大血藤黑斑病的病原鑒定與生物防治-畢業(yè)論文

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　大血藤黑斑病的病原鑒定與生物防治</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級 生物科

2、學(xué) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</b>&l

3、t;/p><p><b>　　目錄I</b></p><p><b>　　摘要II</b></p><p>　　AbstractII</p><p>　　KeywordsII</p><p><b>　　0 前言1</b></p>&

4、lt;p><b>　　1 材料與方法1</b></p><p>　　1.1 材料來源1</p><p><b>　　1.2菌種來源1</b></p><p><b>　　1.3 培養(yǎng)基1</b></p><p><b>　　1.4 試劑1</b&

5、gt;</p><p>　　1.5 儀器設(shè)備2</p><p><b>　　2 實驗方法2</b></p><p>　　2.1 病癥的觀察與描述2</p><p>　　2.2 顯微鏡檢查2</p><p>　　2.3 病原菌的分離與培養(yǎng)2</p><p>　　2.

6、4 病原菌的鑒定2</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析2</b></p><p>　　3.1 病癥的觀察與描述2</p><p>　　3.2 病原菌的培養(yǎng)性狀及形態(tài)3</p><p>　　3.3 顯微鏡的鏡檢及病原鑒定3</p><p><b>　　4 討論與結(jié)論4&

7、lt;/b></p><p><b>　　參考文獻6</b></p><p><b>　　致謝9</b></p><p>　　大血藤黑斑病的病原鑒定與生物防治</p><p>　　摘要：本文通過對大血藤（Sargentodoxa cuneata）病癥的觀察，采用組織分離法分離得到病原菌，通

8、過對病原菌的菌落的形態(tài)特征的觀察和孢子的大小的測定，鑒定出引起凱里市大血藤病害的是黑斑病，其病原菌為鏈格抱屬(Alternaria Neesex Fr.)，其孢子多數(shù)為多隔袍鏈格袍。本文針對大血藤黑斑病選擇了三種枯草芽苞桿菌(Bacillus sp.)制劑進行生物防治實驗，比較它們的抑菌效果, 結(jié)果顯示：枯草芽孢桿菌F1制劑對這種病菌的防治效果最好，其次是F18，F(xiàn)2防治效果最差。</p><p>　　關(guān)鍵詞：大

9、血藤；黑斑??；生物防治；鏈格袍屬；枯草芽苞桿菌</p><p>　　Disease Research and Pathogen Identification of Black Spot Disease of Sargentodoxa cuneata</p><p>　　Abstract: In this artical Sargentodoxa cuneata disease was o

10、bserved and the pathogen were isolatied using tissue surface isolation method , Sargentodoxa cuneata disease was determined by the size of the observation of the morphological characteristics of the colonies of pathogens

11、 and spores, Kaili City cuneatathe disease is black spot, and its pathogens Chains hold the genus (Alternaria Neesex Fr.) the majority of its spores for the multi-compartment gowns chain grid gowns. In This article thre&

12、lt;/p><p>　　Keywords: cuneata; black spot; biological control; chain grid gowns are; buds subtilis bacteria</p><p><b>　　0 前言</b></p><p>　　大血藤（Sargentodoxa cuneata）為大血藤科大血藤屬

13、落葉木質(zhì)藤本，是我國比較古老、原始的特有植物[1]，是亞熱帶（西南地區(qū)）落葉闊葉林的代表樹種，主要生長在貴州、四川、江西、河南、安徽等地的山坡疏林、溪邊，現(xiàn)已有栽培[2]。中藥以藤莖為主，有活血通經(jīng)、清熱解毒及祛風(fēng)除濕等功效，可以治療經(jīng)閉痛經(jīng)、腸癰腹痛、跌打撲痛、風(fēng)濕痹痛[3]。大血藤中含有多種酚類及酚苷類化合物，大黃素甲醚(physcion)，大黃素(emodin)，原兒茶酸(protocatechuic acid)，大黃酚(chry

14、sophanol)，β-谷甾醇(β-sitosterol)，香草酸(vanillicacid)和紅藤多糖等活性成分[4-5]。</p><p>　　黑斑病是危害植物普通病害，對多種植物有嚴重的危害作用，危害范圍廣，遍及世界各地，我國近幾年更為嚴重[6]；危害程度重，一旦植株感染上，就會迅速蔓延至整個植株，甚至傳染到相鄰的植株[7]；黑斑病不僅影響植物本身的生長發(fā)育，嚴重的降低了農(nóng)作物和中藥的品質(zhì)，造成巨大的經(jīng)濟損

