生物科學畢業(yè)論文三疣梭子蟹血細胞微生物誘導(dǎo)前后數(shù)量變化研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　三疣梭子蟹血細胞微生物誘導(dǎo)前后數(shù)量變化研究</p><p>　　所在學院 </p><p>　　專業(yè)班級

2、 生物科學 </p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　目錄</b&

3、gt;</p><p><b>　　摘要I</b></p><p>　　AbstractII</p><p><b>　　引言1</b></p><p><b>　　1材料與方法2</b></p><p><b>　　1.1材料2

4、</b></p><p>　　1.2試劑及儀器2</p><p>　　1.2.1培養(yǎng)基及試劑配制2</p><p>　　1.2.2儀器2</p><p><b>　　1.3方法3</b></p><p>　　1.3.1誘導(dǎo)菌的準備3</p><p

5、>　　1.3.2注射用菌的準備3</p><p>　　1.3.3三疣梭子蟹的誘導(dǎo)和血細胞計數(shù)4</p><p>　　1.3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計5</p><p><b>　　2結(jié)果6</b></p><p>　　2.1對照組血細胞變化6</p><p>　　2.2藤黃微球菌誘導(dǎo)

6、后血細胞變化6</p><p>　　2.3副溶血弧菌誘導(dǎo)后血細胞變化7</p><p>　　2.4酵母誘導(dǎo)后血細胞變化8</p><p><b>　　3討論9</b></p><p><b>　　參考文獻10</b></p><p><b>　　致謝

7、11</b></p><p><b>　　摘要</b></p><p>　　[摘要] 近年來三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）病害呈現(xiàn)逐年上升趨勢，成為制約該產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要因素。一般認為，甲殼動物的成熟血細胞由透明細胞、小顆粒細胞和大顆粒細胞組成。甲殼動物的大顆粒細胞具有酚氧化酶原系統(tǒng)，在受到免疫刺激后可以激活酚氧化酶原及

8、具有細胞毒作用；小顆粒細胞具有包囊作用和有限的吞噬作用；透明細胞主要具有吞噬功能。但在不同微生物感染后，是由那一類型細胞發(fā)揮主要作用，或是不同類型細胞協(xié)同清除目前還不清楚。本研究通過注射藤黃微球菌，副溶血弧菌及酵母菌三種不同類型微生物，觀察統(tǒng)計三疣梭子蟹血細胞的動態(tài)變化，推導(dǎo)不同類型血細胞在清除不同類型微生物中的地位，為研究血細胞的功能奠定基礎(chǔ)。研究中注射微生物量為20ul，濃度為107個/ml，在微生物誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)后0.5h、1h、2

9、h、4h、8h、16h、24h、48h，分別從每組中隨機選3只梭子蟹抽取血細胞觀察并計數(shù)。用Excel處理數(shù)據(jù)并統(tǒng)計其是否具有顯著變化，并作圖分析得出最后結(jié)論。實驗結(jié)果顯示對照組與3個誘導(dǎo)組血細胞的波動范圍并不顯著，沒有哪個細胞群在不同微生物的誘導(dǎo)中出現(xiàn)顯著變化，表明三疣梭子蟹血</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 三疣梭子蟹；血細胞；微生物誘導(dǎo)；數(shù)量變化</p><p><b>　

10、　Abstract</b></p><p>　　[Abstract] In recent years, Portunus trituberculatus disease showed an upward trend year by year, as a constraint to the healthy development of the industry, an important factor

11、. Crustaceans blood cells are generally believed to be composed of granular cells, semi-granular cells and hyaline cells. Large crustaceans granulosa cells prophenoloxidase system, can be activated by immune stimulation

12、prophenoloxidase, and the cytotoxic effect; small particles with the encapsulation and limited cell ph</p><p>　　[Key words] Portunus trituberculatus; haemocyte; Microbial induced; quantity change</p>

13、<p><b>　　引言</b></p><p>　　三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）是我國重要的經(jīng)濟蟹類，南北沿岸淺海均產(chǎn)。90年代起，由于蝦病的暴發(fā)和流行，對蝦養(yǎng)殖業(yè)受到很大沖擊，許多地區(qū)開始尋找替代對蝦這一主導(dǎo)養(yǎng)殖品種的養(yǎng)殖對象，三疣梭子蟹作為一種優(yōu)良的海水甲殼類養(yǎng)殖品種正逐步成為海水養(yǎng)殖的主導(dǎo)產(chǎn)品，僅浙江省2007年全省三疣梭子蟹養(yǎng)殖面積就達

