重慶市部分地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5基因的遺傳變異分析.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是20世紀(jì)80年代末發(fā)現(xiàn)的一種高度傳染性疾病，引起妊娠母豬的流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等繁殖障礙癥狀，以及各種年齡豬(特別是仔豬)的呼吸道癥狀，其病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)。 本研究以來(lái)源于重慶地

2、區(qū)的8份臨床疑似病料作為研究對(duì)象，分別命名為T(mén)1、H1、B1、C1、B2、C2、H2、C3，根據(jù)中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)株序列，利用軟件Primer5.0設(shè)計(jì)了六對(duì)針對(duì)GP5基因的特異性引物，分別命名為P1.1/P1.2、P2.1/P2.2、P3.1/P3.2、P4.1/P4.2、P5.1/P5.2、P6.1/P6.2，最后用引物P6.1/P5.2通過(guò)RT—PCR方法擴(kuò)增出777bp基因片段，將其插入克隆載體質(zhì)粒pMD19—T。構(gòu)建重組質(zhì)粒，并對(duì)克隆的

3、GP5基因進(jìn)行序列測(cè)定。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明T1、B1、C1、B2、H2、C3這6份為陽(yáng)性，8份樣品的陽(yáng)性檢出率為75.0％。C3未能測(cè)出序列，測(cè)序結(jié)果顯示，T1、C1、B2、H2的GP5基因全長(zhǎng)603bp，包含完整的GP5基因的開(kāi)放閱讀框，編碼200個(gè)氨基酸，B1的GP5基因全長(zhǎng)604bp。 將本研究獲得的5個(gè)毒株的GP5基因序列進(jìn)行同源性比較，結(jié)果顯示5個(gè)毒株之間的核苷酸序列同源性為96.2％～99.8％，T1與B1、T1

4、與C1、T1與B2、T1與H2、B1與C1、B1與B2、B1與H2、C1與B2、C1與H2、B2與H2的同源性分別為97.7％、97.7％、98.5％、99.8％、96.2％、97.5％、97.5％、97.7％、97.5％、98.3％。將這5株與VR-2332，JX-1，JXA1，Henan-1，NX06，BJsy06，HB-1，CH-1a，LV的GP5基因序列進(jìn)行同源性比較，結(jié)果顯示5個(gè)毒株與VR-2332，JX-1，JXA1，Hen

5、an-1，NX06，HB-1，CH-1a，LV的GP5序列的同源性分別為87.9％～89.4％，96.7％～98.2％，97.7％～99.5％，98.0％～99.3％，97.8％～99.7％，95.5％～97.0％，94.0％～96.2％，64.5％～65.6％。 除B1株外，T1、C1、B2、H2這4株的編碼氨基酸序列之間的同源性為97.0％～99.5％，其中T1與C1、T1與B2、T1與H2、C1與B2、C1與H2、B2與H

6、2的同源性分別為97.5％、97.5％、99.5％、98.0％、97.0％、97.0％。這4株與其它國(guó)內(nèi)外的毒株的相似性為59.5％～100.0％，其中H2與LV的同源性最低為59.5％，B2與NX06和BJsy06的同源性最高為100.0％。表明國(guó)內(nèi)流行的毒株在基因區(qū)域的變異較小。 推導(dǎo)編碼氨基酸的比較結(jié)果表明，中和表位和非中和表位區(qū)域均存在變異，與毒力相關(guān)的氨基酸(13位aa和151位aa)不存在變異。 把5株流行毒