溫度休克誘導黃顙魚三倍體及其倍性鑒定研究.pdf

1、黃顙魚是我國重要的小型經(jīng)濟魚類，它具有無肌間刺、肉質(zhì)細嫩、肉味鮮美、營養(yǎng)價值高等優(yōu)點。但是黃顙魚個體較小，生長速度較慢，這使其養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展受到了一定程度的限制。諸多學者的相關研究表明，多倍體魚尤其是三倍體魚在多種魚類中可能表現(xiàn)出比二倍體更符合人們養(yǎng)殖需要的生長和繁殖性狀，其正在成為魚類育種、魚類性狀改良等方面研究的目標。同樣基于這種期望，多年來，本課題組一直致力于黃顙魚多倍體育種工作，現(xiàn)將近期所做的主要工作以及取得的主要成果介紹如下：<

2、br>　　 1．采用冷休克誘導三倍體的方法，單因素試驗設計誘導起始時間（TA）以1 min為梯度，1～6 min范圍取值，處理溫度（T）以3℃為梯度，0～12℃范圍取值，持續(xù)時間（D）以5 min為梯度，5～50 min范圍取值，綜合考慮原腸期成活率、孵化率、畸形率、非整倍體率、三倍體誘導率以及幼魚時期三倍體的檢出率等指標得出：受精后2 min，5℃，處理20 min的誘導優(yōu)化參數(shù)，其胚胎時期的三倍體誘導率高達70％；正交試驗設計TA

3、取值1、2、3 min，T取值4、5、6℃，D取值15、20、25 min，得出的優(yōu)化誘導參數(shù)與單因素試驗設計一致，三倍體誘導率相近，并且幼魚時期三倍體（含嵌合體）的檢出率為25％。正交分析表明，起始休克時間是原腸期三倍化率和孵化率的重要影響因子，冷休克條件下溫度對畸形個體的產(chǎn)生有重要影響。
　　 2．熱休克正交試驗中設定TA為1、2、3 min，T為38、40、42℃，D為1、2、3 min，結果表明受精后2 min，40℃處

4、理2 min的條件下，胚胎時期三倍體誘導率近60％，幼魚時期三倍體檢．出率達40％～50％，非整倍體發(fā)生率較低，為誘導操作的優(yōu)化指標。分析得出：參考三倍體率、畸形率、孵化期相對存活率三者而言，休克溫度均是重要因素，次之為起始休克時間，以及持續(xù)時間。
　　 3．冷、熱休克兩種誘導方法比較得出：冷休克處理組中早期的誘導率較高，但各期成活率較低，畸形個體較多，說明此法對胚胎的刺激較大，同時可能影響到后期成活率，幼魚時期的成活率和倍性檢

5、出率明顯較低。熱休克處理法總體上優(yōu)于冷休克處理法。
　　 4．本試驗擇優(yōu)選取的幼魚尾鰭短期培養(yǎng)條件為：以AIM培養(yǎng)液對培養(yǎng)組織滅菌，添加生長因子30℃進行短期培養(yǎng)；擇優(yōu)選取的培養(yǎng)細胞染色體制片條件為：0.5μg/mL秋水仙素處理2～3 h后，用0.075 M KCl低滲40 min。實驗證明采用幼魚尾鰭細胞短期培養(yǎng)的方法為制備染色體提供材料，能夠以對魚體最小的損傷獲得高質(zhì)量的圖片，同時能夠給工作者以寬裕的時間、充分的材料進行深入

6、的研究。
　　 5．以鰭組織或血細胞為樣品采用流式細胞儀進行倍性鑒定的結果與染色體計數(shù)法所得一致，都能準確的檢測出魚體的倍性，但是以鰭組織為樣品所得直方圖主峰較寬，CV值較大，相比之下，血細胞樣品離散型好，操作方便，所得效果較好，所需樣品用量也較少。
　　 6．誘導處理組在胚胎發(fā)育時期發(fā)現(xiàn)了單倍體和非整倍體，但在幼魚時期未檢測到，說明單倍體和非整倍體可能只是在胚胎期前后暫時存在，不能發(fā)育成真正的個體，只是休克誘導效應的副