抗A型口蹄疫病毒和O型口蹄疫病毒重組雙價多肽疫苗研究.pdf

1、Y臣繁0_‘I。卜∞。。：’十塵代fIl5：10246’‘：；j：200366後旦大學(xué)毒一；1—t，持。l二，_‘：捌片段為了增加免疫原性，將兩個主要抗原決定簇組成141～160(20AA)一2l～40(20AA)一141～160(20AA)串聯(lián)重復(fù)結(jié)構(gòu)，同樣A型FMDV抗原肽由A型FMDVVPI蛋白中21～40位及138～160位氨基酸殘基兩個肽段組成，其結(jié)構(gòu)為138～160(23AA)21～40(20AA)一138～160(23AA

2、)。因為IgG的Fc區(qū)能與抗原提呈細(xì)胞(APC)表面上的Fc受體結(jié)合?？蓪！缘乇徊煌珹PC所攝取，因此為了提高抗O型FMDV和A型FMDV雙價基因工程多肽疫苗的免疫效果，我們用牛IgG重鏈恒定區(qū)作為載體蛋白，在其N端連上O型FMDV抗原決定簇串聯(lián)片段，C端連上A型FMDV抗原決定簇串聯(lián)片段，并將其克隆到表達(dá)質(zhì)粒中，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pTH～OAl。另外考慮到多肽抗原的免疫原性與抗原決定簇的數(shù)量正相關(guān)，我們構(gòu)建一個全部由抗原決定簇組成的雙價基

3、因工程多肽疫苗，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pTHOA2將這兩個表達(dá)質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)出兩個融合蛋白，分別檢測它們誘發(fā)豚鼠產(chǎn)生免疫應(yīng)答的狀況，并通過病毒攻擊實驗檢測其對豚鼠的免疫保護效果。試驗結(jié)果表明上述二種重組質(zhì)粒編碼的抗原蛋白都能誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生和激發(fā)細(xì)胞免疫，進一步用FMDV攻毒實驗證明質(zhì)粒pTHOAI表達(dá)的抗原蛋白對O型病毒攻擊的保護率為70％，劉。A型病毒攻擊的保護率為57％，而質(zhì)粒pTH—OA2表達(dá)的抗原蛋白對O型病毒攻擊的

4、保護率為856％，對A型病毒攻擊的保護率為70％。第二章抗口蹄疫病毒DNA疫苗的研究雖然DNA疫苗能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生較強的細(xì)胞免疫應(yīng)答，但通常只能誘導(dǎo)較低的體液免疫應(yīng)答，影響其免疫效果。主要原因是因為誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗體反應(yīng)需要在體內(nèi)有足量的抗原蛋白，而DNA疫苗免疫時體內(nèi)只有少量的細(xì)胞能被DNA疫苗轉(zhuǎn)染并表達(dá)抗原蛋白，因此誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性抗體滴度較低。在體內(nèi)抗原蛋白是隨機地被抗原提呈細(xì)胞提呈，如將抗原蛋白靶向引導(dǎo)至抗原提里細(xì)胞表面可以大幅度提