鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物的抗氧化抗菌活性分析【開(kāi)題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開(kāi)題報(bào)告</b></p><p><b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　鯊魚(yú)肉酶解蛋白鈣化螯合物抗菌性和抗氧化性分析</p><p>　　一、選題的背景與意義</p>

2、;<p>　　鯊魚(yú)肉是魚(yú)翅加工的下腳料，隨著魚(yú)翅加工業(yè)的迅速發(fā)展，鯊魚(yú)肉資源豐富。目前對(duì)鯊魚(yú)肉的研究，國(guó)內(nèi)主要集中在對(duì)其產(chǎn)品加工工藝方面的研究，利用多是將其加工成寵物食品或魚(yú)糜制品，對(duì)其深度加工及其生理活性的研究不多，這大大限制了鯊魚(yú)肉的應(yīng)用范圍。國(guó)外的研究多集中在鯊魚(yú)體內(nèi)金屬的累積效應(yīng)，也有涉及到生理活性方面的研究，如Bou等通過(guò)腸道蛋白酶對(duì)星鯊肉進(jìn)行酶解，對(duì)其酶解產(chǎn)物的抗氧化和自由基清除能力進(jìn)行研究。</p>

3、;<p>　　鯊魚(yú)肉有較高含量的蛋白質(zhì)，可以將其水解成富含多肽和氨基酸的水解液，并進(jìn)一步經(jīng)過(guò)金屬離子如鈣、鐵、鋅等修飾，得到鯊魚(yú)肉酶解蛋白金屬螯合物，并分析其抗氧化和抗菌活性，為制備活性物質(zhì)提供理論基礎(chǔ)，以充分利用鯊魚(yú)肉資源。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問(wèn)題：</p><p><b>　　研究基本內(nèi)容：</b></p>

4、;<p>　　分離提純優(yōu)化條件下制備得到的鯊魚(yú)肉酶解蛋白螯合物，并進(jìn)一步研究其抗氧化和抗菌活性，探討其結(jié)構(gòu)與活性之間關(guān)系。</p><p><b>　　擬解決的主要問(wèn)題：</b></p><p>　　確定螯合物的抗氧化活性和抗菌活性</p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p>　　抗氧化

5、性研究：以DPPH、硫代巴比妥酸法等，用經(jīng)過(guò)不同濃度有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀獲得的不同組分的螯合物來(lái)進(jìn)行測(cè)定和比較。</p><p>　　抗菌性分析：采用牛津杯雙層培養(yǎng)法，用經(jīng)過(guò)不同濃度有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀獲得的不同組分的螯合來(lái)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等作為對(duì)象，以抑菌圈為評(píng)價(jià)指標(biāo)。</p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2010.10

6、.8——2010.12.15</p><p>　　查詢(xún)與論文有關(guān)的資料、撰寫(xiě)試驗(yàn)計(jì)劃、熟悉基本的實(shí)驗(yàn)操作</p><p>　　2011.12.16――2011.4.20</p><p>　　對(duì)螯合物進(jìn)行抗菌性和抗氧化性研究</p><p>　　2011.4.21――2011.5.10</p><p>　　整理數(shù)據(jù)，撰寫(xiě)

7、論文，論文答辯</p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1]胡奇?zhèn)?金屬螯合物的營(yíng)養(yǎng)作用[J].湖北畜牧獸醫(yī)，l994，2</p><p>　　[2]徐清海,明霞.由雞羽毛制備復(fù)合氨基酸鐵復(fù)合物方法田[J].沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,32(1):51-53.</p><p>　　[

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19、 other commercial vinegars in radical—scavenging assays and on lipid oxidation in tuna homogenates[J]．Food Chemistry，2008(107)：739～744</p><p>　　[24]蕭華山，何文錦，傅文慶，曹紅云，范子南．一種用分光光度計(jì)檢測(cè)氧自由基的新方法[J]．生</p><

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21、t;/p><p>　　蛋白降解物螯合物活性的研究</p><p>　　[摘要] 螯合物是由中心離子和多齒配體結(jié)合而成的具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的配合物，其制備需考慮物料配比等各種因素。它具有多種生理功能以及一定的抗菌性和抗氧化性。本文主要介紹蛋白降解螯合物的制備方法及特性的研究，其中主要詳述了有關(guān)其抗氧化性和抗菌性的研究。</p><p>　　[關(guān)鍵詞]：蛋白降解螯合物 制備 抗

22、氧化性 抗菌性</p><p><b>　　1 蛋白降解螯合物</b></p><p>　　鰲合物在上世紀(jì)70年代就開(kāi)始研究，最初是由美國(guó)Albion實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，以動(dòng)植物蛋白和鐵元素為原料合成了蛋白鐵(IronProteinase)復(fù)合物。國(guó)內(nèi)的蛋白酶解物金屬離子螯合研究開(kāi)始于上個(gè)世紀(jì)九十年代，關(guān)于魚(yú)肉的酶解物金屬離子螯合研究在近幾年才逐漸出現(xiàn)。</p>

23、<p><b>　　1.1螯合物的定義</b></p><p>　　“螯合物”【1】通常專(zhuān)指金屬與二個(gè)氨基酸或多個(gè)氨基酸通過(guò)較牢固的化學(xué)鍵(配位鍵和離子鍵)形成的雜環(huán)(五環(huán)或六環(huán))結(jié)構(gòu)，整個(gè)分子結(jié)構(gòu)呈中性，也有人稱(chēng)其為肽螯合，能借助原有的小肽吸收機(jī)制被機(jī)體吸收，快速，高效，低耗能，不易飽和。在眾多的有機(jī)礦物質(zhì)當(dāng)中，二肽螯合物是最理想、最高效、效果也最好的有機(jī)物。</p&g