15、失[8]，還對人體健康產(chǎn)生危害[9]。黑斑病多發(fā)生于溫暖潮濕的多雨季節(jié)[10]，貴州黔東南州一年四季都是潮濕多雨氣候[11]，隨著黔東南州大血藤種植面積的擴大，黑斑病已經(jīng)成為大血藤病害的主要病害之一。因此，本文對大血藤進行初步的病害分析，簡要提出對大血藤黑斑病的防治措施，以期為貴州省黔東南州大血藤病害具有一定的參考價值。</p><p><b>　　1 材料與方法</b></p>

16、<p><b>　　1.1 材料來源</b></p><p>　　在貴州省黔東南苗族侗族自治州錦屏縣啟蒙鎮(zhèn)玉泉村采集大血藤病害組織葉，將其放入保鮮袋內(nèi)備用。</p><p><b>　　1.2菌種來源 </b></p><p>　　將采集來的大血藤病葉通過組織分離法分離實驗分離獲得[12]。</p>

17、;<p>　　1.3 培養(yǎng)基 [2,12,13-14]</p><p>　　PSA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，洗凈、去皮、切碎，加水1000 ml煮沸30 min，過濾；在濾液中加入蔗糖10～20 g和瓊脂17～20 g，溶解后趁熱過濾；將溶液分裝到試管和三角瓶中；121 ℃高溫滅菌20 min冷卻備用。</p><p>　　1.4 試劑 [2,12,13-14]</p&

18、gt;<p>　　75%乙醇、0.1%升汞、鏈霉素、無菌水。</p><p>　　1.5 儀器設(shè)備[2,12,13-14] </p><p>　　恒溫培養(yǎng)箱、電磁爐、高壓蒸汽滅菌鍋、微波爐、光學(xué)顯微鏡、目鏡測微尺、冰箱及其他實驗儀器。</p><p><b>　　2 實驗方法</b></p><p>　　2

19、.1 病癥的觀察與描述</p><p>　　觀察病害組織的病斑形態(tài)、病斑大小、病斑顏色等特征，并詳細記錄與進行拍照。</p><p>　　2.2 顯微鏡檢查[2,12,13-14]</p><p>　　顯微鏡檢查分為真菌病害標本和病原菌的顯微鏡檢查兩個方面，觀察菌落的形態(tài)結(jié)構(gòu)、菌落的大小、菌落的顏色等特征，并對菌絲是否分支、是否有隔等特征進行顯微觀察。同時，對部分病

20、菌在多媒體教室數(shù)碼顯微鏡下拍攝照片，進行記錄。</p><p>　　2.3 病原菌的分離與培養(yǎng)[2,12,13-14]</p><p>　　組織分離法分離大血藤的病葉得到病原菌。切取病健交界處的葉組織2-4 mm的小塊，置于70%乙醇中浸2 s，后移入0.1%的升汞溶液中浸2 min，再移到無菌水中漂洗3遍， 最后移到PSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每個培養(yǎng)皿放置3塊，倒置培養(yǎng)，在25-30℃的電熱恒

21、溫箱里培養(yǎng)3-5 d后， 挑取組織周圍的菌絲放進加有鏈霉素的培養(yǎng)基平板上繼續(xù)培養(yǎng)，5-7 d后，將獲得的純培養(yǎng)進行菌落性狀的觀察、描述和拍照。</p><p>　　2.4 病原菌的鑒定[2,12,13-14]</p><p>　　對大血藤病原菌的鑒定采用傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡觀察法。用滅菌后的接種針挑取少許菌絲，放在加有浮載劑（水）的載玻片，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察。觀察菌絲的顏色，是否有隔

22、，是否有分支等特征；并觀察分生孢子的顏色，形態(tài)結(jié)構(gòu)。記錄和拍照。</p><p><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 病癥的觀察與描述</p><p>　　大血藤黑斑病發(fā)病主要部位是葉片、果實。病斑開始時圓形或橢圓形，初為紫褐色，漸變黑褐色，病部稍下陷，以后各病斑互相融合，融合后成不規(guī)則形，暗褐色至黑色；嫩葉往往皺縮

23、變形。病斑大小0.1-0.8 cm×0.3-1.1 cm，有明顯的病健交界 （圖1），發(fā)病嚴重時整片葉子都會爛掉然后脫落[15]。</p><p>　　3.2 病原菌的培養(yǎng)性狀及形態(tài)</p><p>　　在PSA培養(yǎng)基上，病原菌生長較快，菌落成輻射狀生長，邊緣整齊。菌絲白色，后變成黑褐色。菌落初期為乳白色，成絮狀或絨狀（圖2、圖3）。3-4 d后，菌落中央開始出現(xiàn)灰色并逐步變黑。

