溫度休克誘導(dǎo)黃顙魚(yú)三倍體及其倍性鑒定研究.pdf

1、黃顙魚(yú)是我國(guó)重要的小型經(jīng)濟(jì)魚(yú)類，它具有無(wú)肌間刺、肉質(zhì)細(xì)嫩、肉味鮮美、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高等優(yōu)點(diǎn)。但是黃顙魚(yú)個(gè)體較小，生長(zhǎng)速度較慢，這使其養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展受到了一定程度的限制。諸多學(xué)者的相關(guān)研究表明，多倍體魚(yú)尤其是三倍體魚(yú)在多種魚(yú)類中可能表現(xiàn)出比二倍體更符合人們養(yǎng)殖需要的生長(zhǎng)和繁殖性狀，其正在成為魚(yú)類育種、魚(yú)類性狀改良等方面研究的目標(biāo)。同樣基于這種期望，多年來(lái)，本課題組一直致力于黃顙魚(yú)多倍體育種工作，現(xiàn)將近期所做的主要工作以及取得的主要成果介紹如下：<

2、br>　　 1．采用冷休克誘導(dǎo)三倍體的方法，單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)誘導(dǎo)起始時(shí)間（TA）以1 min為梯度，1～6 min范圍取值，處理溫度（T）以3℃為梯度，0～12℃范圍取值，持續(xù)時(shí)間（D）以5 min為梯度，5～50 min范圍取值，綜合考慮原腸期成活率、孵化率、畸形率、非整倍體率、三倍體誘導(dǎo)率以及幼魚(yú)時(shí)期三倍體的檢出率等指標(biāo)得出：受精后2 min，5℃，處理20 min的誘導(dǎo)優(yōu)化參數(shù)，其胚胎時(shí)期的三倍體誘導(dǎo)率高達(dá)70％；正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)TA

3、取值1、2、3 min，T取值4、5、6℃，D取值15、20、25 min，得出的優(yōu)化誘導(dǎo)參數(shù)與單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)一致，三倍體誘導(dǎo)率相近，并且幼魚(yú)時(shí)期三倍體（含嵌合體）的檢出率為25％。正交分析表明，起始休克時(shí)間是原腸期三倍化率和孵化率的重要影響因子，冷休克條件下溫度對(duì)畸形個(gè)體的產(chǎn)生有重要影響。
　　 2．熱休克正交試驗(yàn)中設(shè)定TA為1、2、3 min，T為38、40、42℃，D為1、2、3 min，結(jié)果表明受精后2 min，40℃處

4、理2 min的條件下，胚胎時(shí)期三倍體誘導(dǎo)率近60％，幼魚(yú)時(shí)期三倍體檢．出率達(dá)40％～50％，非整倍體發(fā)生率較低，為誘導(dǎo)操作的優(yōu)化指標(biāo)。分析得出：參考三倍體率、畸形率、孵化期相對(duì)存活率三者而言，休克溫度均是重要因素，次之為起始休克時(shí)間，以及持續(xù)時(shí)間。
　　 3．冷、熱休克兩種誘導(dǎo)方法比較得出：冷休克處理組中早期的誘導(dǎo)率較高，但各期成活率較低，畸形個(gè)體較多，說(shuō)明此法對(duì)胚胎的刺激較大，同時(shí)可能影響到后期成活率，幼魚(yú)時(shí)期的成活率和倍性檢

5、出率明顯較低。熱休克處理法總體上優(yōu)于冷休克處理法。
　　 4．本試驗(yàn)擇優(yōu)選取的幼魚(yú)尾鰭短期培養(yǎng)條件為：以AIM培養(yǎng)液對(duì)培養(yǎng)組織滅菌，添加生長(zhǎng)因子30℃進(jìn)行短期培養(yǎng)；擇優(yōu)選取的培養(yǎng)細(xì)胞染色體制片條件為：0.5μg/mL秋水仙素處理2～3 h后，用0.075 M KCl低滲40 min。實(shí)驗(yàn)證明采用幼魚(yú)尾鰭細(xì)胞短期培養(yǎng)的方法為制備染色體提供材料，能夠以對(duì)魚(yú)體最小的損傷獲得高質(zhì)量的圖片，同時(shí)能夠給工作者以寬裕的時(shí)間、充分的材料進(jìn)行深入

6、的研究。
　　 5．以鰭組織或血細(xì)胞為樣品采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行倍性鑒定的結(jié)果與染色體計(jì)數(shù)法所得一致，都能準(zhǔn)確的檢測(cè)出魚(yú)體的倍性，但是以鰭組織為樣品所得直方圖主峰較寬，CV值較大，相比之下，血細(xì)胞樣品離散型好，操作方便，所得效果較好，所需樣品用量也較少。
　　 6．誘導(dǎo)處理組在胚胎發(fā)育時(shí)期發(fā)現(xiàn)了單倍體和非整倍體，但在幼魚(yú)時(shí)期未檢測(cè)到，說(shuō)明單倍體和非整倍體可能只是在胚胎期前后暫時(shí)存在，不能發(fā)育成真正的個(gè)體，只是休克誘導(dǎo)效應(yīng)的副