鴨TLR2基因多態(tài)性及其與免疫性能的相關(guān)研究.pdf

1、本研究以鴨TLR2基因為候選基因，利用生物信息學方法，克隆了鴨TLR2（Tolllike receptor2）基因的編碼全序列，在群體范圍內(nèi)進行了PCR-SSCP分析，并對鴨TLR2單核苷酸多態(tài)性及其與部分免疫性能指標之間進行關(guān)聯(lián)分析，篩選與鴨的早期免疫性狀相關(guān)的分析標記，為鴨的分子標記輔助育種提供理論基礎(chǔ)。
　　 一、鴨TLR2基因的克隆及其生物信息學分析
　　 本實驗克隆得到的鴨TLR2基因編碼全序列，全長2383b

2、p，由一個開放閱讀框組成，編碼793個氨基酸，分子量為90416.6Da，等電點為7.08。鴨TLR2基因與人、牛、豬、老鼠和雞TLR2基因序列的比對結(jié)果顯示，鴨TLR2基因與雞TLR2基因序列同源性最高為80.0％，人（63.5％）次之，順次為豬（61.4％），鼠（60.0％）和牛（58.4％）。蛋白的2、3級結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示，該序列內(nèi)存在5次跨膜分子組成TLR超家族的基序。鴨推定TLR2蛋白的三維結(jié)構(gòu)以人TLR2蛋白為模型，相似度為77

3、.397％。
　　 二、鴨TLR2 PCR-SSCP檢測及其多態(tài)與免疫性能的關(guān)聯(lián)分析
　　 試驗采用PCR-SSCP的方法對所克隆的鴨TLR2基因部分編碼序列進行了SNPs檢測。試驗設(shè)計的4對引物中，在M2和M4兩對引物擴展序列中檢測到了多態(tài)性，均表現(xiàn)為2種基因型。鴨群體中SNPM2以等位基因A為主，等位基因頻率達到0.8335，等位基因B頻率僅為0.1665。SNPM4以等位基因C為主，等位基因頻率達到0.8415，等

4、位基因D頻率僅為0.1585。x2適合性檢驗結(jié)果表明，鴨群體在SNPM2和SNPM4均處于平衡狀態(tài)（p>0.05）。SNPM2和SNPM4的多態(tài)信息含量分別為0.239和0.231，屬低度多態(tài)。
　　 最小二乘分析和顯著性檢驗表明：SNPsM2和SNPsM4兩個變異位點各形成的兩種基因型個體的免疫器官指數(shù)之間差異都不顯著（P>0.05）。對縉云麻鴨TLR2基因編碼全序列部分片段不同基因型與免疫細胞因子進行最小二乘均值多重比較，結(jié)