農(nóng)桿菌介導(dǎo)的GmUBC2基因的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、本研究以五星2號大豆子葉節(jié)為受體材料進(jìn)行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化，并且對不同大豆品種、不同生長時(shí)期的基因組DNA提取方法進(jìn)行優(yōu)化，在此基礎(chǔ)上，研究大豆抗逆基因GmUBC2的遺傳轉(zhuǎn)化，以獲得的T1代PCR陽性植株為試驗(yàn)材料進(jìn)行LAMP技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因大豆效率的初步探討。主要結(jié)果如下:
　　 1、探討超聲波結(jié)合抽真空處理、侵染階段搖床轉(zhuǎn)速、抗氧化劑DTT對大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化效率的影響，并對篩選劑Basta的使用濃度進(jìn)行了摸索。發(fā)現(xiàn)在侵染階段超

2、聲波處理30s結(jié)合抽真空3 min、侵染轉(zhuǎn)速為190 rpm、DTT濃度為1.0 mmol/L時(shí)，平均叢生芽數(shù)最高，并且前兩種處理轉(zhuǎn)化效率分別達(dá)到2.56％、2.25％;在叢生芽篩選階段最適Basta濃度為8.0 mg/L。
　　 2、采用不同方法提取大豆基因組，在嫩葉期，改進(jìn)的CTAB法能夠分離出純度高、質(zhì)量好的DNA，而在開花期，采用本試驗(yàn)的新改良CTAB法可以有效去除多糖、酚類等物質(zhì)得到完整性和純度較好的大豆基因組，為大豆

3、的分子生物學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 3、以優(yōu)化的大豆子葉節(jié)遺傳轉(zhuǎn)化體系，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行了五星2號大豆抗逆基因GmUBC2的遺傳轉(zhuǎn)化，在莖伸長時(shí)間為21 d時(shí)，轉(zhuǎn)化植株的PCR陽性率最高，達(dá)到73.15％。Gm UBC2基因轉(zhuǎn)化植株經(jīng)PCR檢測及針刺Basta篩選獲得T0代陽性植株61個(gè)，轉(zhuǎn)化率為0.61％。經(jīng)PCR和RT-PCR鑒定共獲得2株T1代陽性植株，初步證明目的基因已整合到大豆基因組中。
　　 4、LAMP