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文檔簡介
1、試驗與生產(chǎn)實際相結(jié)合,對肉用綿羊超數(shù)排卵和胚胎移生產(chǎn)技術(shù)體系進(jìn)行研究和應(yīng)用,并對相關(guān)理論進(jìn)行探討。 1.用從新西蘭引入的優(yōu)良綿羊品種波德代羊和無角陶賽特羊進(jìn)行試驗。用FSH和PMSG進(jìn)行超排,并分別用CIDR和陰道海棉栓對供、受體羊進(jìn)行同期發(fā)情處理。波德代羊和無角陶賽特羊分別于撤CIDR后18.81±2.49h、18.59±2.45h開始發(fā)情,兩品種間差異不顯著,用CIDR和陰道海棉栓處理的受體羊分別于撤栓后46.32±18.9
2、6h、51.04±22.03h發(fā)情,從撤栓到開始發(fā)情的時間間隔差異不顯著。 波德代羊和無角陶賽特羊的平均排卵數(shù)相近,但品種內(nèi)個體間排卵數(shù)目差異很大,波德代羊排卵1~20枚,其中以排7~12枚的羊只數(shù)為最多,占52.73﹪,陶賽特羊以排卵1~26枚,其中以排1~6枚卵的羊數(shù)為最多,占52.38﹪。 重復(fù)超排結(jié)果表明,波德代羊和無角陶賽特羊第一次和第二次超排后所獲得的平均胚胎數(shù)分別為7.00枚、5.62枚和8.00枚、9.0
3、8枚,其中有效胚胎分別占回收總數(shù)的61.90﹪、72.60﹪和87.50﹪、88.10﹪。 配種后7天從波德代和無角陶賽特供體羊上所沖取的胚胎,以桑椹胚為最多,分別占回收總胚的66.24﹪、75.78﹪。配種后8天從波德代和無角陶賽特供體羊上所沖取的胚胎,以擴(kuò)展囊胚和孵出囊胚為最多,分別占從兩品種羊上所回收總胚的38.92﹪、22.33﹪和25.89﹪、31.75﹪。綿羊經(jīng)超排處理后,從波德代羊和無角陶賽特羊兩側(cè)子宮所獲取的胚胎
4、數(shù)目差異不顯著,左側(cè)獲得胚胎數(shù)分別占總數(shù)的47.4﹪和51.9﹪,右側(cè)分別占為52.59﹪和48.10﹪。 不同配種體系對超排供體羊配種結(jié)果表明,人工授精技術(shù)應(yīng)用于綿羊的胚胎移植生產(chǎn),能獲得較高的受精卵數(shù)(平均受精卵數(shù)8.11枚),顯著高于本交與人工授精的不同組合的配種方法所獲得的受精卵數(shù)(5.73枚和5.11枚)。相反,所獲取的平均未受精卵數(shù)顯著低于其他兩種方法(0相對于1.88枚和1.15枚)。 兩種超排方法所獲得的
5、超排結(jié)果表明,F(xiàn)SH減量注射4天、PMSG一次注射法(A)和FSH恒量連續(xù)注射4天、PMSG兩次注射法(B)在波德代羊和無角陶賽特羊上所獲得的平均胚胎數(shù)分別為7.44枚、6.42枚和8.17枚、9.08枚,其中有效胚胎分別占回收總胚胎的71.64﹪、78.57﹪和79.77﹪、82.11﹪。 2.增加移植胚胎的數(shù)目能顯著增加受體羊的產(chǎn)羔率,移植時受體羊的黃體數(shù)目不影響其妊娠率和胚胎成活率。用胚胎分割儀二分胚切割胚胎,擴(kuò)展囊胚移植
6、成活率為53.33﹪。對與供體羊同期和非同期處理受體進(jìn)行胚胎移植,表明,與供體羊同期處理的受體、比供體羊提前一天處理的受體、比供體羊晚一天處理的受體和比供體羊提前2天處理的受體移植胚胎后,移植單胚和雙胚胎成活率分別為64.18﹪和55.44﹪、56.93﹪和33.33﹪、54.5﹪和43.33﹪、20.00﹪和16.67﹪。 不同發(fā)育階段的胚胎移植成活率研究結(jié)果表明,供、受體同期處理,且供、受體發(fā)情同步差在0~12h內(nèi),移植后擴(kuò)
