奶牛胚胎移植技術(shù)對(duì)比研究和生產(chǎn)體系建立.pdf

1、本文通過(guò)對(duì)影響這些關(guān)鍵環(huán)節(jié)的技術(shù)進(jìn)行對(duì)比研究，進(jìn)而探討適宜的生物技術(shù)，為奶牛胚胎移植產(chǎn)業(yè)化提出高效能、低成本、穩(wěn)定和操作簡(jiǎn)便的技術(shù)體系；對(duì)一些相關(guān)的胚胎生物技術(shù)，如活體采卵、體外受精、胚胎性別鑒定等技術(shù)進(jìn)行了研究探討。研究的主要內(nèi)容：(一)誘導(dǎo)奶牛同期發(fā)情試劑和相關(guān)技術(shù)的對(duì)比研究。(二)提高牛超數(shù)排卵效果技術(shù)研究。(三)牛胚胎移植的主要影響因素研究。(四)活體采卵(OPU)及體外受精(IVF)技術(shù)的應(yīng)用研究。(五)奶牛胚胎性別鑒定技術(shù)的

2、應(yīng)用研究。 誘導(dǎo)奶牛同期發(fā)情試劑和相關(guān)技術(shù)的對(duì)比研究：用含孕酮陰道栓、PG等幾種方法，對(duì)不同狀況的牛群進(jìn)行同期發(fā)情處理，根據(jù)發(fā)情率、黃體合格率、受體移植可用率、妊娠率以及超數(shù)排卵獲取的可用胚數(shù)，進(jìn)行發(fā)情程度、效果的對(duì)比分析研究。研究結(jié)果表明：不同方法的誘導(dǎo)發(fā)情完全可以替代自然發(fā)情，孕酮陰道栓加PG誘導(dǎo)發(fā)情的方法不受發(fā)情周期的限制，可以隨時(shí)進(jìn)行處理，國(guó)產(chǎn)的孕酮海綿栓和進(jìn)口的CIDR對(duì)發(fā)情程度的影響差異不顯著，用國(guó)產(chǎn)孕酮海綿栓完全可

3、以替代進(jìn)口CIDR，成本下降70％左右；在不同的牛群，營(yíng)養(yǎng)狀況水平較高的牛群同期發(fā)情水平極顯著高于其他牛群，本結(jié)論對(duì)胚胎移植的供、受體牛的選擇具有重要意義。產(chǎn)犢超過(guò)3個(gè)月的經(jīng)產(chǎn)牛的同期發(fā)情率都顯著高于產(chǎn)犢不足3個(gè)月的經(jīng)產(chǎn)牛的同期發(fā)情率(P＜0.01)。 提高牛超數(shù)排卵效果技術(shù)研究：在自然發(fā)情周期的第9天，開(kāi)始注射FOLLITROPIN-V超排處理，超排反應(yīng)最佳，按不同時(shí)間注射相同劑量FOLLITROPIN-V，在第9天注射所獲得

4、的受精卵每頭平均12枚、可用胚每頭平均6.8枚，顯著的高于3天、6天、12天所獲得的數(shù)量(P＜0.05)；應(yīng)用含孕激素陰道拴+雌激素+孕激素處理后，超排效果顯著高于單獨(dú)使用陰道拴組和陰道拴配合孕激素組，說(shuō)明雌激素對(duì)超排具有明顯促進(jìn)作用；應(yīng)用陰道拴配合雌激素和孕激素處理后超排，與在發(fā)情周期的第8-12天開(kāi)始的傳統(tǒng)超排方法比較，結(jié)果差異顯著(P＜0.05)；應(yīng)用進(jìn)口陰道拴CIDR和國(guó)產(chǎn)“牛歡”(海綿陰道栓)配合雌激素和孕激素處理后開(kāi)始超排，

