白術(shù)、玉屏風散和增液湯的口服免疫佐劑作用研究.pdf

1、疫苗免疫接種是防治動物傳染病的一個重要手段,但在很多情況下動物注射疫苗后不能產(chǎn)生有效的免疫應答。因此,如何提高動物疫苗的免疫效果是畜牧業(yè)生產(chǎn)上的一個重要問題。研究發(fā)現(xiàn)一些中藥可以增強機體的免疫機能,從而提高疫苗的免疫效果。浙江省出產(chǎn)的道地藥材“浙八味”久負盛名,它們是白術(shù)、白芍、浙貝母、杭白菊、延胡索、玄參、麥冬,溫郁金八味中藥材。本論文系統(tǒng)研究浙八味中藥以及含浙八味中藥的玉屏風散和增液湯的口服免疫佐劑作用,為進一步開發(fā)浙八味中藥提供參

2、考。1.浙八味中藥對小鼠注射模式抗原卵清白蛋白(OVA)的口服佐劑作用比較
　　 目的：篩選浙八味中具有口服免疫佐劑作用的中藥。
　　 方法：以雌性ICR小鼠為實驗動物,將浙八味設(shè)為高、中、低三個劑量水平,每只小鼠分別灌胃0.25 mL不同水平的中藥,每日一次,連續(xù)給藥4 d,然后分別在第5 d和第25 d進行皮下注射抗原OVA,并在二免后2周進行眼眶采血。
　　 結(jié)果：與對照組相比,浙八味中的白術(shù)能顯著提高OV

3、A受免小鼠血清中OVA特異性IgG總抗體及抗體亞類IgG2a、IgG2b和IgG3抗體水平(P＜0.05)。麥冬、玄參可以顯著增強小鼠血清中OVA特異性IgG總抗體水平(P＜0.05)。此外,在試驗過程中發(fā)現(xiàn)浙貝母的毒性較大,灌胃1g/只即可導致小鼠死亡。2.玉屏風散煎劑對口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用
　　 目的：探討中藥復方玉屏風散及其麥冬加味對O型口蹄疫疫苗的免疫佐劑作用。
　　 方法：將21只ICR小鼠隨機分為3組

4、,每組7只,分別為對照組、玉屏風散組和玉屏風散加麥冬組。將玉屏風散及其加味制成生藥濃度為2 g/mL的藥液,每只小鼠灌胃給藥1次(0.25 mL),24 h后經(jīng)腹股溝皮下注射FMD疫苗(0.2mL/只),2周后同樣方法加強免疫一次。二免后3周采血和取脾臟,用間接ELISA檢測血清中特異性IgG抗體及其亞類,用MTT法檢測淋巴細胞增殖情況。
　　 結(jié)果：二免后各給藥組小鼠血清中FMDV特異性IgG抗體及其IgG抗體亞類水平和淋巴細

5、胞刺激指數(shù)均顯著高于對照組(P＜0.05),而玉屏風散和玉屏風散加麥冬兩組間的抗體水平以及淋巴細胞刺激指數(shù)均未見顯著性差異(P＞0.05)。3.增液湯煎劑對口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用
　　 目的：探討中藥復方增液湯(由玄參、麥冬和生地組成)及其單味中藥對O型口蹄疫疫苗的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：將40只ICR小鼠隨機分為5組,每組8只,分別為對照組、單味中藥組和增液湯組。每只小鼠于免疫注射前24h灌胃給藥一次,劑量為

6、0.25 mL/只,然后對所有小鼠經(jīng)腹股溝皮下注射O型FMD疫苗免疫,2周后加強免疫一次,二免后3周眼眶采血。
　　 結(jié)果：與對照組相比,口服麥冬和生地均能顯著提高免疫O型FMD商品苗的小鼠血清中FMDV特異性IgG總抗體水平以及FMDV特異性IgG1和lgG2a抗體亞類水平(P＜0.05)；但是增液湯組無論在調(diào)節(jié)IgG總抗體水平方面,還是其對抗體亞類的影響方面,與對照組均未見顯著性差異(P＞0.05)。4.白術(shù)水煎劑對小鼠注射

7、模式抗原卵清白蛋白(OVA)的口服佐劑作用
　　 目的：探討白術(shù)對模式抗原卵清白蛋白(Ovalbumin,OVA)的口服佐劑作用。
　　 方法：選取48只ICR小鼠,隨機分為6組,每組8只,雌雄各半,采用單因素多水平實驗設(shè)計,各組小鼠分別灌服0.05 g、0.1 g、0.2 g、0.4 g或0.8g/只劑量的白術(shù)水煎劑或者生理鹽水,連續(xù)給藥4 d后,分別于試驗的第5 d和第25 d分別進行皮下注射免疫,二免后2周眼眶采血

