維生素D免疫調(diào)節(jié)作用及其受體基因多態(tài)性與自身免疫性糖尿病的關(guān)系.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分維生素D受體基因FokⅠ多態(tài)性與自身免疫性糖尿病的關(guān)系 目的:①探討維生素D受體(VDR)基因FokⅠ多態(tài)性與自身免疫性糖尿?。═IDM和LADA)的關(guān)系;②探討VDR基因FokⅠ多態(tài)性對(duì)谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)滴度的影響。 對(duì)象與方法:研究對(duì)象為TIDM患者241例,LADA患者354例,T2DM患者473例,正常對(duì)照380例。采用PCR-RFLP方法檢測VDR基因FokⅠ多態(tài)性,放射配體法檢測GADA滴度

2、,放射免疫法檢測胰島素和C肽;分析VDR基因FokⅠ多態(tài)性與糖尿病、GADA滴度及胰島β細(xì)胞功能的關(guān)系。 結(jié)果:①全體觀察對(duì)象VDR基因FokⅠ基因型符合Hardy-Weinberg平衡;②VDR基因FokⅠ多態(tài)性在對(duì)照組和糖尿病組間比較,糖尿病組ff基因型和f等位基因頻率(22.3%,48.1%)高于正常對(duì)照(17.9%,42.8%),而FF基因型和F等位基因頻率(26.1%,51.9%)低于正常對(duì)照組(32.4%,57.2%

3、)(P<0.05);③LADA組ff基因型分布頻率(27.1%)高于正常對(duì)照組(17.9%),而T2DM組FF基因型分布頻率(24.1%)低于正常對(duì)照組(32.4%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.028、0.011);;此外,T1DM組VDR基因FokⅠ基因型分布與LADA組基因型分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.041),而與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;攜帶ff基因型人群中LADA患病相對(duì)危險(xiǎn)性增加(OR值為1.707,95%的可信區(qū)

4、間為1.201~2.427);④在LADA患者中,GADA滴度在ff組最高(0.1742),F(xiàn)f基因型組次之(0.1363),F(xiàn)F基因型最低(0.1104),基因型ff組顯著高于FF組(P<0.05);⑤分別以GADA滴度0.3和0.8為切點(diǎn),將LADA組分為高滴度組(GADA>0.3,0.8,LADA-1組)和低滴度組(GADA<0.3,0.8,LADA-2組),無論在切點(diǎn)0.3或者0.8,LADA-1組與正常對(duì)照比較,VDR基因Fo

5、kⅠ基因型分布差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而LADA-2的FokⅠ基因型分布與對(duì)照組比較無差異(P>0.10)。在切點(diǎn)0,8,LADA-1組與LADA-2組比較,VDR基因FokⅠ基因型分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009);而在切點(diǎn)0.3,VDR基因FokⅠ基因型在LADA-1組與LADA-2組中的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.179)。⑥在TIDM組,VDR基因FokⅠ3種基因型之間臨床及代謝指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>

6、0.05);Ff基因型組與ff基因型組的FCP、PCP均低于FF基因型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑦在LADA組,VDR基因FokⅠ3種基因型之間臨床及代謝指標(biāo)無差異(P>0.05);Ff基因型組與ff基因型組的FCP低于FF基因型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HOMA-IS在FF組最高,F(xiàn)f基因型組次之,ff基因型最低;HOMA-IR在ff組最高,F(xiàn)f基因型組次之,F(xiàn)F基因型最低,但二者均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

7、結(jié)論:VDR基因FokⅠ多態(tài)性與T1DM遺傳易感性不相關(guān),與GADA滴度亦不相關(guān)。VDR基因FokⅠff基因型與LADA風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān),可能是LADA遺傳易感基因之一。LADA患者VDR基因FokⅠ多態(tài)性與GADA滴度相關(guān),其VDR基因FokⅠ ff基因型與高GADA滴度呈正相關(guān)。 第二部分自身免疫性糖尿病單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TLR4的表達(dá) 目的:觀察自身免疫性糖尿病患者外周單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TL

