雞輸卵管特異性表達(dá)人組織型纖溶酶原激活劑的研究.pdf

1、利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)制造生物反應(yīng)器來(lái)生產(chǎn)人類(lèi)藥用蛋白將在生物學(xué)基礎(chǔ)研究和生物技術(shù)的開(kāi)發(fā)方面有廣泛的應(yīng)用。目前有許多人類(lèi)藥用蛋白如單克隆抗體利用工業(yè)生物反應(yīng)器生產(chǎn)，但這種體系的建立非常耗時(shí)間而且比較昂貴。隨著人們對(duì)藥用蛋白日益增長(zhǎng)的需要，研制一種經(jīng)濟(jì)有效的生產(chǎn)藥用蛋白的生物反應(yīng)器成為了新的研究熱點(diǎn)。利用家禽作為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的好處有生產(chǎn)周期短，容易管理和規(guī)模化而且很經(jīng)濟(jì)。目前很多研究中應(yīng)用胚胎干細(xì)胞技術(shù)制作轉(zhuǎn)基因嵌合體，但家禽轉(zhuǎn)基因體系還未成熟。<

2、br>　　 本實(shí)驗(yàn)用PCR法從中國(guó)伊莎褐蛋雞基因組DNA中擴(kuò)增出卵清蛋白基因的2.8kb特異性條帶。將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆入pMD-18-T載體進(jìn)行序列測(cè)定，結(jié)果證明我們正確克隆了雞卵清蛋白基因調(diào)控區(qū)。將克隆得到的雞卵清蛋白啟動(dòng)子插入由本實(shí)驗(yàn)室保存的一表達(dá)質(zhì)粒中構(gòu)建成雞輸卵管特異表達(dá)載體，新質(zhì)粒命名為pL-OV2.8t-PAGFP。將構(gòu)建的載體與脂質(zhì)體混合后制備轉(zhuǎn)染液，轉(zhuǎn)染雞原代輸卵管上皮細(xì)胞和3T3細(xì)胞進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)。結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)中構(gòu)建的表