維生素D免疫調(diào)節(jié)作用及其受體基因多態(tài)性與自身免疫性糖尿病的關(guān)系.pdf

1、第一部分維生素D受體基因FokⅠ多態(tài)性與自身免疫性糖尿病的關(guān)系 目的：①探討維生素D受體（VDR）基因FokⅠ多態(tài)性與自身免疫性糖尿?。═IDM和LADA）的關(guān)系；②探討VDR基因FokⅠ多態(tài)性對谷氨酸脫羧酶抗體（GADA）滴度的影響。 對象與方法：研究對象為TIDM患者241例，LADA患者354例，T2DM患者473例，正常對照380例。采用PCR-RFLP方法檢測VDR基因FokⅠ多態(tài)性，放射配體法檢測GADA滴度

2、，放射免疫法檢測胰島素和C肽；分析VDR基因FokⅠ多態(tài)性與糖尿病、GADA滴度及胰島β細(xì)胞功能的關(guān)系。 結(jié)果：①全體觀察對象VDR基因FokⅠ基因型符合Hardy-Weinberg平衡；②VDR基因FokⅠ多態(tài)性在對照組和糖尿病組間比較，糖尿病組ff基因型和f等位基因頻率（22.3％，48.1％）高于正常對照（17.9％，42.8％），而FF基因型和F等位基因頻率（26.1％，51.9％）低于正常對照組（32.4％，57.2％

3、）（P<0.05）；③LADA組ff基因型分布頻率（27.1％）高于正常對照組（17.9％），而T2DM組FF基因型分布頻率（24.1％）低于正常對照組（32.4％），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值分別為0.028、0.011）；；此外，T1DM組VDR基因FokⅠ基因型分布與LADA組基因型分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.041），而與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；攜帶ff基因型人群中LADA患病相對危險(xiǎn)性增加（OR值為1.707，95％的可信區(qū)

4、間為1.201～2.427）；④在LADA患者中，GADA滴度在ff組最高（0.1742），F(xiàn)f基因型組次之（0.1363），F(xiàn)F基因型最低（0.1104），基因型ff組顯著高于FF組（P<0.05）；⑤分別以GADA滴度0.3和0.8為切點(diǎn)，將LADA組分為高滴度組（GADA>0.3，0.8，LADA-1組）和低滴度組（GADA<0.3，0.8，LADA-2組），無論在切點(diǎn)0.3或者0.8，LADA-1組與正常對照比較，VDR基因Fo

5、kⅠ基因型分布差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而LADA-2的FokⅠ基因型分布與對照組比較無差異（P>0.10）。在切點(diǎn)0，8，LADA-1組與LADA-2組比較，VDR基因FokⅠ基因型分布差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.009）；而在切點(diǎn)0.3，VDR基因FokⅠ基因型在LADA-1組與LADA-2組中的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.179）。⑥在TIDM組，VDR基因FokⅠ3種基因型之間臨床及代謝指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>

6、0.05）；Ff基因型組與ff基因型組的FCP、PCP均低于FF基因型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑦在LADA組，VDR基因FokⅠ3種基因型之間臨床及代謝指標(biāo)無差異（P>0.05）；Ff基因型組與ff基因型組的FCP低于FF基因型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HOMA-IS在FF組最高，F(xiàn)f基因型組次之，ff基因型最低；HOMA-IR在ff組最高，F(xiàn)f基因型組次之，F(xiàn)F基因型最低，但二者均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

7、結(jié)論：VDR基因FokⅠ多態(tài)性與T1DM遺傳易感性不相關(guān)，與GADA滴度亦不相關(guān)。VDR基因FokⅠff基因型與LADA風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)，可能是LADA遺傳易感基因之一。LADA患者VDR基因FokⅠ多態(tài)性與GADA滴度相關(guān)，其VDR基因FokⅠ ff基因型與高GADA滴度呈正相關(guān)。 第二部分自身免疫性糖尿病單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TLR4的表達(dá) 目的：觀察自身免疫性糖尿病患者外周單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TL

8、R4的表達(dá)。 對象與方法：1型糖尿病患者（T1DM）16例、成人隱匿性自身免疫糖尿病患者（LADA）18例、2型糖尿病患者（T2DM）22例和正常對照23例，用化學(xué)分離法獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）后，磁珠分離法獲取純化的單核細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀（FCM）檢測單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TLR4的表達(dá)。用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測血清IL-1β和TNF-α水平。 結(jié)果：LADA患者單核細(xì)胞表面CD14表達(dá)顯著高

9、于T1DM、T2DM和正常對照人群（P<0.001），而TIDM患者單核細(xì)胞CD14的表達(dá)較正常人群低（P=0.002），T2DM患者單核細(xì)胞CD14水平與正常對照組相比無顯著差異（P>0.05）。LADA和T2DM患者單核細(xì)胞表面TLR4表達(dá)高于TIDM和正常對照（P<0.05），LADA與T2DM比較無差異（P>0.05）。各組人群單核細(xì)胞TLR2表達(dá)均未發(fā)現(xiàn)有差異性（P>0.05）。各組糖尿病患者IL-1β和TNF-α水平均較高，

10、正常人群IL-1β低于可檢測值。 結(jié)論：T1DM和LADA單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TLR4表達(dá)的變化，提示自身免疫性糖尿病可能存在天然免疫調(diào)控的改變。 第三部分維生素D3對自身免疫性糖尿病單核細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用 目的：探討1，25（OH）2D3對自身免疫性糖尿病單核細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法：體外培養(yǎng)的外周單核細(xì)胞分別從23例正常對照、16例1型糖尿病患者（T1DM）、18例成人隱匿性自身免疫糖尿

11、病患者（LADA）以及22例2型糖尿病患者（T2DM）中獲得。觀察1，25（OH）2D3預(yù)干預(yù)后，單核細(xì)胞對TLR2配體（脂磷壁酸，LTA）和TLR4配體（脂多糖，LPS）的反應(yīng)性變化以及單核細(xì)胞表面CD14，TLR2和TLR4表達(dá)變化。流式細(xì)胞儀分析單核細(xì)胞CD14，TLR2和TLR4表達(dá)以及NF-κB-p65磷酸化水平，IL-1β和TNF-α水平用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測。 結(jié)果：LPS和LTA降低TIDM，T2DM

12、和正常對照組單核細(xì)胞表面CD14的表達(dá)，而增加LADA組單核細(xì)胞表面CD14的表達(dá)（P<0.05）；LTA對單核細(xì)胞表面TLR2表達(dá)的影響在T1DM、LADA、T2DM和正常對照組間比較無差異（P>0，05）；LPS使正常對照組單核細(xì)胞表面TLR4表達(dá)下降的幅度明顯高于T1DM、LADA和T2DM組（P<0.05）。LPS和LTA干預(yù)后，TIDM、LADA和T2DM單核細(xì)胞NF-κB-p65磷酸化水平和IL-1β和TNF-α濃度均明顯高

13、于正常對照組（P<0.001）；1，25（OH）2D3預(yù)干預(yù)后，LPS和LTA對單核細(xì)胞表面CD14、TLR2和TLR4表達(dá)、NF-κB-p65磷酸化水平和IL-1β和TNF-α，濃度的影響各組間比較無差異（P>0.05）。 結(jié)論：LPS和LTA刺激可降低正常對照組和TIDM單核細(xì)胞表面CD14的表達(dá)，而升高LADA單核細(xì)胞表面CD14的表達(dá)，這可能是LADA的一個(gè)特異性表現(xiàn)。1，25（OH）2D3預(yù)干預(yù)后，TIDM和LADA單