7、展囊胚和囊胚成活率分別為87.50﹪和82.35﹪,顯著高于移植桑椹胚、8-C期的胚胎和孵出胚的70.19﹪、60﹪和44.44﹪。此組受體羊的妊娠率大于50﹪,高達(dá)94.74﹪。供、受體同步處理,發(fā)情同步差在12~24h內(nèi),移植后囊胚成活率為70.83﹪,高于移植擴(kuò)展囊胚的60﹪、桑椹胚的50.67﹪、孵出囊胚的33.33﹪,其中移植囊胚后受體羊的妊娠率最高為66.67﹪。供、受體同步處理,發(fā)情同步差在24~36h內(nèi),移植后桑椹胚的成
8、活率35.90﹪、囊胚23.08﹪,擴(kuò)展囊胚為12.50﹪。供、受體同步處理,發(fā)情同步著大于36h,胚胎移植后,胚胎成活率均小于20﹪。 供、受體發(fā)情同步差的大小影響移植胚胎的成活率和受體羊的妊娠率。同期處理的供、受體羊進(jìn)行胚胎移植后,均以發(fā)情同步差在0~12h內(nèi)的受體羊妊娠率和胚胎成活率為最高,其值為75.94﹪和65.74﹪,其次為同步差在12~24h,受體羊的妊娠率和胚胎成活率分別為61.46﹪和55.88﹪;同步差大于2
9、4h以上,受體羊的妊娠率和胚胎成活率顯著下降。 3.用放射免疫法測定相關(guān)激素、細(xì)胞因子和生化物質(zhì)水平,不同組間所測物質(zhì)含量的差異是預(yù)測超排效果的重要信息。配種日,超排無反應(yīng)組羊血清中FSH水平顯著低于超排有反應(yīng)組和對照組(P<0.05),而雌激素水平卻高于超排有反應(yīng)組。超排無反應(yīng)供體羊血清中孕酮水平的變化與超排有反應(yīng)組的變化趨勢相反,反映出卵泡發(fā)育的不同步而導(dǎo)致孕酮水平的變化不同。超排無反應(yīng)組供體羊血清中IL-1β高于超排有反應(yīng)
10、組和對照組(P<0.05),而IL-6、TGF-α、IGF-Ⅱ低于超排有反應(yīng)組和對照組。EGF在超排有反應(yīng)組利超排無反應(yīng)組的著異不顯著(P>0.05),并且與LH的變化趨勢相似。超排處理后,血清膽固醇含量下降,但超排有反應(yīng)組和超排無反應(yīng)組差異不顯著。 通過對綿羊妊娠期(0、30、45、60、75、90、105、120、137天)激素及細(xì)胞因子水平的測定,結(jié)果表明,妊娠早期(妊娠45天左右),早期流產(chǎn)受體羊血清中的FSH、LH、P
11、RL、E2、EGF的水平顯著高于胚胎移植妊娠成功受體和非胚胎移植妊娠成功綿羊(P<0.05),而孕酮水平卻低于妊娠成功各組。血清膽固醇、鈣在妊娠失敗組低于妊娠成功組。其他細(xì)胞因子、生化物質(zhì)在各組差異不顯著。相關(guān)激素、細(xì)胞因子利生化物質(zhì)在妊娠組與非妊娠組間存在差異性,這種差異為預(yù)測胚胎移植受體2情期后能否繼續(xù)妊娠提供有價值的參考信息。 綿羊妊娠期,血清EGF-Ⅱ、膽固醇和鉀在非移植妊娠綿羊血清中水平顯著低于胚胎移植妊娠受體,血清葡
12、萄糖高于胚胎移植妊娠受體,PRL在胚胎移植妊娠受體羊中30~45天期間低于非胚胎移植妊娠綿羊外,其他測定激素及細(xì)胞因子在妊娠前期(0~45天)和妊娠中期(45~90天)基本一致。上述差異可能與不同類型胚胎在母體內(nèi)生長發(fā)育速度不同而影響母體相關(guān)物質(zhì)分泌或代謝有關(guān)。 在現(xiàn)代規(guī)?;B(yǎng)羊生產(chǎn)實踐中,建立了以“周密的組織管理+有效的供、受體同期發(fā)情和超排技術(shù)+可靠的供體羊配種技術(shù)+借助腹腔鏡采卵技術(shù)+精湛的胚胎移植技術(shù)+供、受體羊良好的飼
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