構(gòu)建HFA動物模型研究糞便菌群在CMPA發(fā)生中的作用.pdf

1、目的：將牛奶蛋白過敏嬰兒和正常嬰兒的糞便菌群分別移植給無菌小鼠后，構(gòu)建菌群人源化小鼠模型，觀察移植小鼠對牛奶蛋白的反應(yīng)，探究糞便菌群在牛奶蛋白過敏發(fā)生中的作用。
　　方法：收集重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院消化?？婆R床診斷為牛奶蛋白過敏（cow’ milk protein allergy, CMPA）且以胃腸道表現(xiàn)為主的嬰兒糞便（I-CMPA組），同時收集該院兒?？企w檢的、無胃腸道癥狀且無過敏性疾病的正常嬰兒糞便（I-NC組），分別移植

2、給無菌小鼠后為過敏移植小鼠組（M-CMPA組）和正常移植小鼠組（M-NC組），兩組移植小鼠均用嬰兒配方奶粉喂養(yǎng)。14天后，用Illumina測序技術(shù)檢測糞便菌群的定植規(guī)律和變化情況、觀察移植小鼠的臨床表現(xiàn)、HE染色觀察空腸組織的病理改變、流式細(xì)胞術(shù)檢測脾臟細(xì)胞中CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例變化。
　　結(jié)果：（1）Illumina測序結(jié)果分析顯示，供體糞菌間的優(yōu)勢菌不同，且I-CMPA組菌屬豐富度和多樣性均較I-N

3、C組低。糞菌移植14天后，I-CMPA組中的重要組分能在無菌小鼠腸道內(nèi)較好維持；兩組移植小鼠的菌群結(jié)構(gòu)差異明顯，菌屬水平主成分分析（PCA）圖和層級聚類分析圖中兩組均能獨立分開。組間差異物種分析結(jié)果顯示：I-CMPA組與M-CMPA組中雙歧桿菌屬的比例均高于其對照組；（2）用嬰兒配方奶粉喂養(yǎng)后，M-CMPA組出現(xiàn)肛門紅腫、糞便變稀等表現(xiàn)，而M-NC組沒有出現(xiàn)類似的表現(xiàn)；（3）HE染色可見M-CMPA組較M-NC組出現(xiàn)明顯的空腸絨毛上皮細(xì)

4、胞局灶性脫落，絨毛連續(xù)性破壞和炎癥細(xì)胞浸潤；（4）流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，M-CMPA組脾臟CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例較M-NC組降低。
　　結(jié)論：（1）HFA小鼠能較好地模擬CMPA嬰兒的腸道微生物區(qū)系，該HFA模型為糞便菌群與CMPA的關(guān)系及機(jī)制研究提供了新的選擇；（2）糞便菌群的差異使移植小鼠對牛奶蛋白的反應(yīng)不同，糞便菌群的變化可能是CMPA發(fā)生的始動因素，食物過敏的敏感性可通過糞菌移植的方式在不同種屬的宿