O型口蹄疫病毒單域抗體的篩選和鑒定及其在口蹄疫檢測中的應(yīng)用.pdf

1、口蹄疫是一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，由口蹄疫病毒感染所引起。包括豬、牛等在內(nèi)的偶蹄獸動(dòng)物動(dòng)物為其易感宿主，對(duì)全球的畜牧業(yè)造成了巨大的損失?？谔阋叻譃镺、A、C、AsiaⅠ、SAT-1、SAT-2和SAT-3七個(gè)血清型。其中，O型口蹄疫是全球最主要的流行亞型。近幾年來在我國及周邊國家多次爆發(fā)O型口蹄疫，造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。這迫切要求我們高度重視O型口蹄疫的流行，并加快O型口蹄疫的基礎(chǔ)研究和防控技術(shù)的開發(fā)。
　　駱駝科動(dòng)物的血清

2、中除了存在常規(guī)抗體外，還存在天然缺失輕鏈的重鏈抗體。重鏈抗體的重鏈可變區(qū)，被稱為單域抗體或者納米抗體，可獨(dú)立行使其抗原結(jié)合能力。單域抗體具有物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、可溶性好、分子量較小、易于改造、易于在微生物系統(tǒng)中表達(dá)等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已被應(yīng)用于腫瘤診斷、疾病治療、藥物開發(fā)等領(lǐng)域中。
　　在本項(xiàng)研究中，我們使用O型口蹄疫滅活苗免疫雙峰駝，構(gòu)建了抗O型口蹄疫病毒的單域抗體噬菌體展示免疫文庫。經(jīng)測定，文庫容量為1.2×108。經(jīng)過四輪淘選，測序得到

3、兩株單域抗體序列，分別命名為sdAb-1和sdAb-2。目的片段擴(kuò)增后經(jīng)過酶切后與pSMK載體連接，構(gòu)建pSMK-sdAb-1和pSMK-sdAb-2原核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(coden plus)。經(jīng)SDS-PAGE檢測，重組sdAb-1和sdAb-2得到了表達(dá)。重組蛋白使用樹脂親和層析方法進(jìn)行純化。雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示這兩株抗體對(duì)O型口蹄疫病毒具有特異性結(jié)合的能力。表面等離子共振實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明這兩株單域抗體與O型