5、對(duì)青年牛和成母牛超排反應(yīng)均沒(méi)有差異(P＞0.05)，國(guó)產(chǎn)的陰道海綿栓可以代替進(jìn)口的CIDR，成本下降70％左右；短期重復(fù)超排(間隔25天-28天)處理次數(shù)對(duì)超排效果與傳統(tǒng)方法比較差異不顯著(P＞0.05)，應(yīng)用陰道拴誘導(dǎo)卵泡波同步發(fā)生后開(kāi)始超排處理后可以提高重復(fù)超排處理次數(shù)，提高超排效率，增加胚胎年產(chǎn)量，采用重復(fù)超排技術(shù)，每年超排次數(shù)可高達(dá)10次，每頭?？赡戤a(chǎn)達(dá)60枚以上，而傳統(tǒng)方法只能達(dá)到4次左右，所獲得的可用胚胎也只有24枚左右。

6、 本文就影響牛體內(nèi)胚胎移植妊娠率的主要因素進(jìn)行研究分析，結(jié)果如下：1.5M乙二醇，10％的甘油和EFS40(玻璃化冷凍液)三種不同的胚胎冷凍法對(duì)受體的妊娠率沒(méi)有明顯的差別。在牛胚胎移植產(chǎn)業(yè)化中可相互補(bǔ)充，尤其乙二醇作為冷凍保護(hù)液，可以達(dá)到解凍后直接移植的目的，簡(jiǎn)化操作，便于大規(guī)模推廣應(yīng)用；致密桑椹胚的移植妊娠率略高于早期囊胚和囊胚，但三者的移植妊娠率差異不顯著(P＞0.05)；胚胎與受體的同步差±12小時(shí)內(nèi)不影響受體移植妊娠率，但

7、桑椹胚移植給發(fā)情6天以下和8天以上的受體以及早期囊胚和囊胚移植給不足7天和大于8天的受體，妊娠率均明顯降低(P＜0.05)；半胚、雙半胚和整胚移植妊娠率差異不顯著(P＞0.05)，但從產(chǎn)犢數(shù)/胚胎數(shù)的比例來(lái)看，三者的差異明顯(P＜0.05)，單半胚移植可明顯提高胚胎的利用率；草原放牧牛的移植妊娠率顯著低于草原放牧牛補(bǔ)料和標(biāo)準(zhǔn)舍飼牛的移植妊娠率(P＜0.01)，說(shuō)明不同管理水平對(duì)牛胚胎移植妊娠率有很大地影響；不同受體牛品種對(duì)胚胎移植妊娠率

8、也有一定影響，黃牛受體移植妊娠率顯著低于奶牛受體(P＜0.05)。 活體采卵(OPU)與體外受精(IVF)技術(shù)研究：研究結(jié)果表明，無(wú)論是青年母牛還是成年母牛，每周采兩次卵的頭均獲卵數(shù)高于每周一次，差異極顯著(P＜0.01)；成年牛每周兩次采卵頭均獲卵數(shù)顯著高于青年牛(P＜0.05)，抽吸負(fù)壓極顯著影響卵子回收率和優(yōu)質(zhì)卵子率(P＜0.01)，40mmHg負(fù)壓適宜采卵；應(yīng)用活體采卵技術(shù)可以對(duì)老齡牛、早期妊娠牛、繁殖障礙牛等進(jìn)行采卵，

9、但頭均獲卵數(shù)明顯低于健康牛，差異極顯著(P＜0.01)，建議在活體采卵前通過(guò)激素處理來(lái)促進(jìn)卵泡發(fā)育，以提高獲卵數(shù)。體外受精技術(shù)研究中，IVMD-101組無(wú)論是成熟率及受精率均高于TCM-199組，兩者差異極顯著(P＜0.01)。SOFaa發(fā)育液、IVMD-101發(fā)育液的培養(yǎng)效果相近，桑囊率差異不顯著，但顯著高于TCM-199組(P＜0.05)。 胚胎性別鑒定技術(shù)的研究：實(shí)驗(yàn)研究表明，切割法鮮胚移植妊娠率為50％，打孔法鮮胚移植妊