24、t;<p>　　1．2 蛋白降解物螯合物的制備</p><p>　　蛋白降解物金屬螯合物的制備一般分為如下幾個(gè)步驟：蛋白降解物制備→加入金屬離子→調(diào)整反映環(huán)境→螯合→分離提純【2】。在制備時(shí)，需考慮到時(shí)間溫度、DH、PH、物料比等因素。</p><p>　　2 蛋白降解物螯合物功能活性的研究</p><p>　　目前，對(duì)肽和氨基酸螯合金屬離子的作用模式

25、尚不清楚．被研究者較為接受的是氨基酸或肽的吸收機(jī)制。Ashmead【3】等證明，氨基酸螯合金屬離子的吸收是利用氨基酸或小肽的吸收機(jī)制，不同于小腸中普通金屬的吸收機(jī)制。Found【4】研究表明，位于具有五元環(huán)或六元環(huán)中心的金屬離子可以直接通過(guò)小腸絨毛刷狀緣，以胞飲的形式吸收。此理論的根據(jù)是金屬離子以共價(jià)鍵和離子鍵與氨基酸的配位體鍵合，被保護(hù)在復(fù)合物的核心，避免了一些理化因子的攻擊，而且金屬螯合物被腸粘膜吸收，使得所攜帶的金屬離子得到更有效

26、的吸收。Webb【5】等的研究表明，對(duì)所有動(dòng)物來(lái)說(shuō)，氨基酸以肽的形式吸收和以游離氨基酸的形式吸收同樣重要，甚至更重要。Bronk【6】等證明小肽能完整地被吸收，通過(guò)腸粘膜細(xì)胞進(jìn)入體循環(huán)。</p><p><b>　　2.1 生理功能</b></p><p>　　劉安軍【7】等通過(guò)肽質(zhì)量指紋圖譜對(duì)差異蛋白的分析和無(wú)SDS-丙烯酰胺電泳的抗氧化染色研究表明膠原蛋白多肽-鉻

27、(Ⅲ)螯合物可顯著提高小鼠肝臟內(nèi)SOD表達(dá)量，從而證明膠原蛋白多肽-鉻(Ⅲ)螯合物可以清除小鼠體內(nèi)大量的自由基，進(jìn)而證明膠原蛋白多肽-鉻(Ⅲ)螯合物可以對(duì)肝臟的損傷進(jìn)行保護(hù)。Dhumwad【8】等發(fā)現(xiàn)某些氨基酸堿金屬螯合體對(duì)老鼠肌肉內(nèi)Wslker206癌有抑制作用。</p><p><b>　　2.2 抗菌性</b></p><p>　　有許多研究表明一些小肽具有廣譜

28、殺菌作用，相對(duì)分子量較小，具有熱穩(wěn)定、水溶性好等優(yōu)點(diǎn)。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，食物蛋白經(jīng)酶解也有可能產(chǎn)生出有效的抗菌肽。這方面的研究多以由乳蛋白產(chǎn)生的抗菌肽，以水產(chǎn)原料的報(bào)道較少。張建榮【9】等對(duì)鯰魚(yú)骨酶解產(chǎn)物的抑菌活性進(jìn)行了研究，其以大腸桿菌、枯草桿菌和藤黃色葡萄球菌為供試菌種，以抑菌性為指標(biāo)對(duì)酶解條件進(jìn)行了優(yōu)化。楊燊【10】在抗菌性實(shí)驗(yàn)中采用牛津杯雙層平板法對(duì)魚(yú)蛋白酶解的鈣螯合物進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)螯合反應(yīng)后加80%無(wú)水乙醇分級(jí)沉淀得到的物質(zhì)對(duì)

29、枯草芽孢桿菌，金黃色葡萄球菌均有較好的抗菌效果，活性肽及其螯合物抑菌作用均不明顯，活性肽樣品無(wú)抑菌圈出現(xiàn)。</p><p><b>　　2.3 抗氧化性</b></p><p>　　楊燊【11】等以南海低值魚(yú)蛋白為原料，采用木瓜蛋白酶和風(fēng)味酶的復(fù)合酶水解制備多肽復(fù)合物，對(duì)及價(jià)值魚(yú)類(lèi)的蛋白多肽的鈣螯合物的研究，研究表明出鈣螯合物都具有一定的抗氧化作用，螯合反應(yīng)后未經(jīng)過(guò)無(wú)

30、水乙醇分級(jí)沉淀得到的物質(zhì)抗氧化作用最強(qiáng)，其抗氧化效果達(dá)到生育酚的94.43%。</p><p>　　2.4蛋白降解物螯合物的分級(jí)產(chǎn)物的功能性區(qū)別</p><p>　　夏松楊【12】等以低值魚(yú)蛋白為原料通過(guò)復(fù)合酶水解法和鈣修飾法獲得了蛋白質(zhì)酶水解物的修飾產(chǎn)物并對(duì)其功能活性進(jìn)行了初步研究，分析了三種螯合組分的抗氧化活性與抗菌性，分別是水不溶物、50%乙醇不溶物和80%乙醇不溶物，結(jié)果發(fā)現(xiàn)組分水

31、不溶物具有最高的抗氧化活性，且高達(dá)未螯合的水解物抗氧化活性的1.4倍，結(jié)果同樣為a- 生育酚的94％，80%無(wú)水乙醇不溶物具有較高的抗大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的活性。</p><p><b>　　3 抗菌性的研究</b></p><p>　　據(jù)報(bào)道【13】螯合物的肽分子可能和細(xì)菌細(xì)胞膜受體蛋白結(jié)合，改變細(xì)胞質(zhì)膜通透性，造成膜結(jié)構(gòu)破壞，引起膜內(nèi)水溶性物質(zhì)大

32、量滲出，從而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。</p><p>　　3.1觀察抑菌圈 在做抗菌性研究時(shí)，大多實(shí)驗(yàn)通過(guò)抑菌圈來(lái)反映某物質(zhì)抗菌能力的強(qiáng)弱。其中主要有牛津杯雙層半板法【14】。其主要過(guò)程主要為在無(wú)菌平皿中倒入10ml加熱融化的2％ 瓊脂，待其充分冷卻凝固后，放入已滅菌的牛津杯數(shù)個(gè)，并按一定次序排放整齊。將分裝于大試管中的15ml固體檢測(cè)培養(yǎng)基融化后冷卻全50℃左右，加入10 g個(gè)／ml指示菌液1ml，迅速混合均勻，倒入半

