豆渣RNA酶解物制備及其抗氧化活性研究.pdf

1、核酸及核苷酸具有抗氧化功能，在食品及藥品領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用和開(kāi)發(fā)潛力。DNA作為核酸的一種，近年來(lái)受到廣大科研人員的關(guān)注。豆渣是一種良好的植物核酸資源，其核酸含量占豆渣干重的1％左右。對(duì)于豆渣的研究，國(guó)內(nèi)外主要集中于膳食纖維、蛋白質(zhì)、多糖等的提取和測(cè)定方面，尚未見(jiàn)有關(guān)豆渣DNA的提取及功能特性的研究。而開(kāi)展豆渣DNA的相關(guān)研究對(duì)增加豆渣的附加價(jià)值及核酸資源的開(kāi)發(fā)具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。故本試驗(yàn)以豆渣為主要原料，研究了豆渣DNA的提取、純

2、化、酶解，并分析和比較了豆渣DNA與其酶解物的體內(nèi)、外抗氧化活性的差異。
　　 (1)在豆渣細(xì)胞裂解試驗(yàn)中，以DNA提取率為檢測(cè)指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)面優(yōu)化法對(duì)豆渣細(xì)胞的裂解工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。確定了豆渣細(xì)胞裂解的最佳工藝條件:SDS濃度1.85％，裂解液pH值6，裂解溫度81℃，裂解時(shí)間70min，液料比20∶1。在此條件下，DNA提取率達(dá)到了0.625％。
　　 (2)在豆渣DNA純化試驗(yàn)中，以蛋白質(zhì)脫

3、除率和豆渣DNA保留率為指標(biāo)，比較等電點(diǎn)法、三氯乙酸法及高鹽法純化效果，綜合考慮選擇最優(yōu)純化方法——高鹽法:用2/3體積的3mol/L，pH值4.8的醋酸鈉進(jìn)行DNA純化，蛋白脫除率達(dá)85％，DNA保留率為83％。
　　 (3)在豆渣DNA酶解試驗(yàn)中，以酶解率和羥自由基(·OH)清除率為指標(biāo)，用牛胰DNA酶進(jìn)行酶解，在單因素的基礎(chǔ)上進(jìn)行了四因素三水平的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，結(jié)果表明，最佳的酶解條件為:酶解溫度42℃，pH值7，加酶量30

4、00U/g，底物濃度3％，酶解時(shí)間3.5h。在此條件下，豆渣DNA的OD260為1.57，·OH清除率為49.25％。
　　 (4)在豆渣DNA及其酶解物的體外抗氧化試驗(yàn)中，主要研究了其還原能力、DPPH·清除能力、超氧陰離子自由基(O2ˉ·)清除能力及.OH清除能力。結(jié)果表明，豆渣DNA酶解前、后都具有一定的抗氧化能力，在相同濃度下，酶解后的抗氧化功效要優(yōu)于酶解前，但低于Vc的抗氧化能力。DNA酶解物的還原力是DNA的2.5倍

5、，.OH清除率是DNA的2.2倍，O2ˉ·清除率是DNA的2.1倍，DPPH.清除率是DNA的2.4倍。
　　 (5)在豆渣DNA及酶解物的體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)中，以受試小鼠血清、肝臟及腦中的CAT、SOD、GSH-Px活性和MDA含量為指標(biāo)，比較了豆渣DNA酶解前、后及Ve對(duì)小鼠的抗氧化作用。結(jié)果顯示:豆渣DNA及酶解物都能對(duì)正常小鼠起到抗氧化的功效，小鼠體內(nèi)MDA含量明顯下降，CAT、SOD、GSH-Px的活性都有不同程度的升高，