中藥材佛手的種質(zhì)資源及遺傳多樣性研究.pdf

1、佛手(Buddha's Hand citron)，學(xué)名Citrus medica L.var．sarcodactylis(Noot.)Swingle，為蕓香科柑橘屬植物香櫞(Citrus medica L.)的變種，十大廣藥之一，是傳統(tǒng)的名貴中藥。佛手不僅可供藥用，還可發(fā)展佛手盆景市場，其揮發(fā)油可應(yīng)用于食品和化妝品等方面，因而具有很大的開發(fā)利用價值。但由于長期以來粗放種植，致使品種混雜、退化，病蟲害嚴(yán)重，產(chǎn)量和品質(zhì)參差不齊，嚴(yán)重妨礙了佛

2、手產(chǎn)業(yè)的規(guī)范化種植和質(zhì)量控制。本文從植株形態(tài)、SSR分子標(biāo)記兩方面對采自浙江金華，重慶南龍，廣東肇慶、高要、武壟、潮州、梅州、汕頭(來自新加坡)等共八個地方的佛手進(jìn)行分析，以研究其各種質(zhì)間的親緣關(guān)系，為佛手GAP規(guī)范化種植提供有益的技術(shù)支持。 從葉片氣孔器特征和花粉兩方面研究三種佛手的形態(tài)差別，觀察和測量了40枚葉片的氣孔器和50?；ǚ鄣男螤詈痛笮。l(fā)現(xiàn)來自浙江、重慶、廣東三個佛手品種，在氣孔器和花粉形態(tài)特征上比較一致，差異較小

3、。 利用Fastprep法成功提取了3省8個佛手居群的基因組DNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)從當(dāng)年生已完全展開的葉片提取的DNA質(zhì)量和得率都較好，完全滿足實驗需要。利用汕頭(來自新加坡)和浙江金佛手群體中的植株DNA，從53對SSR引物中篩選出5對可以擴(kuò)增出條帶清晰、多樣性高、反應(yīng)穩(wěn)定的引物。其中，CCSM3的擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)性最高，可以擴(kuò)增出4條在各居群內(nèi)具有多樣性的條帶。其次為P1223可以擴(kuò)增出3條在各居群內(nèi)具有多樣性的條帶。CCSM19和C

4、CSM12這兩對引物只能分辨出汕頭的佛手個體，多樣性最低。在擴(kuò)增過程中建立了優(yōu)化的20μl體積的SSR反應(yīng)體系和PCR反應(yīng)程序。 利用篩選出的5對SSR引物對8個居群的122個個體進(jìn)行研究，共發(fā)現(xiàn)13個等位基因。采自汕頭(種源來自新加坡)的多樣性最高，其香農(nóng)指數(shù)Ⅰ、觀測雜合度Ho、期望雜合度He分別為0.648、0.733、0.547。其次為廣佛手潮州的居群。廣佛手高要和川佛手重慶群體的多樣性最低，其香農(nóng)指數(shù)Ⅰ、觀測雜合度Ho、

5、期望雜合度He都為0，所用引物未能在這兩個居群中得到具有多態(tài)性的條帶。廣佛手其余各群體多樣性相近。推測佛手群體尤其是我國佛手遺傳多樣性很低的原因可能是在約700年的栽培歷史中，長期營養(yǎng)繁殖、人工選擇以及缺乏野生種質(zhì)交流，導(dǎo)致佛手種質(zhì)的遺傳多樣性流失嚴(yán)重，遺傳基礎(chǔ)變得很窄，基因趨于純合。 F—統(tǒng)計顯示佛手出現(xiàn)了較高的群體間遺傳分化(Fst—0.277)，群體間基因流小于1(Nm＝0.726)也證實了這一結(jié)論。采用Mantel統(tǒng)計

6、學(xué)檢驗，比較遺傳距離和地理距離的相關(guān)性，結(jié)果顯示佛手群體間的遺傳距離和地理距離相關(guān)性很高(F＝0.903)，但顯著度很低(P=0.993)，結(jié)果不可靠。這與本實驗的采樣主要集中于廣東境內(nèi)，未采到分布于東南亞等地的佛手居群有關(guān)。而且國內(nèi)近年來，佛手干片和鮮果價格持續(xù)走低，很多種植戶將佛手砍掉，改種其它經(jīng)濟(jì)作物，造成采樣困難。 本文的研究結(jié)果顯示：我國佛手種質(zhì)資源的遺傳多樣性較低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于新加坡的佛手種質(zhì)的遺傳多樣性。研究的佛手群體