33、皿。冷卻后，用無(wú)菌鑷子取出牛津杯，作為活性肽螯合物活性檢測(cè)平板。用0．1ml吸管吸取1O0～200 u1待測(cè)樣品，以無(wú)菌操作加入到檢測(cè)平板圓孔內(nèi)，37℃ 培養(yǎng)1 5h，觀察并測(cè)定抑菌圈直徑(mm)。 此外還有紙片法【15】，觀察經(jīng)受試液浸濕過(guò)的濾紙片周?chē)鷮?shí)驗(yàn)菌生長(zhǎng)情況，通過(guò)抑菌圈大小判斷受試藥品的抑菌作用，記錄抑菌直徑，以符號(hào)?0’、“+”、“++”表示抑菌活度，“O”表示無(wú)抑菌作用，“+”表示可觀察到抑菌圈，“++表示有7mm左右的抑

34、菌圈．</p><p>　　3.2測(cè)最低抑菌濃度(MIC)【16】 用LB瓊脂培養(yǎng)基以倍比稀釋法配制成l0個(gè)濃度的藥物梯度，移人平皿，兩種細(xì)菌每組隨機(jī)選取4株。用生理鹽水將大腸桿菌和葡萄球菌菌株以鏡檢計(jì)數(shù)方式配成1xl0 cfu·mL 的菌懸液，分別接種于含有不同藥物梯度的LB瓊脂培養(yǎng)基中；另做不含藥物的培養(yǎng)基接種菌懸液，作為生長(zhǎng)菌的空白對(duì)照。樣品于37~C培養(yǎng)，36h觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，測(cè)定菌種的M

35、IC。</p><p>　　3.3 測(cè)最小殺菌濃度(MBC)【17】 以倍比稀釋法稀釋所測(cè)樣品后，接種菌懸液，另作空白對(duì)照，樣品置37℃培養(yǎng)， 放置不同時(shí)間觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。一般來(lái)說(shuō)同一菌種測(cè)定4株菌的MBC50和MBC90，結(jié)果取平均值。每個(gè)試驗(yàn)組做4個(gè)重復(fù)，最后取各組的平均值進(jìn)行分析。</p><p><b>　　4 抗氧化性的研究</b></p>

36、<p>　　抗氧化性的研究方法主要有TBA（硫代巴比妥酸）法、抗油脂過(guò)氧化(LPO)法、自由基清除指標(biāo)法等。</p><p>　　4.1 TBA法 這是基于不飽和脂肪酸通過(guò)自由基反應(yīng)， 形成過(guò)氧化自由基，而氧化生成環(huán)氧化物，后者分解生成丙二醛，丙二醛與TBA作用生成TBA染料，最大吸收波長(zhǎng)為535nm。</p><p>　　4.2抗油脂過(guò)氧化(LPO)法 生物體內(nèi)細(xì)胞膜的

37、流動(dòng)性和滲透性由其磷脂等成分保證，過(guò)多的自由基襲擊、油脂過(guò)氧化會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此，抗氧化劑對(duì)脂類(lèi)氧化的抑制作用也顯得至關(guān)重要。Rathee等【18】 用老鼠肝臟線粒體作底物，一植物芽體(nagkesar)提取物抗脂質(zhì)過(guò)氧化能力為： 生育酚>水一乙醇提取物>甲醇提取物。</p><p>　　4.3自由基清除方法 自由基是含有未成對(duì)電子的原子、原子團(tuán)或分子?；钚匝跞绯蹶庪x子、羥自由基和過(guò)氧化氫由正常

38、的生理過(guò)程和各種外在因素造成。它們一旦產(chǎn)生，就會(huì)引發(fā)油脂過(guò)氧化，與人體很多疾病相關(guān)。自由基損傷生物大分子，是衰老衍變的啟動(dòng)。因此，自由基清除能力的測(cè)定對(duì)生物研究非常重要。</p><p>　　4．3．1 DPPH·(2，2一二苯代苦味肼基)ABTS+·(2，2’一連氮.(一3-乙基苯并噻唑啉磺酸基)清除。 大部分自由基性質(zhì)活潑，壽命非常短，但DPPH·和ABTS+·例外，

39、是兩種穩(wěn)定的自由基。DPPH·乙醇溶液呈深紫色，在517nm處有一強(qiáng)吸收。若有單電子配對(duì)，則吸收消失，其褪色程度與接受的電子數(shù)成定量關(guān)系，因而可用分光光度法進(jìn)行定量分析。Rathee等【19】 用DPPH法顯示一植物芽體(nagkesar)甲醇提取物的清除能力(IC508．33 4,-0．391g／ml>優(yōu)于水一乙醇提取物的清除能力。而ABTSfl,被各種氧化劑生成藍(lán)綠色的自由基陽(yáng)離，而抗氧化劑的存在又可使ABTS+&#

40、183;還原，顏色褪去。特征吸收峰下比色，清除能力用TEAC(當(dāng)量抗氧化能力)表示。Mathew等【20】 用過(guò)硫酸鉀氧化羥自由基，測(cè)玉桂葉對(duì)ABTS+·的清除能力，得沒(méi)食子酸>抗壞血酸>BHT>玉桂葉。</p><p>　　4．3.2 羥自由基(OH·)的清除。 OH·是體內(nèi)最活潑的活性氧，也是已知的對(duì)生物分子破壞能力最強(qiáng)的自由基之一。運(yùn)用鄰二氮菲法【21】，

