白蘞提取物核磁共振指紋圖譜的研究【開題報(bào)告】

1、<p><b>　　畢業(yè)論文開題報(bào)告</b></p><p><b>　　化學(xué)工程與工藝</b></p><p>　　白蘞提取物核磁共振指紋圖譜的研究</p><p><b>　　一、前言</b></p><p>　　中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建

2、立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評(píng)價(jià)中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實(shí)性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。中藥及其制劑均為多組分復(fù)雜體系，因此評(píng)價(jià)其質(zhì)量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而對(duì)藥品質(zhì)量進(jìn)行整體描述和評(píng)價(jià)[1]。在此基礎(chǔ)上，如果進(jìn)一步開展譜效學(xué)研究，可使中藥質(zhì)量與其藥效真正結(jié)合起來，有助于闡明中藥作用機(jī)理。總之，中藥指紋圖譜的研究和建立，對(duì)

3、于提高中藥質(zhì)量，促進(jìn)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。</p><p>　　二、中藥指紋圖譜概述</p><p>　　中藥指紋圖譜技術(shù)的特色和創(chuàng)新點(diǎn)</p><p>　　中藥指紋圖譜的研究以反映中藥的整體化學(xué)特征為立論依據(jù)，提出以解決兩個(gè)關(guān)鍵技術(shù)為突破口，實(shí)現(xiàn)指紋圖譜技術(shù)在中藥質(zhì)量控制方面的應(yīng)用。它的特色主要表現(xiàn)在三個(gè)方面： </p><p>　　1、

4、用規(guī)范化的程序獲得中藥特征性總成分提取物，并用1HNMR、HPLC、UV、IR等多種手段表征其組成和結(jié)構(gòu)。不同的表征手段間的區(qū)別主要表現(xiàn)在所得到的信息多少不同和操作上的方便程度不同。同此，核心的問題在于這種特征性總成分提取物要有真正的特征性，它的組成和結(jié)構(gòu)要能正真代表這種中藥。</p><p>　　2、由于同時(shí)采用多種檢測手段來表征中藥特征總提物的結(jié)構(gòu)和相對(duì)組成方式，因此，方便了各部門在質(zhì)量控制方面可以根據(jù)自己的

5、實(shí)際情況選擇應(yīng)用。其中，由于1HNMR具有操作簡便、快速、檢測成本低、重現(xiàn)性好和信息量大等優(yōu)點(diǎn)，更是中藥指紋圖譜研究的主要特色之一[2]。 </p><p>　　3、中藥指紋圖譜的解析研究以及中藥特征總提物和各單體成分的生理活性研究體現(xiàn)了這一技術(shù)的科學(xué)性。 </p><p>　　中藥指紋圖譜的研究將近代分離手段和儀器分析技術(shù)應(yīng)用于中藥的質(zhì)量控制，目的在于建立一種新的質(zhì)量控制方法，因此，是一

6、種具有創(chuàng)新性的研究工作。另外，每種中藥指紋圖譜的建立和對(duì)其進(jìn)行的解析也均具有顯著的創(chuàng)新性。</p><p>　　指紋圖譜建立的一般原則</p><p>　　中藥指紋圖譜的建立，應(yīng)以系統(tǒng)的化學(xué)成分研究和藥理學(xué)研究為依托，體現(xiàn)系統(tǒng)性、特征性和穩(wěn)定性三個(gè)基本原則。為此，才能保證指紋圖譜的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化、客觀化，從而便于推廣和應(yīng)用[3]。 </p><p>　　1.系統(tǒng)性

7、是指指紋圖譜中反映的化學(xué)成分應(yīng)包括該中藥有效部位所含大部分成分，或指標(biāo)性成分的全部，如中藥兩頭尖中抗腫瘤的有效成分為皂苷類化合物，則其指紋圖譜應(yīng)盡可能地反映其中的皂苷類成分；銀杏葉的有效成分是黃酮類和銀杏內(nèi)酯類，則其指紋圖譜可采用兩種方法，針對(duì)這兩類成分分別分析，達(dá)到系統(tǒng)全面的目的。 </p><p>　　2.特征性 是指指紋圖譜中反映的化學(xué)信息（如保留時(shí)間）應(yīng)具有較強(qiáng)的選擇性，這些信息的綜合結(jié)果，將能特征性地區(qū)

8、分中藥的真?zhèn)闻c優(yōu)劣，成為中藥自身的“化學(xué)條碼”。如北五味子的HPLC指紋圖譜和TLC指紋圖譜，不僅包括多種的五味子木脂素類成分，而且具有許多未知類成分，這些成分的峰位順序、比值在一定范圍內(nèi)是固定的，并且隨藥材品種不同而產(chǎn)生差異，依此可以很好地區(qū)別其來源、產(chǎn)地，判別藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣。 </p><p>　　3.穩(wěn)定性 是指所建立的指紋圖譜在規(guī)定的方法、條件下的耐用程度，即不同操作者、不同實(shí)驗(yàn)室所重復(fù)做出的指紋圖譜應(yīng)在

