轉MiARF2基因對煙草和擬南芥不定根形成的影響.pdf

1、MiARF2基因是從芒果子葉橫切段的不定根形成所克隆的生長素反應因子ARF2類基因，已證明它與芒果子葉切段不定根的形成有關，為上調表達或誘導表達基因。本文研究轉MiARF2基因的煙草和擬南芥不定根發(fā)生的能力變化，分析MiARF2基因在不定根形成過程中的生物學功能。主要的研究結果如下： 1.經過Basta(6 mg/L)的抗性篩選及葉片PCR分析，從一批待檢測的擬轉MiARF2基因煙草株系中初步篩選出3個株系(B1、B2、B3株系

2、)，并通過Southern雜交證明外源MiARF2基因已整合到煙草基因組中，且在3個轉基因煙草株系中均為單位點插入。RT—PCR證明外源MiARF2基因在轉基因株系中均可正常轉錄。 2.以轉MiARF2基因煙草三個株系的T1代種子在光照條件下萌發(fā)并培養(yǎng)30天左右，生長至約5 cm的無菌苗的葉片切塊(1 cm×1 cm)為外植體，接種至不定芽誘導培養(yǎng)基上，在28℃光照條件下培養(yǎng)，待不定芽高度為1 cm左右時，將其接種于生根培養(yǎng)基中

3、，對不定根發(fā)生能力進行比較。結果發(fā)現，轉入MiARF2基因的煙草其第一條不定根出現時間早于野生型約1天。生根培養(yǎng)15天不定根數量相對于野生型沒有顯著變化。但生根培養(yǎng)30天后，轉MiARF2基因的煙草3個株系的不定根根長比野生型(對照)分別增加了29.3％、30.2％、30.4％，達到顯著效果(n=12，P<0.05)；而其不定根的干重也比對照的分別增加31.0％、33.0％、35.7％(n=12,P<0.05)。 3.以轉MiA

4、RF2基因的擬南芥三個株系的T4代自交純合子為測試樣本，野生型擬南芥(Arabidopsis thaliana，Col)為對照，將種子在光照條件下萌發(fā)，分別切取種子萌發(fā)12-14天的植株的下胚軸(長約5 mm)，接種于含0.5 mg/L IBA的MS培養(yǎng)基中，28℃黑暗培養(yǎng)12天。經測量及統計分析后得出的結果為：轉基因擬南芥與野生型株系不定根數均為1-2根，轉基因擬南芥的不定根比野生型不定根長26.7％左右(n=28，P＜0.05)。