8、并取脾臟。
　　 結(jié)果：與對照組相比,白術(shù)水煎劑(0.1 g、0.2 g、0.4 g和0.8 g)能夠顯著的提高小鼠血清中IgG總抗體滴度(P＜0.05),0.2 g、0.4 g和0.8 g的白術(shù)水煎劑均可顯著地提高小鼠血清中OVA特異性IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3的水平(P＜0.05)。灌胃0.1 g、0.2 g、0.4 g及0.8 g白術(shù)水煎劑也可以顯著增強小鼠的脾臟淋巴細胞受刺激物刺激后的刺激指數(shù)(P＜0.0

9、5),其中0.2 g白術(shù)水煎劑灌胃后,小鼠脾臟淋巴細胞受ConA刺激后分泌的IL-5和IFN-γ均顯著地高于對照組(P＜0.05)。5.白術(shù)水煎劑對口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用
　　 目的：探討白術(shù)對O型口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用。
　　 方法：將35只ICR雌性小鼠隨機分為5組,每組7只,采用單因素多水平實驗設(shè)計,分別設(shè)0.0625g、0.125 g、0.25 g及0.5 g白術(shù)水煎劑組和生理鹽水組。按上述劑量分別灌

10、胃小鼠,連續(xù)給藥4 d,在試驗的第5 d、第25 d分別免疫O型FMD疫苗,3周后眼眶采血并取脾臟。
　　 結(jié)果：0.25 g和0.5 g劑量的白術(shù)水煎劑,可以顯著提高免疫O型FMD疫苗小鼠血清中FMDV特異性抗體滴度水平和FMDV特異性IgG抗體亞類水平(P＜0.05)。與對照組相比,不同劑量的白術(shù)水煎劑均能顯著增強脾臟淋巴細胞在刺激物作用下的刺激指數(shù)(P＜0.05),其中,灌胃0.25 g白術(shù)水煎劑可以提高脾臟淋巴細胞在Co

11、nA刺激下分泌IL-5和IFN-γ的能力(P＜0.05),因此0.25 g或0.5/只·d可以作為提高FMD疫苗佐劑效果的參考劑量。在此基礎(chǔ)上,我們研究了不同的灌胃天數(shù),即1 d、2 d和4 d,對O型FMD疫苗的免疫佐劑作用效果的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)2 d和4 d的效果相對較好。6.日糧添加白術(shù)對口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用
　　 試驗一
　　 目的：用不同的加工方法(粉碎或煎煮)對白術(shù)進行處理后,按1％的生藥量比例添加到飼

12、料中,探討其對O型口蹄疫疫苗免疫的佐劑作用。
　　 方法：試驗設(shè)免疫前飼喂一周和全程飼喂(共飼喂6周)兩個不同的時間,按照兩因素三水平析因?qū)嶒炘O(shè)計方法,將試驗分為:對照組、粉碎-1周組、粉碎-6周組、煎煮-1周組和煎煮-6周組。試驗用O型FMD疫苗免疫小鼠兩次,間隔2周,二免后3周眼眶采血并取脾臟。
　　 結(jié)果：與對照組相比,飼喂添加1％白術(shù)水煎劑的日糧6周的處理組小鼠血清中FMDV特異性IgG抗體水平和抗體亞類水平(P

13、＜0.05)顯著提高,對ConA和LPS刺激的脾臟淋巴細胞增殖有明顯促進作用(P＜0.05),并能顯著地增強脾臟淋巴細胞受ConA刺激后分泌IL-5和IFN-γ的能力,表明該實驗組對O型FMD疫苗具有有較好的免疫增強作用。
　　 試驗二
　　 目的：試驗采用煎煮法加工的白術(shù),按5％的比例添加到飼料中,探討其對O型口蹄疫疫苗免疫的口服佐劑作用。
　　 方法：采用單因素多水平實驗設(shè)計,分別飼喂2 d、4 d和6 d,

14、用O型FMD疫苗免疫小鼠兩次,間隔2周,二免后3周眼眶采血并取脾臟和小腸。
　　 結(jié)果：用添加5％白術(shù)的飼料飼喂小鼠2 d、4 d和6 d后,與對照組相比,各組小鼠血清中FMDV特異性IgG抗體水平和抗體亞類水平均顯著升高,刺激物作用后的脾臟淋巴細胞的刺激指數(shù)和ConA刺激后脾臟淋巴細胞中IL-5和IFN-γ的分泌量也顯著上升(P＜0.05)。用添加5％白術(shù)的飼料飼喂小鼠2 d后,在第一次免疫FMD疫苗后1周和二免后3周的小鼠小

15、腸IgA分泌細胞的陽性率高于對照組,說明口服白術(shù)具有增強機體黏膜免疫反應的作用。
　　 綜上所述,淅八味中的麥冬、玄參、白術(shù)具有口服免疫佐劑作用,可以提高ICR小鼠對于OVA免疫的體液免疫反應水平。進一步的研究表明,口服一定劑量的白術(shù)能提高ICR小鼠對于模式抗原OVA和FMD疫苗免疫的特異性體液免疫和細胞免疫水平,能同時上調(diào)Th1/Th2型免疫應答；日糧添加白術(shù)飼喂小鼠,能提高FMD疫苗的免疫效果,提高動物機體的體液免疫、細胞免