41、H O 與二價(jià)鐵離子混合后產(chǎn)生·OH。· OH具有很高的反應(yīng)活性，存活時(shí)間短。如果加入抗氧化劑，將會(huì)有更多的Fe 存留于溶液中，而使吸光度增加，從而可用計(jì)算出的羥基自由基清除率表示出抗氧化劑的活性。</p><p>　　也可以運(yùn)用水楊酸法【22】測(cè)定。在反應(yīng)體系中加人水楊酸后能有效地捕捉·OH，并產(chǎn)生紫紅色產(chǎn)物，該產(chǎn)物在510nm處有強(qiáng)吸收，若加入自由基清除劑，便會(huì)與水楊酸競(jìng)爭(zhēng)，從而

42、使有色產(chǎn)物的生成量減少，采用固定時(shí)間法，在510nm處測(cè)定被測(cè)物反應(yīng)的吸光度，并與空白溶液比較，便能確定被測(cè)物對(duì)其的清除作用．</p><p>　　4.4 超氧陰離子清除</p><p>　　4．4．1 氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)法 黃嘌呤一黃嘌呤氧化酶體系產(chǎn)生02-· ， NBT被02-· 還原成藍(lán)紫色的formazane。比色formazane間接測(cè)定02-。Sa

43、kanaka等【23】 用此法對(duì)幾種醋進(jìn)行抗氧化性測(cè)定，它們都有清除能力，且柿子醋和米醋的清除能力比加工過(guò)的米醋和蘋(píng)果醋的要高。</p><p>　　4.4.2過(guò)硫酸銨／N，N，N’，N’一四甲基乙二胺(AP—TEMED)法 此法是通過(guò)過(guò)硫酸銨／N，N，N’，N’一四甲基乙二胺體系產(chǎn)生氧自由基，然后可采用不同的方法測(cè)定。反應(yīng)機(jī)理為02-與羥胺溶液反應(yīng)生成N02- ，N02-經(jīng)對(duì)氨基苯磺酸和萘胺顯色在530附近有

44、專(zhuān)一吸收峰，通過(guò)檢測(cè)02-間接檢測(cè)02-。此法由蕭華山等【24】 建立，并驗(yàn)證了抗壞血酸對(duì)0j·的清除作用呈明顯量效關(guān)系。</p><p>　　4．4.3 鄰苯三酚(MTT)法 鄰苯三酚在堿性條件下自動(dòng)氧化，不斷釋放出02-，02-又可進(jìn)一步促進(jìn)自氧化。在鄰苯三酚自氧化30～40s后，中間物積累濃度與時(shí)間呈線性關(guān)系，一般線性時(shí)間可維持4min左右，可求得自氧化速率來(lái)表征02-的清除能力。鐘飛等【25】

45、 用此法測(cè)定了葛根體外清除02-清除能力。</p><p><b>　　5 展望</b></p><p>　　微量元素氨基酸螯合物以其高的生物利用率，低劑量高效地滿足動(dòng)物對(duì)微量元素的營(yíng)養(yǎng)需求，這不僅節(jié)約了生產(chǎn)性資源，對(duì)農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境的保護(hù)有重要的作用保障畜產(chǎn)品食品安全問(wèn)題，對(duì)國(guó)家提倡的飼料安全，廣大消費(fèi)者關(guān)注的“放心肉”工程具有廣泛的意義。魚(yú)肉經(jīng)酶作用水解后，功能和品質(zhì)

46、可得到提高，再經(jīng)過(guò)金屬離子螯合如鈣、鐵、鋅等，不僅能提升其品質(zhì)與功能性而且還會(huì)體現(xiàn)出新的有益的功能活性，通過(guò)研究其抗氧化性與抗菌性，可以考慮制成一種良好的食品添加劑，有著不錯(cuò)的市場(chǎng)前景。</p><p>　　然而，目前氨基酸微量元素螯合物的各種產(chǎn)品其生產(chǎn)工藝相對(duì)來(lái)說(shuō)還較復(fù)雜，生產(chǎn)成本比較高，作用模式不夠深入以及其它一些原因使產(chǎn)品在生產(chǎn)中的廣泛應(yīng)用受到一定的限制。</p><p><b

47、>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]胡奇?zhèn)?金屬螯合物的營(yíng)養(yǎng)作用[J].湖北畜牧獸醫(yī)，l994，2</p><p>　　[2]徐清海,明霞.由雞羽毛制備復(fù)合氨基酸鐵復(fù)合物方法田[J].沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,32(1):51-53.</p><p>　　[3]Ashmead H D．Unlocking reproductive p

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57、um leaf extract assayed by different metho—dologies[J]．Food and Chemical Toxicology，2006( 44)：198～206．</p><p>　　[21] 金嗚，蔡亞欣，李金榮等．鄰二氮菲．Fe 氧化法檢測(cè)H202／Fe 產(chǎn)生的羥自由基[J]．生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，1996，23(6)：553-555．</p><

58、;p>　　[22]馬勇，邵立新．人參花蕾提取液清除羥基自由基作用研究[J]．食品科學(xué)，2008，29(10)：101—104．</p><p>　　[23]Sakanaka,S．Ishihara，Y． Comparison of antioxidant properties of persimmon vinegar and some other commercial vinegars in radical—

59、scavenging assays and on lipid oxidation in tuna homogenates[J]．Food Chemistry，2008(107)：739～744</p><p>　　[24]蕭華山，何文錦，傅文慶，曹紅云，范子南．一種用分光光度計(jì)檢測(cè)氧自由基的新方法[J]．生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，1999，26(2)：l80～ l82．</p><p>　　

60、[25]鐘飛，王曉春，林麗．葛根體外清除氧自由基作用的研究[J]．湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，24(2)：17～19</p><p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物的抗氧化抗菌活性分析</p><p>

61、<b>　　目錄</b></p><p><b>　　1引言1</b></p><p><b>　　2材料與方法1</b></p><p>　　2.1 主要材料1</p><p>　　2.2 主要儀器2</p><p><b>　　2.

