蝶蛹金小蜂寄生對(duì)菜粉蝶蛹細(xì)胞免疫與生理代謝的影響.pdf

1、蝶蛹金小蜂Pteromaluspuparum是菜粉蝶Pierisrapae蛹期優(yōu)勢(shì)內(nèi)寄生蜂，該蜂僅以毒液抑制寄主免疫。本論文就蝶蛹金小蜂寄生對(duì)寄主細(xì)胞免疫與生理代謝的影響進(jìn)行了研究。結(jié)果概述如下： 1.蝶蛹金小蜂寄生對(duì)菜粉蝶蛹血細(xì)胞的影響光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果表明，受蝶蛹金小蜂寄生影響最大的是寄主顆粒血細(xì)胞與漿血細(xì)胞。寄生后這兩種血細(xì)胞變圓，粘附與延展行為受到抑制，而其它類型血細(xì)胞形態(tài)上未受影響。然而透射電鏡觀察結(jié)果表明，除囊血細(xì)胞

2、外，蝶蛹金小蜂寄生對(duì)菜粉蝶蛹各類型血細(xì)胞均造成不同程度的損傷。 2.蝶蛹金小蜂毒液對(duì)菜粉蝶蛹血細(xì)胞包囊與吞噬反應(yīng)的影響采用尼龍毛法分離純化了菜粉蝶蛹顆粒血細(xì)胞與漿血細(xì)胞。研究了毒液對(duì)菜粉蝶蛹包囊反應(yīng)關(guān)鍵步驟及顆粒血細(xì)胞與漿血細(xì)胞吞噬反應(yīng)的影響。結(jié)果表明血細(xì)胞數(shù)量、毒液濃度均顯著影響包囊指數(shù)。菜粉蝶蛹體外包囊反應(yīng)試驗(yàn)中，包囊反應(yīng)的第一步為顆粒血細(xì)胞粘附在異物上，毒液的存在雖會(huì)減少粘附在異物上的顆粒血細(xì)胞數(shù)量，但不會(huì)完全阻止包囊反應(yīng)

3、第一步的發(fā)生。但毒液的存在能使包囊反應(yīng)第二步漿血細(xì)胞的募集階段無(wú)法進(jìn)行，導(dǎo)致包囊反應(yīng)第三步即顆粒血細(xì)胞粘附在包囊最外層的漿血細(xì)胞上，形成包囊的外圍無(wú)法實(shí)現(xiàn)，最終導(dǎo)致無(wú)法形成完整的包囊。菜粉蝶蛹血淋巴漿質(zhì)對(duì)包囊指數(shù)無(wú)顯著影響。 菜粉蝶蛹顆粒血細(xì)胞是主要具有吞噬能力的血細(xì)胞，漿血細(xì)胞多少也能吞噬大腸桿菌，毒液能顯著抑制顆粒血細(xì)胞與漿血細(xì)胞吞噬能力，并且這種抑制能力與毒液的劑量正相關(guān)。 3.蝶蛹金小蜂寄生對(duì)菜粉蝶蛹血淋巴和脂肪

4、體糖代謝的影響研究了蝶蛹金小蜂寄生24h，36h，48h，60h和72h后菜粉蝶蛹血淋巴與脂肪體糖代謝功能。結(jié)果表明，經(jīng)蝶蛹金小蜂寄生的菜粉蝶蛹血淋巴與脂肪體中丙酮酸含量顯著降低，乳酸含量顯著升高，乳酸脫氫酶活性顯著降低，表明進(jìn)入三羧酸循環(huán)的丙酮酸量減少。蘋果酸脫氫酶與琥珀酸脫氫酶是線粒體中參與三羧酸循環(huán)的關(guān)鍵酶。在被蝶蛹金小蜂寄生的初始階段，菜粉蝶蛹血淋巴與脂肪體蘋果酸脫氫酶活性升高，隨著寄生時(shí)間的延長(zhǎng)，這兩種酶活性被顯著抑制，說(shuō)明寄

5、生導(dǎo)致菜粉蝶蛹血淋巴與脂肪體呼吸率降低，菜粉蝶蛹設(shè)法從無(wú)氧糖酵解獲得能量以抵御毒液所帶來(lái)的壓力。 4.蝶蛹金小蜂寄生對(duì)菜粉蝶蛹抗氧化酶活性與抗氧化劑水平的影響寄主昆蟲在防御寄生蜂等入侵異物時(shí)產(chǎn)生氧脅迫，釋放對(duì)細(xì)胞有毒的活性氧(ROS)。測(cè)定了蝶蛹金小蜂寄生24h，36h，48h，60h和72h后菜粉蝶蛹血淋巴及脂肪體與氧脅迫相關(guān)的抗氧化酶活性與抗氧化劑水平。蝶蛹金小蜂寄生導(dǎo)致菜粉蝶蛹脂肪體超氧化物歧化酶與血淋巴過(guò)氧化氫酶活性及血

6、淋巴與脂肪體谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活性顯著下降，說(shuō)明由于寄生而注入的毒液及菜粉蝶蛹隨之產(chǎn)生的大量ROS鈍化了上述抗氧化酶活性；而菜粉蝶蛹血淋巴與脂肪體谷胱甘肽還原酶活性與還原型谷胱甘肽水平在整個(gè)試驗(yàn)中與對(duì)照基本無(wú)顯著差異，表明寄生并未誘導(dǎo)谷胱甘肽還原酶與還原型谷胱甘肽產(chǎn)生對(duì)抗防衛(wèi)。 5.蝶蛹金小蜂寄生對(duì)菜粉蝶蛹質(zhì)膜上磷酸酶與轉(zhuǎn)氨酶活性的影響測(cè)定了蝶蛹金小蜂寄生24h，36h，48h，60h和72h后菜粉蝶蛹血淋巴與脂肪體結(jié)合在質(zhì)膜