青蒿揮發(fā)油抗植物病原真菌活性及作用機(jī)理的初步研究.pdf

1、本課題通過對青蒿(Artemisia annua L.)揮發(fā)油進(jìn)行GC/MS分析，確定了其主要化學(xué)組分；通過對青蒿揮發(fā)油抑制植物病原菌作用的研究，發(fā)現(xiàn)青蒿揮發(fā)油對受試的植物病原菌具有廣譜抗菌活性；通過與市售農(nóng)藥多菌靈的抗菌活性比較，了解了青蒿揮發(fā)油的抗菌強(qiáng)度；并初步對青蒿揮發(fā)油的抗菌機(jī)理進(jìn)行了研究和分析。從而為開發(fā)新的植物源抗菌劑奠定一定的基礎(chǔ)。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 ①采用氣質(zhì)聯(lián)用(GC/MS)法對青蒿揮發(fā)油和青

2、蒿素母液揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)青蒿揮發(fā)油的主要化學(xué)成分是樟腦(23.05％)、石竹烯氧化物(9.36％)、表藍(lán)桉醇(6.86％)、α-蛇床烯(5.11％)等；青蒿素母液揮發(fā)油的主要化學(xué)成分為戊烷(32.99％)、樟腦(22.22％、α-甜沒藥烯(5.20％)等。青蒿素?fù)]發(fā)油和青蒿素母液揮發(fā)油的化學(xué)成分中有樟腦、石竹烯、β-蒎烯、龍腦等相同物質(zhì)。
　　 ②采用生長速率法，研究了青蒿揮發(fā)油對十種受試植物病原真菌的抗菌活性，發(fā)

3、現(xiàn)在青蒿揮發(fā)油濃度為400μg/mL時(shí)，對三種植物病原真菌抑制率比較高，超過了40％；對四種真菌的抑制率為26.76％到39.91％；對其他的真菌也有一定的抑制；青蒿揮發(fā)油對四種受試病原真菌的毒力作用測定發(fā)現(xiàn)，青蒿揮發(fā)油對瓜類綿腐病菌(Pythium aphanidermatum)、小麥赤霉病病菌(Fusarium graminearum)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)和黃瓜尖孢鐮刀菌(Fusarium ox

4、ysporum f.sp cucumeris)的抑制中濃度(EC50)在776.50μg/mL到1637.45μg/mL之間。青蒿精油的主要成分樟腦對黃瓜尖孢鐮刀菌的EC50為2220.74μg/mL，高于青蒿揮發(fā)油。
　　 ③選用黃瓜尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum f.sp cucumeris)作為抗菌機(jī)理研究的目標(biāo)菌，研究了青蒿揮發(fā)油對植物病原真菌的抑制機(jī)理：通過對黃瓜尖孢鐮刀菌的生長觀察發(fā)現(xiàn)，揮發(fā)油能夠使

5、真菌的菌絲斷裂，致使生物量降低。通過電導(dǎo)率法和紫外分光光度法研究青蒿揮發(fā)油對真菌細(xì)胞膜系統(tǒng)的作用，結(jié)果顯示隨著揮發(fā)油濃度的增加，細(xì)胞膜傷害率(MIP)的值幾乎成指數(shù)曲線上升，在(1.OOmg/mL-1.60mg/mL)階段，MIP的提高幅度較低，在(1.60mg/mL-2.00mg/mL)階段，MIP有較大的提高；紫外分光光度法研究發(fā)現(xiàn)，隨著時(shí)間的增加，真菌中的核酸類物質(zhì)泄漏量增大。據(jù)此推知青蒿揮發(fā)油能夠破壞黃瓜尖孢鐮刀菌(Fusari

6、umoxysporum f.sp cucumeris)的質(zhì)膜，降低其選擇通透性，使細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)大量外滲。采用3,5-二硝基水楊酸法測定黃瓜尖孢鐮刀菌對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用時(shí)發(fā)現(xiàn)，空白培養(yǎng)基還原糖的含量一直較低于處理培養(yǎng)基，可見青蒿揮發(fā)油能夠影響菌絲體對還原糖的吸收利用。采用比色法測定青蒿揮發(fā)油對真菌細(xì)胞內(nèi)琥珀酸脫氫酶(SDH)活性的影響，在作用96h后，酶比活力比對照組低29.9％，說明青蒿揮發(fā)油對病原菌的氧化-還原系統(tǒng)造成了一定程度的破