62、3 試劑2</b></p><p><b>　　2.4 方法2</b></p><p>　　2.4.1 鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物的分級(jí)沉淀2</p><p>　　2.4.2 鈣螯合物抗氧化活性的測(cè)定2</p><p>　　2.4.3 鈣螯合物抗菌性的測(cè)定3</p><p>　　2

63、.5 數(shù)據(jù)處理4</p><p><b>　　3結(jié)果與討論4</b></p><p>　　3.1 鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物各級(jí)乙醇沉淀產(chǎn)物的得率與性質(zhì)4</p><p>　　3.2 酶解液鈣螯合物的抗氧化性分析4</p><p>　　3.2.2 螯合物的清除OH·自由基能力5</p><

64、;p>　　3.2.3 螯合物的DPPH·清除能力6</p><p>　　3.2.4 螯合物清除O2-自由基能力7</p><p>　　3.3 鈣螯合物的抗菌性測(cè)定8</p><p><b>　　4結(jié)論9</b></p><p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p>

65、<b>　　參考文獻(xiàn)10</b></p><p><b>　　附錄11</b></p><p>　　摘要：以鯊魚(yú)肉酶解液為原料，以CaCl2為鈣源進(jìn)行螯合，利用無(wú)水乙醇分級(jí)沉淀螯合物，同時(shí)測(cè)定各級(jí)螯合物的抗氧化與抗菌活性。結(jié)果顯示：1）水不溶物、50%乙醇不溶物、80%乙醇不溶物得率分別為：0.85%、0.86%、1.03%。2）80%乙醇不

66、溶物的抗氧化性效果最好，其清除DPPH·、O2-自由基、OH·自由基的IC50值分別為7.318mg.mL-1、23.22mg.mL-1、5.60mg.mL-1，TBA實(shí)驗(yàn)顯示其抗氧化效果與α-生育酚接近；水不溶物與50%乙醇不溶物均具有一定的抗氧化性效果，但弱于80%乙醇不溶物。3）80%乙醇不溶物的抗菌效果稍強(qiáng)于50%乙醇不溶物，隨著螯合物濃度的提高，抗菌效果增強(qiáng)。</p><p>　　關(guān)

67、鍵詞：鯊魚(yú)肉；酶解液；鈣螯合物；抗氧化；抗菌</p><p>　　Abstract: The chelate was precipitated fractionally by alcohol, which is made from Shark meat hydrolyzate and Calcium chloride. Simultaneously, antimicrobial and antioxidant a

68、ctivity were analysed at all levels of chelation products. The results were as follows: 1) The yeild of water insoluble, 50% alcohol insoluble and 80% alcohol insoluble products were 0.85%, 0.86%, 1.03% , respectively, w

69、hich is relative to wet meat. 2）80% alcohol insoluble showed the best antioxidant activity, it’s IC50 of </p><p>　　Key words: shark meat; hydrolyzate; calcium chelate; antibacterial; antioxidan1引言</p>

70、<p>　　“海中霸王”鯊魚(yú)廣泛分布于印度洋、太平洋和大西洋，為全球性魚(yú)類(lèi)，在我國(guó)南海、東海和黃渤海均有分布。我國(guó)鯊魚(yú)捕撈量較大，年產(chǎn)量近2萬(wàn)噸，漁獲產(chǎn)量以東海區(qū)南部最高，約占全國(guó)產(chǎn)量的44%。而目前對(duì)鯊魚(yú)的利用主要局限于價(jià)值較高、占鯊魚(yú)總重15%的魚(yú)鰭上，其加工下腳料尤其是產(chǎn)量巨大的鯊魚(yú)肉并未得到很好的利用。研究表明，鯊魚(yú)肉營(yíng)養(yǎng)豐富，含豐富的不飽和脂肪酸和多種礦物質(zhì)，其蛋白質(zhì)的氨基酸比值與人體肌肉蛋白成分非常接近，其吸收利

71、用率高，但鯊魚(yú)肉質(zhì)粗，加上含有較多的尿素，感官上并不令人滿意，直接食用往往受到限制。</p><p>　　對(duì)鯊魚(yú)肉的研究，國(guó)內(nèi)主要集中在對(duì)其產(chǎn)品加工工藝方面，對(duì)其深度加工及其生理活性的研究較少。如農(nóng)紹莊[1]等研究了鯊魚(yú)肉魚(yú)腸的制作工藝；袁秋萍[2]對(duì)鯊魚(yú)肉松保健食品進(jìn)行了研制；謝榮輝[3]以鯊魚(yú)肉為原料制作貓食寵物食品，并對(duì)其中添加的抗氧化劑進(jìn)行篩選。目前對(duì)鯊魚(yú)肉的利用多是將其加工成寵物食品或肉腸、魚(yú)松制品，這

72、大大限制了鯊魚(yú)肉的應(yīng)用范圍。</p><p>　　金屬螯合物是由中心離子和多齒配體結(jié)合而成的具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)的配合物。在螯合物的結(jié)構(gòu)中，有一個(gè)或多個(gè)多齒配體提供多對(duì)電子與中心體形成配位鍵[4]。金屬螯合物的研究始于上世紀(jì)70年代，最初由美國(guó)Albion實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，以動(dòng)植物蛋白和鐵元素為原料合成了鐵蛋白復(fù)合物。一般認(rèn)為金屬離子被氨基酸或多肽鰲合后，能生成具有穩(wěn)定結(jié)構(gòu)形態(tài)的金屬螯合物，有機(jī)物中的金屬離子在配位體氨基酸的保

73、護(hù)下，可有效抵御與其它離子生成難溶的無(wú)機(jī)鹽，克服了無(wú)機(jī)鹽的一些缺點(diǎn)，抑制了礦物質(zhì)之間的相互影響，大大提高生物對(duì)于各種金屬元素的吸收利用率。由于金屬螯合物具有良好的利用率和適口性，加上低廉的成本，已被廣泛的應(yīng)用在食品和飼料行業(yè)，尤其是在保健品中。</p><p>　　國(guó)內(nèi)的蛋白酶解物金屬離子螯合研究開(kāi)始于上世紀(jì)90年代，而魚(yú)肉蛋白酶解物的金屬離子螯合研究在近幾年才逐漸出現(xiàn)。目前對(duì)蛋白降解物金屬離子螯合物的生物學(xué)功能

