大豆子葉節(jié)再生體系的優(yōu)化及轉(zhuǎn)EPSPS基因的研究.pdf

1、大豆子葉節(jié)再生體系大豆子葉節(jié)再生體系的優(yōu)化及優(yōu)化及轉(zhuǎn)EPSPS基因的研究研究OptimizationofRegenerationSystemviaCotyledonaryNodeTransfmationofEPSPSGeneinSoybean學(xué)科專業(yè)：遺傳學(xué)研究生：王偉指導(dǎo)教師：王罡教授天津大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院二零一二年五月摘要利用基因工程技術(shù)將抗草甘膦基因?qū)氪蠖怪芯哂兄匾慕?jīng)濟(jì)意義，草甘磷的廣泛使用使克隆草甘磷抗性基因、培育抗草甘

2、磷轉(zhuǎn)基因作物成為研究熱點(diǎn)。大豆是公認(rèn)的難轉(zhuǎn)化的作物之一，其遺傳轉(zhuǎn)化體系還不完善，較低的轉(zhuǎn)化效率限制了大豆功能基因組的研究和轉(zhuǎn)基因大豆新品種研發(fā)，所以探索建立一套高效的轉(zhuǎn)化途徑對(duì)于大豆遺傳轉(zhuǎn)化有著重要的意義。本研究在優(yōu)化大豆子葉節(jié)再生體系研究中，篩選出了再生能力強(qiáng)的大豆基因型黑農(nóng)37、黑農(nóng)35、合豐35、合豐25；5d苗齡的大豆子葉節(jié)再生能力較其他苗齡好；向發(fā)芽培養(yǎng)基中添加1～2mgL的6BA，不定芽誘導(dǎo)效果好；不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)加入1.6

3、mgL6BA最有利于不定芽的誘導(dǎo)；生根培養(yǎng)中IBA的濃度為0.5～1.0mgL時(shí)，不定根誘導(dǎo)效果好。通過(guò)對(duì)合豐35和黑農(nóng)37的草甘膦除草劑抗性實(shí)驗(yàn)，確定了合豐35和黑農(nóng)37篩選劑草甘膦濃度分別為5～7mgL和7～9mgL；抑菌劑頭孢霉素的有效抑菌濃度為500mgL。在優(yōu)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化體系中，確定了光下共培養(yǎng)3d有利于抗性不定芽的形成；共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加抗氧化劑為400mgLLcys和154.2mgLDTT；伸長(zhǎng)培養(yǎng)過(guò)程中，合豐35和

4、黑農(nóng)37伸長(zhǎng)培養(yǎng)基中ZT濃度分別為0.5mgL和1.0mgL。通過(guò)草甘膦除草劑的噴灑和涂抹實(shí)驗(yàn)，確定了黑農(nóng)37和合豐35再生植株的抗性鑒定濃度。最后，建立了一個(gè)穩(wěn)定可行的農(nóng)桿菌介導(dǎo)子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化體系，并通過(guò)此遺傳轉(zhuǎn)化體系將EPSPS基因?qū)氪蠖怪?，得到?jīng)過(guò)草甘膦抗性和PCR擴(kuò)增鑒定的陽(yáng)性再生植株。目前，已獲得11株P(guān)CR陽(yáng)性及草甘膦抗性再生植株，合豐35為6株、黑農(nóng)37為5株，均已結(jié)實(shí)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：大豆子葉節(jié)再生EPSPS基因遺傳轉(zhuǎn)化