農桿菌介導大豆子葉節(jié)轉化體系優(yōu)化及轉植酸酶基因大豆功能鑒定.pdf

1、本研究以品系12，冀豆12和豫豆22三個大豆品種為材料，采用農桿菌介導方法對大豆子葉節(jié)進行轉化，設計了不同品種、不同共培養(yǎng)光照條件和不同共培養(yǎng)時間的正交試驗將植酸酶基因phyA基因轉入大豆基因組內，并得到了一批抗性植株。利用轉基因高代植株吉林35對轉基因大豆進行功能鑒定。
　　 (1)大豆遺傳轉化體系優(yōu)化：在本研究范圍內大豆品種冀豆12子葉節(jié)在侵染以后，接種到pH5.4的共培養(yǎng)基上，在24℃，10 h光照的條件下共培養(yǎng)10d，誘

2、導篩選，獲得較高的抗性芽出芽率。
　　 (2)提取T6代轉基因植株mRNA，根據phyA基因設計引物進行逆轉錄，對cDNA序列測定，測定的序列與GenBank中的序列進行BLAST比對，結果表明其與目標phyA基因(GenBank注冊號為：AF537344.1)同源性達到99％，說明目的基因在轉基因大豆植株中穩(wěn)定遺傳和表達。
　　 (3)本試驗以轉植酸酶基因大豆高代植株不同株系為供試材料，利用營養(yǎng)液液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)基無

3、菌培養(yǎng)的方法，測定了不同轉化株系根系分泌植酸酶的能力和不同磷處理條件下對磷的吸收利用能力。結果表明，植酸鈉處理下，高代轉化株系根系分泌植酸酶能力高于對照植株，營養(yǎng)液培養(yǎng)條件下T6-12、T6-44、T6-66與對照差異顯著，超對照2.9-3.5倍；而在固體培養(yǎng)基無菌培養(yǎng)條件下T6-3、T6-12和T6-44與對照差異顯著，提高2.4-2.8倍。植酸磷處理下，轉化株系磷含量比對照株系高1.11-3.18倍，T6-12、T6-44分別是對照