74、研究報(bào)道較多，如劉安軍[5]等研究表明膠原蛋白多肽-鉻(Ⅲ)螯合物可顯著提高小鼠肝臟內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）的表達(dá)量，證明膠原蛋白多肽-鉻(Ⅲ)螯合物可以清除小鼠體內(nèi)大量的自由基，對(duì)肝臟的損傷進(jìn)行保護(hù)；楊燊等[6]以南海低值魚(yú)蛋白為原料，采用木瓜蛋白酶和風(fēng)味酶的復(fù)合酶水解制備多肽復(fù)合物，并進(jìn)一步研究魚(yú)肉蛋白多肽的鈣螯合物，研究表明該鈣螯合物具有一定的抗氧化作用。</p><p>　　魚(yú)肉經(jīng)酶作用水解后，功能和品

75、質(zhì)可得到提高，再經(jīng)過(guò)金屬離子如鈣、鐵、鋅等螯合，不僅能提升其品質(zhì)與功能性，而且有可能體現(xiàn)出新的有益活性。目前利用鯊魚(yú)肉酶解液為原料，制備金屬螯合物，并進(jìn)一步研究其生理活性的研究國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)室在酶解鯊魚(yú)肉，優(yōu)化酶解液鈣螯合條件的基礎(chǔ)上，得到了鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物。本文利用無(wú)水乙醇作為萃取劑，對(duì)優(yōu)化條件下制備的鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物進(jìn)行分級(jí)沉淀，得到水不溶物、50%乙醇不溶物、80%乙醇不溶物三個(gè)螯合物組分，以硫代巴比妥酸法（TBA

76、法）、自由基清除率等分別測(cè)定螯合物的抗氧化活性，同時(shí)以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌為試驗(yàn)菌，以抑菌圈大小為指標(biāo)分析其抗菌活性，旨為鯊魚(yú)肉的開(kāi)發(fā)、鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物的進(jìn)一步利用提供理論依據(jù)。</p><p><b>　　2材料與方法</b></p><p><b>　　2.1 主要材料</b></p><p>　　鯊

77、魚(yú)肉：由溫州某水產(chǎn)開(kāi)發(fā)有限公司提供，為魚(yú)翅加工的副產(chǎn)品。</p><p>　　鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物：由本實(shí)驗(yàn)室自制。</p><p>　　試驗(yàn)菌種：大腸桿菌Esoherichia coli、金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus和枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis均由本院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。</p><p><b>　　2.2

78、主要儀器</b></p><p><b>　　2.3 試劑</b></p><p>　　名稱(chēng) 純度 生產(chǎn)企業(yè)</p><p>　　木瓜蛋白酶（酶活1.11105U/g） 食品級(jí) 廣西南寧龐博生物公司&l

79、t;/p><p>　　鄰菲羅啉 分析純 天津市博迪化工有限公司</p><p>　　過(guò)氧化氫 分析純 杭州高晶精細(xì)化工有限公司</p><p>　　磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉 分析純

80、 汕頭市金砂化工廠</p><p>　　硫酸亞鐵 分析純 四達(dá)表面處理材料廠</p><p>　　三氯化鐵 分析純 上海展云化工有限公司</p><p>　　鐵氰化鉀

81、 分析純 上海試劑一廠</p><p>　　鄰苯三酚 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　Tris(三羥甲基氨基甲烷) 分析純 上海生物工程有限公司</p><p>　　ED

82、TA Na2 分析純 　寧波神化化學(xué)品經(jīng)營(yíng)有限責(zé)任公司</p><p>　　三氯乙酸 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p>　　DPPH?(二苯代苦味?；杂苫? 分析純 和光純藥工業(yè)株式會(huì)社

83、（日本）</p><p>　　鹽酸 分析純 杭州化學(xué)試劑廠</p><p>　　無(wú)水乙醇 分析純 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司</p><p><b>　　2.4 方法</b></

84、p><p>　　2.4.1 鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物的分級(jí)沉淀</p><p>　　蛋白酶解液經(jīng)過(guò)鈣離子螯合，得到不同的螯合物，根據(jù)其極性的不同可采用不同濃度的乙醇濃度將其分離［７］。</p><p>　　酶解液鈣螯合物8000rpm離心15 min，沉淀即為水不溶組分(A)；上清液中加入等體積無(wú)水乙醇，室溫靜置30min，離心，沉淀即為50％無(wú)水乙醇不溶性組分(B)；剩余

85、的上清液中加入無(wú)水乙醇，至乙醇濃度達(dá)到80％，室溫靜置30min，離心，沉淀即為80％無(wú)水乙醇不溶性組分(C)。采用真空冷凍干燥法，將各級(jí)樣品冷凍干燥，冷藏備用。</p><p>　　2.4.2 鈣螯合物抗氧化活性的測(cè)定</p><p>　　2.4.2.1 TBA法（硫代巴比妥酸法）</p><p>　　將0.2ml亞油酸的樣品加入30ml試管中，然后加入10ml

86、99.5%乙醇和10ml 50mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH7.0)。每一種樣品(50mg)加入到此混合溶液中，然后用蒸餾水定容至25ml。將其放入到培養(yǎng)箱中在40℃培養(yǎng)。</p><p>　　TBA溶液根據(jù)Ohkawa等[8]方法配制，該溶液含有0.8ml水、0.2ml 8.1%SDS和1.5ml 20%的醋酸，后用10mol/L的NaOH和1.5ml 0.8%TBA調(diào)pH至3.5。</p&g

87、t;<p>　　將50μl的氧化性亞油酸溶液（分別經(jīng)40℃培養(yǎng)1天、3天、5天、7天、9天）加入到TBA混合液中，并在5℃培養(yǎng)1h，然后在100℃加熱1h，冷卻后測(cè)定535nm吸光值。結(jié)果被表示為對(duì)亞油酸的氧化抑制率，同α-生育酚（VE）的抗氧化性作對(duì)照比較。抑制率的計(jì)算公式：</p><p>　　抑制率(%)=（A－B）×100/( A－C)</p><p>　　

