內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14(K14)基因啟動子多態(tài)性及其與絨毛性狀關(guān)聯(lián)性.pdf

1、角蛋白14（Keratin14，KRT14，K14）作為哺乳類動物絨毛結(jié)構(gòu)蛋白，與角蛋白5成對表達(dá)于表皮基底層細(xì)胞、絨毛及毛囊外根鞘細(xì)胞內(nèi),是覆層鱗狀上皮的生物標(biāo)記物。因此我們對內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14啟動子進(jìn)行了相關(guān)研究。
　　試驗一：內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14啟動子的克隆和分析。本試驗以內(nèi)蒙古白絨山羊DNA為模板，參照牛的角蛋白14序列設(shè)計和合成引物，通過PCR擴增獲得長度為2834bp（登錄號為JQ063036）,包括啟動子區(qū)

2、2631bp和結(jié)構(gòu)基因第一外顯子區(qū)203bp的內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14基因片段，對角蛋白14基因啟動子結(jié)構(gòu)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，并與人和牛角蛋白14啟動子序列做了比對。結(jié)果：山羊角蛋白14啟動子結(jié)構(gòu)與人角蛋白14啟動子只含有Sox-5，GATA-1，GATA-1/2結(jié)合位點等3個共同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點；但與牛的有較高的相似性，含有Sox-5，SRY，Cdx A，Myo D，MZF1，GATA-1/3，Nkx-2結(jié)合位點等7個共同的轉(zhuǎn)錄因

3、子結(jié)合位點。
　　試驗二：內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14基因單核苷酸多態(tài)性分析。①在對內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14啟動子序列克隆的基礎(chǔ)上，首先以20只山羊混合DNA為模板通過克隆測序?qū)ふ叶鄳B(tài)位點，結(jié)果發(fā)現(xiàn)引物 D2和D4擴增片段-421和-1838處出現(xiàn)套峰。②在-421和-1838處分別設(shè)計引物S1和S2，以150頭內(nèi)蒙古白絨山羊為研究對象，應(yīng)用PCR-SSCP技術(shù)和DNA測序技術(shù)檢測內(nèi)蒙古白絨山羊角蛋白14啟動子的分子變異。結(jié)果：引物S

4、1擴增產(chǎn)物有AA、AG、GG3種基因型；引物S2擴增產(chǎn)物有CC、CT、TT3種基因型；克隆測序分析，發(fā)現(xiàn)-421和-1838位點分別發(fā)生了A→G和C→T的堿基突變。③群體遺傳學(xué)表明：經(jīng)χ2檢驗。-421（A→G）和-1838（C→T）位點上的SNP均處于Hardy-Weinberg(P>0.05)平衡狀態(tài)，且均屬中度多態(tài)。-421（A→G）位點AA型個體的絨厚顯著低于GG型和AG型個體，GG型個體的絨長顯著高于AA型個體；-1838（C