牙鲆和圓斑星鰈雜交三倍體誘導(dǎo)的初步研究.pdf

1、牙鲆（Paralichthys olivaceus）是我國重要的海水經(jīng)濟魚類，具有重要的商品價值。很多研究表明，三倍體魚類除了在生長等性狀方面的優(yōu)勢外，在生殖方面具有低育性和不育性。正是因為三倍體魚在生殖方面獨特的不育性，近年來伴隨分子生物學(xué)和基因重組技術(shù)的發(fā)展，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育帶有特異標(biāo)記的品系，對原始生殖細(xì)胞（PGC）進(jìn)行標(biāo)記、分離，經(jīng)過顯微操作技術(shù)實現(xiàn)原始生殖細(xì)胞的移植，在魚類生殖細(xì)胞移植方面不育的三倍體可以作為理想的受體魚。不

2、育的三倍體魚在接受外源生殖細(xì)胞移植后，可以排除內(nèi)源性生殖細(xì)胞的干擾。本文以牙鲆和圓斑星鰈（Verasper variegatus）為研究對象，首先對圓斑星鰈的精子進(jìn)行了冷凍保存實驗，然后用靜水壓法誘導(dǎo)牙鲆（♀）×圓斑星鰈（♂）雜交三倍體和四倍體，篩選了最佳誘導(dǎo)條件，得到生殖細(xì)胞移植需要的三倍體。主要結(jié)果如下：
　　1.將圓斑星鰈精子收集后，超低溫冷凍保存，篩選出HBSS作為冷凍稀釋液，15％DMSO作為冷凍保護(hù)劑。對解凍后的圓斑星

3、鰈精子進(jìn)行受精實驗，受精率能達(dá)到（61.00±2.00）%，同時對精子激活后的運動率進(jìn)行了檢測，解凍后激活的精子的存活時間會顯著縮短，解凍后的精子的存活時間大約為150s，激活后的新鮮精子存活時間大約為250s。經(jīng)過冷凍后的精子其形態(tài)特征會受到損傷，其生理活性也會下降。
　　2.本研究利用牙鲆（♀）和圓斑星鰈（♂）的配子受精后，用靜水壓法抑制受精卵第二極體的排出，誘導(dǎo)雜交三倍體。并篩選出最佳的誘導(dǎo)條件。實驗證明，靜水壓法可以誘導(dǎo)出

4、牙鲆（♀）×圓斑星鰈（♂）雜交三倍體，誘導(dǎo)率主要受到受精后處理起始時刻、處理壓強和壓強處理時間三個因素的影響。靜水壓法的最佳誘導(dǎo)條件為：在海水溫度為15℃±0.2℃時，受精后3min起，以70MPa壓力處理6min，此時相對孵化率為（24.06±1.10）%，利用倍性分析儀對其進(jìn)行倍性鑒定，三倍體率為（26.67±6.67）%。染色體分析表明，三倍體胚胎的染色體數(shù)目為71條，對照組二倍體胚胎的染色體數(shù)目為47條。還發(fā)現(xiàn)了少量染色體數(shù)目為