88、式中：A為對(duì)照組（50μl去離子水、0.2ml亞油酸）的吸光度；B為樣品組（50μl樣品液、0.2ml亞油酸）的吸光度；C為α-生育酚液組（50μl α-生育酚液、0.2ml亞油酸）的吸光度。</p><p>　　2.4.2.2 DPPH·清除能力的測(cè)定[9]</p><p>　　具塞試管中加入樣品液2mL及2 mL 1×10-4 mol/L DPPH·溶液(

89、用95%乙醇配制)，搖勻，室溫下密閉靜置30 min，于517 nm下測(cè)定吸光度。</p><p>　　DPPH·清除率(%)=[1－(A1－A2)/A0]×100%</p><p>　　式中：A1：酶解液+DPPH·溶液的吸光度；</p><p>　　A2：酶解液+95%乙醇溶液的吸光度；</p><p>　　

90、A0：DPPH·溶液+蒸餾水的吸光度。</p><p>　　2.4.2.3 O2-·自由基清除能力的測(cè)定[10]</p><p>　　取50mmol·L-1，pH 8.20 Tris-HCl緩沖液4.5mL(其中含有2mmol·L-1 EDTANa2 )，加入0.3mL不同濃度的樣液，25℃保溫10 min，然后加入25℃預(yù)溫的4.5mmol

91、3;L-1的鄰苯三酚(用10mmol·L-1HCl配制) 0.2 mL，混勻后迅速于干燥的比色皿中，在320nm下每隔半分鐘測(cè)定一次吸光值（A），測(cè)到4min。以等體積10mmol·L-1HCl代替鄰苯三酚溶液為空白調(diào)零，對(duì)照組以等體積去離子水代替樣品。</p><p>　　作吸光度隨時(shí)間變化曲線的回歸方程，其斜率為鄰苯三酚的自氧化速率V，按下式計(jì)算樣品對(duì)O2-·的清除率。</

92、p><p>　　式中：V對(duì)照-對(duì)照組鄰苯三酚自氧化速率( △A/min)；V樣品- 樣品組鄰苯三酚自氧化速率(△A /min)。</p><p>　　2.4.2.4 清除OH·自由基能力測(cè)定—鄰二氮菲法[11]</p><p>　　取0.75 mmol·L-1的鄰二氮菲無(wú)水乙醇溶液1mL 于試管中，依次加入2mL0.2mol·L-1醋酸鈉緩

93、沖溶液和1mL蒸餾水，充分混勻后，加入0.75 mmol·L-1硫酸亞鐵溶液1mL，混勻后加入0.01%雙氧水1mL ，37℃ 水浴加熱50 min，在536nm測(cè)其吸光值，所測(cè)吸光值為損傷管的吸光值。</p><p>　　未損傷管以1mL蒸餾水代替損傷管中1mL 0.01%的雙氧水，樣品管以1mL樣品代替損傷管中的1mL蒸餾水，操作方法同損傷管，以蒸餾水調(diào)零，測(cè)得536 nm未損傷管和樣品管的吸光值。

94、</p><p>　　2.4.3 鈣螯合物抗菌性的測(cè)定</p><p>　　2.4.3.1 菌種活化和菌懸液的制備</p><p>　　分別將大腸桿菌Esoherichia coli、金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus和枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis接種于固體斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24 h。取活化培養(yǎng)好的菌株，用無(wú)菌生理鹽水將

95、菌苔洗下，采用菌落計(jì)數(shù)法制成菌體懸浮液，將菌懸液的菌數(shù)稀釋為l×l08CFU/ml。</p><p>　　2.4.3.2 抑菌圈的測(cè)定</p><p>　　采用管碟法（牛津杯法）測(cè)定[12]。1mL菌懸液與15ml左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基后搖勻，放置冷卻后，用無(wú)菌鑷子攝取已經(jīng)干熱滅菌的牛津杯，輕輕平置于平板表面，每皿等距放入4個(gè)牛津杯，每一菌種做2個(gè)平皿，用無(wú)菌微量注射器按順序分別加

96、入相應(yīng)濃度的樣品液0.25 mL，平皿的中央用無(wú)菌生理鹽水做對(duì)照。細(xì)菌置于37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，15 h后測(cè)定抑菌圈直徑。</p><p><b>　　2.5 數(shù)據(jù)處理</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)平行次數(shù)35，取平均值作圖。采用圖表法對(duì)所得到數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，并通過(guò)添加趨勢(shì)線的方法分別計(jì)算DPPH·清除能力、O2-·自由基清除能力、清除OH

97、83;自由基能力的IC50值。</p><p><b>　　3結(jié)果與討論</b></p><p>　　3.1 鯊魚(yú)肉酶解液鈣螯合物各級(jí)乙醇沉淀產(chǎn)物的得率與性質(zhì)</p><p>　　利用乙醇對(duì)螯合物進(jìn)行分級(jí)沉淀，共有組分A（水不溶物）、組分B（50%乙醇不溶物）和組分C（80%</p><p>　　乙醇不溶物）三種產(chǎn)物，各

98、級(jí)產(chǎn)物的得率如圖1所示。</p><p><b>　　圖1 各級(jí)產(chǎn)物得率</b></p><p>　　Fig. 1:The yield of three kinds products</p><p>　　其中水不溶物、50%乙醇不溶物、80%乙醇不溶物得率分別為：0.85%、0.86%、1.03%。三種產(chǎn)物經(jīng)冷凍干燥后特征性質(zhì)如下：</p

99、><p>　?、俳M分A：灰白色粉末狀，較細(xì)膩，不溶于水。</p><p>　?、诮M分B：淺褐色晶體狀物質(zhì)，具有一定的水溶性。</p><p>　?、劢M分C：深褐色晶體狀物質(zhì)，干燥前粘性較強(qiáng)，干燥后呈現(xiàn)顆粒狀晶體，水溶性較好，在低濃度的醇溶液中也有良好的溶解性。</p><p>　　3.2 酶解液鈣螯合物的抗氧化性分析</p><