24、</p><p>　　3.3 顯微鏡的鏡檢及病原鑒定</p><p>　　多隔孢鏈格孢的分生孢子梗單生，不分枝，淡褐色，2～16(5)個隔膜，23.0～165.8(54.8)um×2.8～8.9(4.7)um；分生孢子呈鏈狀，形狀為圓筒形至倒棍棒形，顏色為淡褐至褐色，孢子表面光滑或具微刺，有2～7(大部分3～5)個橫隔膜，偶爾有1個縱隔膜或斜隔膜，橫隔膜處縊縮，中央的一個橫隔膜縊

25、縮特別明顯，隔膜亦較厚，孢身尺度15.1～43.4(31.9)um×5.9～12.5(8.7)um；喙2.8～17.6(7.9)um×2.6～5.1(3.8)um，喙頂有明顯黑色疤痕[16-17]（圖5、圖6）。</p><p>　　根據(jù)以上特征，鑒定該病原菌為半知菌綱鏈孢霉目黑霉科鏈格孢屬的鏈格孢屬真菌（Alternaria alternata）。</p><p>　

26、　圖5大血藤鏈格孢屬分生孢子（10×40） 圖6大血藤鏈格孢屬菌絲（10×40） 3.4 生防菌的作用</p><p>　　用三種枯草芽孢桿菌制劑對鏈格孢霉真菌進行

27、生物防治的結(jié)果表明：枯草芽孢桿菌F1制劑對兩種病菌的防治效果最好，其次F18相對較好，F(xiàn)2防治效果較低（圖7）。</p><p><b>　　4 討論與結(jié)論</b></p><p>　　通過對采集到的大血藤黑斑病病株標本樣株進行分離、培養(yǎng)和純得到病原菌，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定表明，引發(fā)大血藤黑斑病的病原菌為為半知菌綱鏈孢霉目黑霉科鏈格孢屬的鏈格孢屬真菌（Alternaria a

28、lternata）。鏈格孢屬真菌能在多種植物上侵染引起黑斑病，是植物葉部病害的常見病原菌之一[18]，但大血藤黑斑病還是首次出現(xiàn)，對大血藤的病害研究的相關(guān)文章中僅見關(guān)于炭疽病的報道[2]，可以說大血藤黑斑病是大血藤病害中新型的病害。</p><p>　　三種枯草芽孢桿菌（Bacillus sp.）制劑對鏈格孢屬真菌抑制效果表明：（1）不同的枯草芽孢桿菌對鏈格孢屬真菌的抑制效果不同；（2）生物制劑能有效的抑制鏈格孢

29、屬真菌生長；（3）鏈格孢屬真菌生長跟環(huán)境有很大的聯(lián)系，在潮濕溫暖的環(huán)境下特別適宜生存和繁殖。</p><p>　　大血藤是貴州有名的中藥，黑斑病對其影響在日益加重，為滿足市場的需求，培育出優(yōu)質(zhì)品質(zhì)的大血藤中藥，必須對大血藤黑斑病進行預(yù)防和防治。</p><p>　　農(nóng)業(yè)防治：實行合理管理制度，推廣無病試管苗，及時合理追肥，提高抗病力，注意清除病害植株和雜草，與其他作物進行輪種，隨時防治害蟲

30、，減少病菌傳播途徑[19-20]。</p><p>　　藥劑防治：用種子重量0．3%的50%異菌脲可濕性粉劑，或50%福美雙可濕粉劑等進行拌種。發(fā)病初期噴施50%異菌脲可濕性粉劑1000-1500倍，或50%福美雙可濕粉劑800倍。保護地在發(fā)病初期采用粉塵法、煙霧法等方法[20]。</p><p>　　生物防治：應(yīng)用相關(guān)的生物抑制劑進行防治，如枯草芽孢桿菌（Bacillus sp.）制劑。

31、</p><p><b>　　參考文獻 </b></p><p>　　[1] 盛仙永，劉文哲.大血藤屬植物研究進展[J].西北植物學(xué)報，2003, 23(7) : 1116—1120.</p><p>　　[2] 張國輝，蔡凌云，張文華，等.大血藤炭疽病的病原鑒定及病害分析[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2012，28(15):207-210.</

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39、凱里學(xué)院給了我在大學(xué)四年深造的機會，讓我能繼續(xù)學(xué)習(xí)和提高；感謝我的老師和同學(xué)們四年來的關(guān)心和鼓勵。這次畢業(yè)論文設(shè)計我得到了很多老師和同學(xué)的幫助，其中我的論文指導(dǎo)老師張國輝老師對我的關(guān)心和支持尤為重要。每次遇到難題，張老師不管有多忙，總會抽空來幫我解決。張老師不僅在學(xué)業(yè)和論文上給我以精心指導(dǎo)，同時還在思想給我以無微不至的關(guān)懷，在此謹向張老師致以誠摯的感謝。在此，我再一次真誠地向幫助過我的老師和同學(xué)表示感謝！感謝凱里學(xué)院！</p>