8、R4的表達(dá)。 對(duì)象與方法:1型糖尿病患者(T1DM)16例、成人隱匿性自身免疫糖尿病患者(LADA)18例、2型糖尿病患者(T2DM)22例和正常對(duì)照23例,用化學(xué)分離法獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)后,磁珠分離法獲取純化的單核細(xì)胞,使用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TLR4的表達(dá)。用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測血清IL-1β和TNF-α水平。 結(jié)果:LADA患者單核細(xì)胞表面CD14表達(dá)顯著高

9、于T1DM、T2DM和正常對(duì)照人群(P<0.001),而TIDM患者單核細(xì)胞CD14的表達(dá)較正常人群低(P=0.002),T2DM患者單核細(xì)胞CD14水平與正常對(duì)照組相比無顯著差異(P>0.05)。LADA和T2DM患者單核細(xì)胞表面TLR4表達(dá)高于TIDM和正常對(duì)照(P<0.05),LADA與T2DM比較無差異(P>0.05)。各組人群單核細(xì)胞TLR2表達(dá)均未發(fā)現(xiàn)有差異性(P>0.05)。各組糖尿病患者IL-1β和TNF-α水平均較高,

10、正常人群IL-1β低于可檢測值。 結(jié)論:T1DM和LADA單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TLR4表達(dá)的變化,提示自身免疫性糖尿病可能存在天然免疫調(diào)控的改變。 第三部分維生素D3對(duì)自身免疫性糖尿病單核細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用 目的:探討1,25(OH)2D3對(duì)自身免疫性糖尿病單核細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法:體外培養(yǎng)的外周單核細(xì)胞分別從23例正常對(duì)照、16例1型糖尿病患者(T1DM)、18例成人隱匿性自身免疫糖尿

11、病患者(LADA)以及22例2型糖尿病患者(T2DM)中獲得。觀察1,25(OH)2D3預(yù)干預(yù)后,單核細(xì)胞對(duì)TLR2配體(脂磷壁酸,LTA)和TLR4配體(脂多糖,LPS)的反應(yīng)性變化以及單核細(xì)胞表面CD14,TLR2和TLR4表達(dá)變化。流式細(xì)胞儀分析單核細(xì)胞CD14,TLR2和TLR4表達(dá)以及NF-κB-p65磷酸化水平,IL-1β和TNF-α水平用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測。 結(jié)果:LPS和LTA降低TIDM,T2DM

12、和正常對(duì)照組單核細(xì)胞表面CD14的表達(dá),而增加LADA組單核細(xì)胞表面CD14的表達(dá)(P<0.05);LTA對(duì)單核細(xì)胞表面TLR2表達(dá)的影響在T1DM、LADA、T2DM和正常對(duì)照組間比較無差異(P>0,05);LPS使正常對(duì)照組單核細(xì)胞表面TLR4表達(dá)下降的幅度明顯高于T1DM、LADA和T2DM組(P<0.05)。LPS和LTA干預(yù)后,TIDM、LADA和T2DM單核細(xì)胞NF-κB-p65磷酸化水平和IL-1β和TNF-α濃度均明顯高

13、于正常對(duì)照組(P<0.001);1,25(OH)2D3預(yù)干預(yù)后,LPS和LTA對(duì)單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TLR4表達(dá)、NF-κB-p65磷酸化水平和IL-1β和TNF-α,濃度的影響各組間比較無差異(P>0.05)。 結(jié)論:LPS和LTA刺激可降低正常對(duì)照組和TIDM單核細(xì)胞表面CD14的表達(dá),而升高LADA單核細(xì)胞表面CD14的表達(dá),這可能是LADA的一個(gè)特異性表現(xiàn)。1,25(OH)2D3預(yù)干預(yù)后,TIDM和LADA單

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