五種植物揮發(fā)油生物活性及組分表征.pdf

1、本文研究了五種植物揮發(fā)油抗脂質(zhì)過氧化、清除自由基和抑制鼻咽癌細胞生長的作用，并對其化學成分進行表征歸類。 采用肝臟自發(fā)性脂質(zhì)過氧化模型，研究了歐洲丁香、地中海柏、互葉白干層、肉豆蔻和香葉天竺葵五種揮發(fā)油對肝臟自發(fā)MDA生成的影響。結(jié)果表明，與陰性對照相比，各濃度揮發(fā)油都能極顯著地抑制肝自發(fā)脂質(zhì)過氧化。高劑量組方差分析表明，組間存在極顯著差異，抑制作用由強到弱依次為，歐洲丁香(SEO)，地中海柏(CEO)，肉豆蔻(NEO)，互葉白

2、干層(TEO)。香葉油(PEO)最弱。SEO與CEO高劑量對大鼠肝脂質(zhì)過氧化的抑制作用優(yōu)于合成抗氧化劑。 在CCl4誘導的肝脂質(zhì)過氧化模型中，各組揮發(fā)油與陰性對照相比有極顯著的抑制作用。其中0.1％CEO與0.1％TBHQ及0.01％CEO與VE0.01％對MDA抑制能力均無顯著性差異。0.1％SEO與0.1％VE及0.01％SEO與VE0.01％對MDA抑制能力也無顯著性差異，高劑量SEO對CCl4誘導的脂質(zhì)過氧化的抑制作用極

3、顯著地高于0.1％TBHQ，SEO能劑量依賴性地抑制MDA的生成。對高劑量組方差分析表明，SEO和CEO間無顯著性差異，其他各組對MDA的生成均有極顯著差異，由強到弱依次為：SEO，CEO，NEO，TEO。PEO最弱。高劑量的CEO與SEO抑制CCl4誘導的脂質(zhì)過氧化物生成作用分別與0.1％TBHQ和VE相當。 總抗氧化能力研究表明，SEO總抗氧化能力最強。 為進一步研究揮發(fā)油清除自由基作用，實驗探索了揮發(fā)油清除活性氧的

4、作用，并用DPPH·分光光度法測定了揮發(fā)油清除DPPH·的能力。 除TEO低劑量外，各濃度揮發(fā)油與陰性對照相比有顯著的活性氧清除作用。對高劑量組揮發(fā)油清除能力方差分析表明，1％SEO抗氧化作用極顯著地高于其他揮發(fā)油組；CEO與TEO高劑量組間無顯著差異。高劑量SEO對活性氧清除作用最好。 DPPH·分光光度法研究表明揮發(fā)油對DPPH·的清除能力依次為：SEO＞NEO＞CEO＞TEO＞PEO。 為解析揮發(fā)油藥效作用

5、的可能機理，本文采用氣相色譜法分別對不同揮發(fā)油抗氧化的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)進行表征。大部分揮發(fā)油成分相當復雜，而且種類豐富，少則6種，多則53種。其中，CEO中含有柏木烯、羅漢柏烯、α-雪松醇；NEO中含有萜品醇、1R-α-蒎烯、檸檬烯；TEO含有神圣亞麻三烯、大根香葉烯D、α-水芹烯、石竹烯；SEO中含有石竹烯、丁子香酚；PEO中含有香茅醇、香葉醇、甲酸香茅酯。上述揮發(fā)油成分涵蓋了烯、醇、烷、酯、酸、酮、酚、醚、醛和苯環(huán)等。 通過組分

6、表征發(fā)現(xiàn)，NEO和CEO中分別含有大量抗腫瘤活性成分：檸檬烯和羅漢柏烯，因此選擇與所選資源相關(guān)領(lǐng)域尚未關(guān)注而我國南方地區(qū)多發(fā)的鼻咽癌為對象，就揮發(fā)油抑制鼻咽癌細胞生長的作用及其機理進行實驗研究。MTT法結(jié)果表明，NEO處理CNE細胞24小時后除15nL/mL低劑量外都產(chǎn)生了極顯著的細胞增殖抑制作用，地中海柏作用鼻咽癌細胞48小時后MTT法所得到的IC50值為：35.5μg/mL。通過SRB法發(fā)現(xiàn)，NEO和CEO都能劑量依賴性地顯著降低C

7、NE細胞的蛋白質(zhì)含量，NEO作用24小時后的IC50=220nL/mL，而CEO作用48小時后的IC50=40.5μg/mL。提示：兩種揮發(fā)油能一定程度地抑制鼻咽癌細胞的增殖生長。 為解釋揮發(fā)油抑腫瘤的機理，采用Wright染色法和吖啶橙熒光觀察法研究揮發(fā)油作用CNE細胞后的形態(tài)變化，結(jié)果表明，NEO作用后細胞數(shù)量減少，分布稀疏，細胞形態(tài)發(fā)生很大改變，部分細胞變圓，250nL/mL高劑量給藥組細胞出芽并伴隨有凋亡小體形成；CEO

8、給藥組CNE細胞核仁消失、染色質(zhì)邊緣化凝集，細胞密度明顯減少，50μg/mL給藥組有凋亡小體形成。為進一步定量分析細胞凋亡率，實驗采用PI熒光探針結(jié)合流式細胞術(shù)考察腫瘤細胞群亞二倍體峰和細胞周期的變化。結(jié)果表明，NEO處理24小時后可見高劑量給藥組亞二倍體峰(Sub-G1)面積極顯著地高于對照達到38.78％，人鼻咽癌CNE細胞經(jīng)50μg/mLCEO處理24小時后可見給藥組亞二倍體峰(Sub-G1)比例小幅上升，而細胞周期有極顯著地改變