祁連山青海云杉天然群體遺傳多樣性ISSR分析.pdf

1、青海云杉（Picea crassifolia kom．）是我國(guó)特有樹種，在西北地區(qū)分布廣闊。歷史上天然林遭受過強(qiáng)度破壞，有的遺傳資源已經(jīng)丟失，要對(duì)現(xiàn)有天然群體進(jìn)行科學(xué)保護(hù)和合理利用，必須首先弄清其種內(nèi)遺傳多樣性和遺傳分化，為種質(zhì)資源保存和該樹種的遺傳改良提供理論依據(jù)和基礎(chǔ)資料。 根據(jù)祁連山青海云杉天然群體的資源分布和實(shí)地調(diào)查結(jié)果，在祁連山分布區(qū)內(nèi)選取了10個(gè)天然群體，通過ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)青海云杉天然群體的遺傳多樣性進(jìn)行了研

2、究。 研究結(jié)果如下： 1．青海云杉ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立 以青海云杉基因組DNA為材料，對(duì)影響其PCR擴(kuò)增結(jié)果的各個(gè)因素（Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、模板DNA、引物、退火溫度）進(jìn)行篩選和優(yōu)化，最終確定適應(yīng)于青海云杉ISSR-PCR反應(yīng)的最佳反應(yīng)體系。在20μL反應(yīng)體系中包含1μL10×buffer，1．5 mmol/L的Mg2+，0．2mmol/L的dNTPs，TaqDNA聚合酶1．0U，

3、模板DNA40ng，引物0．6μmol/l，。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性4min，94℃變性45s，48-58℃退火（退火溫度隨引物而定）1min，72℃延伸2min，40個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min。 2．青海云杉天然群體遺傳多樣性分析 應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)10個(gè)群體共169個(gè)個(gè)體進(jìn)行了遺傳多樣性分析。從50條引物中篩選出10條引物。10條ISSR引物共擴(kuò)增到120個(gè)位點(diǎn)，其中83個(gè)是多態(tài)性位點(diǎn)，總的多態(tài)性位點(diǎn)

4、百分率（PPL）為69．17%。Nei's基因多樣性指數(shù)（He）為0．2128，Shannom多態(tài)性信息指數(shù)（D為0．3219。10個(gè)不同群體的遺傳多樣性水平差異不大。群體多態(tài)性位點(diǎn)百分率在36．67%-59．17%之間，Nei's基因多樣性指數(shù)為0．1263-0．1863，Shannom多態(tài)性信息指數(shù)為0．1915-0．2823。10個(gè)群體間的遺傳分化系數(shù)Gst為0．2897，說明群體間存在一定程度的遺傳分化，群體間基因流Nm為0．6