茶樹抗性相關(guān)蛋白(Cs-cystatin,Cs-Rip)對(duì)假眼小綠葉蟬消化道組織的影響.pdf

1、假眼小綠葉蟬（Empoascavitis）屬半翅目(Hemiptera)，葉蟬科(Cicadellidae)是中國茶區(qū)分布最廣、危害最重的一種茶樹害蟲，一般可造成減產(chǎn)15％左右，嚴(yán)重時(shí)甚至可達(dá)50％。所以，如何有效防治該害蟲是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。盡管目前對(duì)該物種有較多的研究，但就其分類歸屬問題一直存在爭議;此外，在防治方法的建立方面很難兼顧生態(tài)安全性和防治有效性。據(jù)此，本文綜合運(yùn)用形態(tài)學(xué)和分子鑒定技術(shù)對(duì)該物種進(jìn)行重新描述;應(yīng)用分子生物學(xué)和組

2、織病理學(xué)技術(shù)探討了兩種茶樹抗性蛋白(Cs-Cystatin、Cs-RIP)對(duì)該害蟲的毒性作用;以期為相關(guān)研究工作提供樣本標(biāo)準(zhǔn)和參照以及為開發(fā)新型防治技術(shù)提供技術(shù)支撐。
　　研究結(jié)果顯示:
　　(1)形態(tài)學(xué)描記:假眼小綠葉蟬通體淡綠或黃綠色，頭部及前胸背板無白色斑紋。前翅淡黃綠色，翅端透明;后翅整體透明，翅脈淡黃色。足部與體呈同色，各足脛節(jié)端部灰色或褐色。雌性腹部末端具產(chǎn)卵瓣，雄性具三角形骨板（基瓣）。分子鑒定:獲取了假眼小綠

3、葉蟬的28SrDNA序列，系統(tǒng)發(fā)育分析表明該物種與小葉蟬屬Typhlocybaserrata的親緣關(guān)系最近。此外還克隆了ITS2序列，通過在GenBank中比對(duì)確認(rèn)為葉蟬科昆蟲首次獲得序列。
　　(2)從茶樹（Camelliasinensis）中克隆了半胱氨酸蛋白酶抑制劑基因（Cs-Cystatin）和核糖體失活蛋白基因（Cs-RIP），前者共306bp堿基，編碼101aa的蛋白質(zhì);后者共1713bp堿基，編碼570aa的蛋白質(zhì)。

4、通過構(gòu)建體外表達(dá)系統(tǒng)，成功獲取Cs-Cystatin和Cs-RIP蛋白。通過在培養(yǎng)基中添加這兩種抗性蛋白喂飼假眼小綠葉蟬表明Cs-RIP顯著地降低了其存活率，而Cs-Cystatin的效果不明顯。通過組織病理切片觀察發(fā)現(xiàn)取食含有Cs-RIP培養(yǎng)基的假眼小綠葉蟬其食管劇烈收縮并凝結(jié)成塊，前中腸腔體顯著收縮、壁上的絨毛突起解體并落入腸腔;隨著取食時(shí)間的增加，胸部的飛行肌也開始出現(xiàn)解體現(xiàn)象。而飼喂Cs-Cystain的組織切片中，未發(fā)現(xiàn)消化道