FBXL20在癲癇患者及大鼠動物模型中的表達和作用研究.pdf

1、目的：E3泛素連接酶FBXL20(F-box and leucine-rich repeat protein20)通過調(diào)控突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白1(regulating synaptic membrane exocytosis1，RIM1)的代謝來調(diào)節(jié)突觸囊泡的釋放，參與了多種神經(jīng)退行性疾病的病理生理過程。目前尚不清楚 FBXL20是否也參與了癲癇的病理過程中。本研究通過檢測 FBXL20及 RIM1在顳葉癲癇患者皮質(zhì)及匹魯卡品癲癇大鼠

2、腦組織中的表達變化，并在動物模型中通過慢病毒過表達FBXL20，探討FBXL20與癲癇的關系及意義。
　　方法：1.表達部分：以顳葉癲癇患者手術切除病灶標本（n=25）為癲癇組,以腦外傷減壓手術所切皮質(zhì)標本（n=10）為對照組；40只 SD大鼠(約200g)采用腹腔給藥的方式，注射匹魯卡品（127 mg/kg）,2周后出現(xiàn)癲癇自發(fā)發(fā)作的大鼠納入癲癇模型組；2月后仍未出現(xiàn)癲癇自發(fā)發(fā)作的大鼠納入對照組。采用免疫熒光對 FBXL20的表

3、達進行定位；免疫組化檢測FBXL20的表達水平；Western blot檢測FBXL20、RIM1的表達水平。2.干預部分：①癲癇動物模型慢性期自發(fā)性發(fā)作行為學觀察：SD大鼠在匹魯卡品造模達到癲癇發(fā)作標準后隨機分為三組：海馬立體定向注射慢病毒空載體組（EP+LV-empty）、海馬立體定向注射慢病毒 FBXL20組（EP+LV-FBXL20）、假手術組（EP），持續(xù)視頻監(jiān)測記錄大鼠癲癇Racine評分及潛伏期。②慢病毒干預后檢測FBXL

4、20下游指標RIM1的表達水平變化。
　　結(jié)果：免疫熒光結(jié)果顯示 FBXL20主要表達于神經(jīng)元；免疫組化及Western blot結(jié)果均顯示癲癇患者皮質(zhì)、癲癇動物模型皮質(zhì)與海馬中FBXL20表達較對照組明顯下降（P＜0.05）；免疫印跡示過表達組RIM1較對照組明顯升高（P＜0.05）。匹魯卡品誘導出現(xiàn)癲癇自發(fā)性發(fā)作后（14-60d），LV-FBXL20組平均Racine評分較LV-empty組、sham組降低，潛伏期顯著延長（