林蔭銀蓮花組培快繁體系的建立和形態(tài)發(fā)生的研究.pdf

1、林蔭銀蓮花（Anemone flaccida Fr．Schmidt）屬銀蓮花屬（Anemone）植物，其干燥根莖又名地烏?？扇胨帲哂徐铒L(fēng)濕、助筋骨、消腫止痛等功效。本研究應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)首次建立了林蔭銀蓮花快速繁殖技術(shù)體系，并對(duì)其愈傷組織的誘導(dǎo)和形態(tài)發(fā)生過(guò)程進(jìn)行了細(xì)胞組織學(xué)鑒定，為林蔭銀蓮花的組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)提供可行技術(shù)。主要研究結(jié)果如下：
　　 （1）1.5％的多菌靈浸泡2 h，可有效預(yù)防真菌污染；以0.2％的HgCl

2、2消毒9 min能夠有效控制污染，且對(duì)外植體傷害小；在培養(yǎng)基中添加300 mg/L頭孢噻肟鈉，對(duì)污染的控制效果達(dá)到顯著水平，且對(duì)外植體的生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制作用；
　　 （2）1/2芽為外植體誘導(dǎo)率最高，未展開(kāi)葉片的誘導(dǎo)率比展開(kāi)葉片誘導(dǎo)率高；葉柄只有極少數(shù)可在基部產(chǎn)生愈傷組織，但培養(yǎng)兩個(gè)月后死亡。確定以根狀莖萌發(fā)的健康芽為最佳外植體。
　　 （3）細(xì)胞分裂素類(lèi)物質(zhì)6-BA與生長(zhǎng)素類(lèi)組合的愈傷誘導(dǎo)效果比ZT與生長(zhǎng)素組合的效果好；

3、生長(zhǎng)素類(lèi)物質(zhì)NAA與6-BA組合的愈傷誘導(dǎo)效果比IBA與6-BA組合的效果好；6-BA和ZT二者與生長(zhǎng)素組合，誘導(dǎo)率反而下降。
　　 （4）不同激素配比對(duì)林蔭銀蓮花的器官分化影響顯著。培養(yǎng)基中單獨(dú)添加6-BA，只誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽；R4（0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L6-BA）和R5（0.2 mg/LNAA+2.0 mg/L6-BA）培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽的同時(shí)也誘導(dǎo)產(chǎn)生了擬球莖，以R5擬球莖誘導(dǎo)率最高；當(dāng)生長(zhǎng)素NAA增

4、加到0.5 mg/L時(shí)，R6（0.5 mg/L NAA+1.0mg/L6-BA）和R7（0.5 mg/L NAA+2.0 mg/L6-BA）中，不定芽和擬球莖的誘導(dǎo)率均沒(méi)有提高，反而有下降的趨勢(shì)；當(dāng)生長(zhǎng)素NAA濃度增加到1 mg/L時(shí)，R8（1 mg/L NAA+1.0mg/L6-BA）已經(jīng)沒(méi)有擬球莖產(chǎn)生，R8和R9（1 mg/LNAA+2.0mg/L6-BA）只有少量的不定芽產(chǎn)生；R10的誘導(dǎo)率極低，偶有少量擬球莖產(chǎn)生。
　　

5、 （5）不同的基本培養(yǎng)基對(duì)外植體生長(zhǎng)影響明顯。在MS培養(yǎng)基上外植體長(zhǎng)勢(shì)好；其次是B5培養(yǎng)基；White、Nitsch培養(yǎng)基效果較差。不同基本培養(yǎng)基上，外植體褐化情況也不同。外植體在MS、B5培養(yǎng)基上褐化較少，而在White、Nitsch、N6上褐化較嚴(yán)重。
　　 （6）不定芽及擬球莖生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，以5℃為適宜的溫度條件，即使沒(méi)有添加激素，仍有較高的生根率和單芽生根數(shù)；在18℃條件下，生根率和單芽生根數(shù)都降低。1/2MS培養(yǎng)基中添

6、加0.2 mg/L NAA，生根率和單芽生根數(shù)達(dá)到最大，但是根較細(xì)；1/2MS培養(yǎng)基中添加0.5 mf/L IBA的處理，單芽生根數(shù)較少，但是根較粗。
　　 （7）在培養(yǎng)基Ⅰ（MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA）和培養(yǎng)基Ⅱ（MS+2.0mg/L6-BA+1.0 mg/L NAA）上培養(yǎng)的材料，每4天取一次材料，觀(guān)察愈傷組織誘導(dǎo)和形態(tài)發(fā)生情況。24 d后，培養(yǎng)基Ⅰ開(kāi)始誘導(dǎo)產(chǎn)生紫色愈傷組織，培養(yǎng)基Ⅱ中培養(yǎng)28