9、所允許的誤差范圍內(nèi)，以體現(xiàn)其通用性和實(shí)用性。因而要求包括樣品制備、分析方法、實(shí)驗(yàn)過程、數(shù)據(jù)采集、處理、分析等全過程都要規(guī)范化操作，同時(shí)，還應(yīng)建立相應(yīng)的評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)，對(duì)其進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)。</p><p><b>　　指紋圖譜的分類</b></p><p>　　目前，中藥指紋圖譜技術(shù)已涉及眾多方法，包括薄層掃描（TLCS）、高效液相色譜法（HPLC）、氣象色譜法（GC）和高效毛

10、細(xì)管電泳法（HPCE）等色譜法以及紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、質(zhì)譜法（MS）、核磁共振法（NMR）和X—射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認(rèn)的三種常規(guī)分析手段[4]。由于HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)。中藥成分絕大多數(shù)可在高效液相色譜儀上進(jìn)行分析檢測，且積累較豐富的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。因此高效液相色譜法已成為中藥指紋圖譜技術(shù)的首選方法。隨著H

11、PLC—MS和GC—MS等聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用[5]，中藥指紋圖譜技術(shù)更趨完善。</p><p>　　指紋圖譜技術(shù)研究概況</p><p>　　以指紋圖譜作為中藥（天然藥物）提取物及其制劑的質(zhì)量控制方法，已成為目前國際共識(shí)，各種符合中藥（天然藥物）特色的指紋圖譜控制技術(shù)體系正在研究和建立。美國食品藥品管理局（FDA）允許草藥保健品申報(bào)資料中提供色譜指紋圖譜；世界衛(wèi)生組織（WHO）在1996年草藥

12、評(píng)價(jià)指導(dǎo)原則中也規(guī)定，如果草藥的活性成分不明確，可以提供色譜指紋圖譜以證明產(chǎn)品質(zhì)量的一致；歐共體在草藥質(zhì)量指南中亦稱，單靠測定某種有效成分考查質(zhì)量的穩(wěn)定性是不夠的，因?yàn)椴菟幖捌渲苿┦且哉w為活性物質(zhì)。色譜指紋圖譜尤其是薄層色譜的鮮明的指紋圖譜是很有用的。國外指紋圖譜的應(yīng)用，目的在于解決成分復(fù)雜，有效成分不明確的植物藥質(zhì)量檢測和產(chǎn)品批次間質(zhì)量差異的問題。其中德國研制的銀杏葉提取物制劑是一個(gè)突出的例子。他們應(yīng)用指紋圖譜制定了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)，該圖

13、譜體現(xiàn)了制劑所含的33個(gè)化學(xué)成分（主要為黃酮類和內(nèi)酯類）和各自的含量。經(jīng)化學(xué)成分和藥效相關(guān)性研究，發(fā)現(xiàn)約24%銀杏黃酮和約6%銀杏內(nèi)酯組成的提取物具有最佳療效。此外，采用“混批勾兌”法[6]，可使最終產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，指紋圖譜重現(xiàn)性良好，含量浮動(dòng)范圍為5%左右。 </p><p>　　20世紀(jì)70年代我國已有學(xué)者嘗試使用TLCS對(duì)中成藥進(jìn)行分析，因主客觀條件的限制，技術(shù)和時(shí)機(jī)的不成熟，沒有得到公認(rèn)；20世紀(jì)90年代《

14、中國藥典》增設(shè)了中藥化學(xué)對(duì)照品和對(duì)照藥材，為中藥指紋圖譜的研究奠定了基礎(chǔ)。隨著色譜技術(shù)的迅速發(fā)展和檢測能力的顯著增強(qiáng)，為指紋圖譜的研究和應(yīng)用提供了良好的技術(shù)保證。目前我國已對(duì)中藥注射劑做出了必須用指紋圖譜進(jìn)行檢測的規(guī)定，同時(shí)提出了具體的技術(shù)要求；在中藥材規(guī)范化生產(chǎn)實(shí)施過程中指紋圖譜亦有較廣泛的應(yīng)用。 </p><p>　　但是作為一項(xiàng)新技術(shù)，中藥指紋圖譜在實(shí)際應(yīng)用中還面臨許多問題，只有進(jìn)一步加強(qiáng)中藥材種植加工和中

