨山羊絨厚度有顯著影響

5、（P＜0.05）；MLTR1b基因Exon2區(qū)域P9引物位點存在NM_001206907:g.1015bp處G-A突變，該突變導致第339個密碼子GGC變成AGC，從而使甘氨酸變成絲氨酸(Gly-Ser)，該位點SNP與年齡互作效應對絨山羊絨細度存在邊際顯著影響（P=0.056）；這兩個位點多態(tài)對絨山羊產(chǎn)羔數(shù)、羔羊初生重等繁殖性狀均無顯著影響（P＞0.05）
　?。?）在絨山羊TG基因Exon9區(qū)域P14引物位點存在NM_1738

6、83:g.1895bp處C-T突變，該突變導致第632個密碼子GCG變成GTG，從而使丙氨酸變成纈氨酸（Ala-Val）；在Exon11區(qū)域P16引物位點存在NM_173883:g.2849bp處G-A突變，該突變導致第950個密碼子CGC變成CAC，從而使精氨酸變成組氨酸（Arg-His）。這兩個位點SNP對絨山羊體重、產(chǎn)羔數(shù)和產(chǎn)絨性狀均無顯著影響（P＞0.05）。
　　2、絨山羊皮膚差異表達基因的篩選、鑒定和特征分析
　

7、?。?）通過基因芯片技術(shù)篩選絨山羊在非長絨期埋植MLT促進羊絨生長的相關(guān)基因。篩選出差異表達的基因95個，其中61個表達上調(diào)、34個下調(diào)。這些異常表達的基因按照功能分類,參與組成細胞成分的基因占18.33％，參與分子功能的基因占47.78%，參與生物學過程的基因占33.89%。
　?。?）Pathway信號通路分析表明：差異基因共參與了55條信號通路，其中CTNNB1基因參與的Wnt信號通路，CYP2B基因參與的維生素A代謝和外源

8、藥物代謝等信號通路可能與埋植MLT促進絨山羊非長絨期絨毛生長和毛囊發(fā)育有關(guān)。
　?。?）采用Real time定量PCR檢測技術(shù)，選擇芯片試驗結(jié)果中表達差異顯著上調(diào)的PAX6基因和顯著下調(diào)的CSN2基因，進一步擴大樣本對芯片結(jié)果準確性做驗證。結(jié)果表明，PAX6基因在埋植MLT試驗組羊皮膚中的表達量是對照組羊皮膚中表達量的2.399倍，CSN2基因在試驗組羊皮膚中的表達量是對照組羊皮膚中表達量的0.044倍，與基因芯片結(jié)果完全相符，