豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5和M蛋白重組腺病毒對(duì)豬體安全性和免疫效力研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是豬的一種重要染傳染病。目前用于預(yù)防PRRS的疫苗有弱毒疫苗和滅活疫苗，但免疫效力均不夠穩(wěn)定，而且弱毒疫苗存在反祖危險(xiǎn)，滅活疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體水平很低，且不穩(wěn)定。PRRSV基因工程苗是目前研究的熱點(diǎn)之一。PRRSV的中和表位主要位于GP5蛋白上。M蛋白是歐美毒株間最保守的結(jié)構(gòu)蛋白，也具有中和表位，并與GP5蛋白形成異

2、源二聚體，此二聚體可能對(duì)GP5蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)、加工和成熟有關(guān)。同時(shí)，GP5和M蛋白也可引起細(xì)胞免疫。腺病毒載體已被廣泛用于研制人類和各種動(dòng)物基因工程疫苗。為了研制PRRSC基因工程疫苗，本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了能穩(wěn)定表達(dá)PRRSVGP5和M蛋白的重組腺病毒rAD-GP5和rAD-M。接種小鼠可誘導(dǎo)產(chǎn)生PRRSV特異性ELISA抗體和中和抗體。本研究則將這兩種重組腺病毒接種豬體，對(duì)其安全性進(jìn)行評(píng)估，并測(cè)定其免疫保護(hù)效力。 (1)安全性評(píng)估：

3、 將12頭約30日齡PRRSV陰性斷奶健康仔豬隨機(jī)分為3組，隔離飼養(yǎng)，每組4頭。一組接種表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)GP5蛋白重組腺病毒(rAD-GP5)，另一組接種表達(dá)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)M蛋白重組腺病毒(rAD-M)，另外一組作為空白對(duì)照組。隔離、鼻試子、糞便和豬泥土，用PCR方法檢測(cè)重組腺病毒和野生型腺病毒的病毒血癥和排毒情況。結(jié)果為仔豬接種重組腺病毒后精神、食欲政黨；2周后體溫與空白對(duì)照組沒(méi)有明顯差異

4、；豬血清、鼻試子、糞便和豬舍環(huán)境中重組腺病毒及其野生型腺病毒檢測(cè)均為陰性，表明這兩種重組腺病毒對(duì)豬體具有很好的安全性。按《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)管理辦法》，這兩種重組腺病毒生物安全性屬Ⅰ級(jí)。 (2)免疫效力測(cè)定 將35頭約30日齡PRRSV陰性斷奶健康仔豬隨機(jī)分為5組，隔離飼養(yǎng)，每組4頭。其中一組為空白對(duì)照組，其它四組分別接種rAD-GP5、rAD-M、rAD-GP5/rAD-M(v/v=1混和病毒液)和PRRSV-Resp弱毒

5、株。此后3個(gè)月內(nèi)，不可時(shí)間檢測(cè)PRRSV特異性抗體。結(jié)果為免疫后14和45d分別可檢觀PRRSV ELISA抗體和中和抗體；免疫后60d，3個(gè)腺病毒腺免疫組ELISA抗體滴度均達(dá)1：2400以上，與PRRSV-Resp弱毒免疫組相似；免疫后90 d，3個(gè)腺病毒免疫組中和抗體滴度達(dá)1:6以上，但低于PRRSV-Resp弱毒免疫組；研究結(jié)果還表明rAd-GP5免疫組和rAd-GP5／rAd-M聯(lián)合免疫組ELISA抗體水平始終高于rAd-M免

6、疫組。同時(shí)將另外15頭仔豬免疫隨機(jī)分為5組，隔離飼養(yǎng)，每組3頭。按上述方法免疫，免疫后28 d進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)。結(jié)果為未免疫組攻毒后3d全部出現(xiàn)體溫升高和臨床癥狀，而4個(gè)免疫組攻毒后3 d平均體溫明顯低于未免疫組，未出現(xiàn)異常臨床癥狀；3個(gè)腺病毒免疫組豬病毒血癥和排毒時(shí)間僅為2周，與PRRSV-Resp弱毒免疫組相似，而未免疫組病毒血癥和排毒時(shí)間至少60 d；攻毒后7～14 d，3個(gè)腺病毒免疫組ELISA抗體和中和抗體水平明顯升高，而未免