100、;p>　　.3.2.1 螯合物的抗亞油酸氧化能力</p><p>　　油脂受到光、熱、空氣中氧的作用，發(fā)生酸敗反應(yīng)，分解出醛、酸之類(lèi)的化合物，丙二醛即是其中的一種分解產(chǎn)物，它能與TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉紅色化合物，在538nm處有吸收峰。利用TBA法，以培養(yǎng)1、3，5，7，9天的亞油酸為原料，分別對(duì)水不溶物、50%乙醇不溶物、80%乙醇不溶物的抗氧化性進(jìn)行測(cè)定，并與α-生育酚進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如圖2。&

101、lt;/p><p>　　圖2 三種鈣螯合物組分抗亞油酸氧化的能力</p><p>　　Fig. 2 Three kinds of calcium chelates components resistance to linoleic acid oxidation ability</p><p>　　由圖2可知，組分C（80%乙醇不溶物）的抗亞油酸氧化的效果最好，與α-生育

102、酚抗氧化力比值在90.1%101.2%范圍內(nèi)；其次為組分B（50%乙醇不溶物），與α-生育酚抗氧化力比值在85.1%96.3%范圍內(nèi)；而組分A（水不溶物）抗氧化能力稍弱，與α-生育酚抗氧化能力的比值在79.6%96.9%范圍內(nèi)。</p><p>　　3.2.2 螯合物的清除OH·自由基能力</p><p>　　機(jī)體在生命活動(dòng)中會(huì)不斷產(chǎn)生各種活性氧自由基(Reactive oxyg

103、en species，ROS)，引起DNA損傷、癌變、細(xì)胞衰老等，從而引發(fā)各種疾病，包括腫瘤、衰老、心腦系統(tǒng)損傷，并與神經(jīng)系統(tǒng)及糖尿病并發(fā)癥等很多疾病的發(fā)生密切相關(guān)[13]。各種活性氧自由基中以羥自由基(·OH)作用最強(qiáng)，毒性最大。·OH是一種氧化還原能力很強(qiáng)的自由基，可使體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸和多糖發(fā)生氧化而破壞。因此，·OH的存在和人體的衰老、腫瘤等許多疾病有密切關(guān)系。根據(jù)鄰二氮菲-Fe2+的溶液呈紅色，在5

104、36nm下產(chǎn)生吸收峰[14]。當(dāng)鄰二氮菲-Fe2+被反應(yīng)體系產(chǎn)生的羥自由基氧化后，紅色褪去，536nm吸收值大幅下降。當(dāng)加入清除劑后，吸收值的下降速度減緩，以此來(lái)衡量樣品清除羥自由基的能力。以010 mg·mL-1的濃度梯度分別測(cè)定了組分B（50%乙醇不溶物）與組分C（80%乙醇不溶物）清除OH·自由基能力，結(jié)果見(jiàn)圖3與圖4。</p><p>　　圖3 80%乙醇不溶物清除OH·自由

105、基能力</p><p>　　Fig 3 OH ? free radical scavenging ability of 80% alcohol insoluble products</p><p>　　由圖3可以看出，組分C（80%乙醇不溶物）具有很好的清除O2-·能力，且與其濃度呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，在一定的范圍內(nèi)呈線性相關(guān)，其線性方程為y=6.4145X+12.173（R2=0

106、.8321），計(jì)算得出其IC50值為5.60 mg·mL-1。</p><p>　　圖4 組分B（50%乙醇不溶物）清除OH·自由基能力</p><p>　　Fig 4 OH ? free radical scavenging ability of 50% alcohol insoluble products</p><p>　　圖4可以看出，組

107、分B（50%乙醇不溶物）具有較好的清除O2-·能力，且與其濃度呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，并在一定的范圍內(nèi)呈線性相關(guān)，其線性方程為y=4.397X-2.424 （R2=0.9664），計(jì)算得出其IC50值為11.92mg·mL-1。</p><p>　　由兩者的IC50值可知，組分B的抗氧化效果明顯較組分C差。這可能與組分B的復(fù)溶性較差有關(guān)，也可能與兩者形成螯合物的小肽氨基酸種類(lèi)不同有關(guān)。</p

108、><p>　　3.2.3 螯合物的DPPH·清除能力</p><p>　　二苯代苦味酰自由基（DPPH·）在有機(jī)溶劑中是一種穩(wěn)定的自由基，含有3個(gè)苯環(huán)，1個(gè)氮原子上有1個(gè)孤對(duì)電子，呈紫色，在517 nm有強(qiáng)吸收[15]。在有自由基清除劑存在時(shí)，DPPH·的單電子被配對(duì)而使其顏色變淺，在最大吸收波長(zhǎng)處的吸光度變小，而且這種顏色變淺的程度與配對(duì)電子數(shù)是成化學(xué)計(jì)量關(guān)系的

109、，因此可用于檢測(cè)自由基的清除情況，該法簡(jiǎn)單快速，是最早用于測(cè)定抗氧化活性的間接方法[16]。將組分C(80%乙醇不溶物)按010 mg·mL-1的濃度梯度，測(cè)定其清除二苯代苦味酰自由基（DPPH·）的能力，結(jié)果見(jiàn)圖5。</p><p>　　圖5 組分C（80%乙醇不溶物）清除二苯代苦味酰自由基（DPPH? ）能力</p><p>　　Fig 5 DPPH ? scave

110、nging ability of 80% alcohol insoluble products</p><p>　　由圖5可見(jiàn)，組分C（80%乙醇不溶物）具有顯著的清除DPPH·能力，酶解產(chǎn)物清除DPPH·的能力與其濃度呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。當(dāng)組分C的濃度達(dá)到10mg·mL-1時(shí)，其對(duì)DPPH·的清除能力可以達(dá)到80.18%，其線性方程為y=0.7427X2-1.4416X+