15、成藥生產(chǎn)貯存的規(guī)范化；中藥化學(xué)成分和中藥藥理研究的系統(tǒng)化和標(biāo)準(zhǔn)化；以及技術(shù)上多學(xué)科的滲透，才能保證中藥質(zhì)量的穩(wěn)定，進(jìn)而保證中藥指紋圖譜的建立和實(shí)施。</p><p>　　三、白蘞提取物核磁共振指紋圖譜的研究的研究內(nèi)容及擬采取的研究方法</p><p><b>　　主要任務(wù)與目標(biāo)</b></p><p>　　以有機(jī)溶劑對(duì)不同產(chǎn)地白蘞進(jìn)行次生代謝物

16、的提取與分離，對(duì)其特征提取物進(jìn)行核磁共振指紋圖譜研究。</p><p>　　分別用產(chǎn)地是四川、湖北和陜西的白蘞進(jìn)行試驗(yàn)，用乙醇對(duì)白蘞進(jìn)行冷浸提取將白蘞中的有效成分提取出來，在利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇提高白蘞中藥效成分的濃度并用不同極性有機(jī)溶劑石油醚、乙酸乙酯、正丁醇來萃取。取其正丁醇萃取物進(jìn)行核磁共振譜圖研究及分析</p><p><b>　　主要內(nèi)容</b></

17、p><p>　　先將買來的白蘞用研磨機(jī)器研磨，研磨成粉末狀。將研磨好的白蘞粉末倒入圓底燒瓶中并加入乙醇溶液，放入如圖裝置進(jìn)行冷浸提取，調(diào)節(jié)水浴箱溫度調(diào)節(jié)到90℃。待冷凝管中出現(xiàn)乙醇液體時(shí)開始計(jì)時(shí)30分鐘后停止加熱將球型燒瓶取出，靜置后把球型燒瓶中提取后的乙醇溶液倒入空桶中收集起來。再將乙醇溶液倒入球型燒瓶中重復(fù)冷浸提取3到4次，將收集好的含有白蘞提取物的乙醇溶液收集在一個(gè)桶內(nèi)做好標(biāo)簽。</p><

18、p>　　將桶內(nèi)的白蘞提取物的乙醇溶液倒入干凈的圓底燒瓶中，組裝到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的溫度調(diào)節(jié)到50℃并且調(diào)節(jié)好旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的轉(zhuǎn)速調(diào)經(jīng)好高度將球型燒瓶的3/1浸沒在水槽中裝置如圖所示。打開真空泵很快就會(huì)有乙醇蒸發(fā)出來并滴入大的球形燒瓶，這時(shí)候要細(xì)心觀察冷凝柱的接口處，如有倒吸暴沸的現(xiàn)象應(yīng)該立即調(diào)節(jié)開關(guān)，這樣可以有效的阻止倒吸暴沸。直到收集的含有白蘞的乙醇溶液都濃縮完后將小圓底燒瓶中的白蘞提取物的濃縮物質(zhì)取出再將餾出的乙醇重新回

19、收收集。分別用不同極性有機(jī)溶劑石油醚、乙酸乙酯、正丁醇來萃取白蘞的提取物，分別收集好萃取后的溶液做好標(biāo)簽。隨后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀分別將石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取的溶液進(jìn)行蒸餾濃縮，得到濃度較高的白蘞提取物不同組分的物質(zhì)。</p><p>　　最后取正丁醇萃取物進(jìn)行核磁共振譜圖研究及分析。</p><p>　　四、論文詳細(xì)工作進(jìn)度和安排</p><p><b>

20、　　計(jì)劃進(jìn)度</b></p><p>　　2010年11月22日前，學(xué)生選題，布置論文任務(wù)；</p><p>　　2011年1月10日前，在廣泛查閱文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，完成外文翻譯、文獻(xiàn)綜述和開題報(bào)告等工作；</p><p>　　2011年5月23日前，進(jìn)行課題的實(shí)驗(yàn)、設(shè)計(jì)、調(diào)研及結(jié)果的處理與分析等，完成畢業(yè)設(shè)計(jì)說明書或論文寫作，進(jìn)行畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的修改

21、完善；</p><p>　　2011年6月10日前，畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）答辯。</p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 甘師俊，李振吉，鄒健強(qiáng).中藥現(xiàn)代化發(fā)展戰(zhàn)略［M］.北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1998</p><p>　　[2]秦海林,尚玉俊,趙偉. 核磁共振氫譜法鑒別黃連的研究

22、. 中草藥, 2000, 31(1):48.</p><p>　　[3]安燕，李海麗，于軍。建立中藥指紋圖譜的一般方法，青海師專學(xué)報(bào)（教育科學(xué)）2006年第五期</p><p>　　[4]劉慧瓊,郭書好. 現(xiàn)代儀器與中草藥指紋圖譜, 中醫(yī)藥學(xué)報(bào), 2002, 32(2):35.</p><p>　　[5] 朱穎超，劉 斌 ，徐冬艷，石任兵. 核磁共振及其聯(lián)用技術(shù)在天