14、到58320畝，產(chǎn)量26404噸，產(chǎn)值超過20億元。隨著梭子蟹養(yǎng)殖業(yè)的進一步發(fā)展，養(yǎng)殖規(guī)?？焖贁U大，養(yǎng)殖面積和密度不斷增加，加上日趨嚴重的養(yǎng)殖環(huán)境污染，使得梭子蟹病害亦呈現(xiàn)逐年上升趨勢，成為制約該產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的重要因素[1]。例如，2001年浙江舟山市出現(xiàn)的暴發(fā)性梭子蟹疾病――“乳化病”，全市3萬畝養(yǎng)殖梭子蟹發(fā)病率達到30%以上，死亡率達100%，經(jīng)濟損失巨大。迄今為止，肌肉乳化病、固著類纖毛蟲病和弧菌病等仍然困擾著三疣梭子蟹養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展

15、。因此，如何有效提高三疣梭子蟹的自身免疫力，提高其抗病能力，避免或減少由于用藥所帶來的負面影響，是目前三疣梭子蟹養(yǎng)殖中亟待解決的問題。研究三疣梭子蟹免疫防御系統(tǒng)組成，探索其免疫機制，可為尋找該難題的解決方案提供重要線索。</p><p>　　甲殼動物是無脊椎動物的一個重要類群，同時由于甲殼動物中的蝦蟹類是大宗養(yǎng)殖品種，有巨大經(jīng)濟價值，研究甲殼動物免疫系統(tǒng)的組成和免疫防御機理可為蝦蟹類養(yǎng)殖病害防治及遺傳育種提供理論

16、依據(jù)和新的思路，使得甲殼動物非特異性免疫防御機理領(lǐng)域的研究一直是熱點問題。已有報道表明：甲殼動物非特異免疫防御系統(tǒng)組成與其它無脊椎動物一致，可分為細胞免疫和體液免疫，而血細胞在這兩種免疫方式中都起關(guān)鍵作用，一方面血細胞通過吞食、包圍化以及結(jié)節(jié)的形成，清除入侵微生物，另一方面部分體液因子如抗菌肽、酚氧化還原酶前體等是在血細胞中合成、儲存、釋放[2]。一般認為甲殼動物的成熟血細胞由透明細胞、小顆粒細胞和大顆粒細胞等3類組成[3][4][5]

17、。關(guān)于不同類型血細胞功能的研究在20世紀90年代之前較多，一般認為，甲殼動物的大顆粒細胞具有酚氧化酶原系統(tǒng)，在受到免疫刺激后可以激活酚氧化酶原，以及具有細胞毒作用[6][7][8]；小顆粒細胞也具有酚氧化酶原系統(tǒng)，具有細胞毒作用，并具有包囊作用和有限的吞噬作用[7][9][10][8]，透明細胞主要具有吞噬功能[11][12][13]。但在不同微生物感染后，是由那一類型細胞發(fā)揮主要作</p><p><b&

18、gt;　　材料與方法</b></p><p><b>　　材料</b></p><p>　　三疣梭子蟹購自舟山市北門農(nóng)貿(mào)市場。選擇附肢完整、無傷口、健康活潑的三疣梭子蟹，體重150 g-200 g/只，25 ℃海水暫養(yǎng)備用。</p><p>　　菌種來源：購于廣微菌種保藏中心</p><p><b>

19、;　　試劑及儀器</b></p><p><b>　　培養(yǎng)基及試劑配制</b></p><p>　　10%甲醛的抗凝劑（Alsever′s抗凝劑）：27 mmol/L檸檬酸鈉，336 mmol/L氯化鈉，115 mmol/L葡萄糖，9 mmol/L乙二胺四乙酸，pH 7.0</p><p>　　LB液體培養(yǎng)基： 胰蛋白胨

20、Tryptone 10 g/L</p><p>　　酵母提取物 Yeast Extract 5 g/L</p><p>　　氯化鈉 NaCl 10 g/L</p><p>　　LB固體培養(yǎng)基： 胰蛋白胨 Tryptone 10 g/L</p><p&g

21、t;　　酵母提取物 Yeast Extract 5 g/L</p><p>　　氯化鈉 NaCl 10 g/L</p><p>　　瓊脂 15 g/L</p><p>　　YPD液體培養(yǎng)基：酵母膏 Yeast Extract 10 g/L&l

22、t;/p><p>　　蛋白胨 Peptone 20 g/L</p><p>　　YPD固體培養(yǎng)基：酵母膏 Yeast Extract 10 g/L</p><p>　　蛋白胨 Peptone 20 g/L</p><p>　　瓊脂

23、 20 g/L</p><p><b>　　儀器</b></p><p>　　電子天平（BS124S型，塞多利斯科學儀器(北京)有限公司）、臺式恒溫振蕩器（THZ-B）、無菌操作臺（ZHJH-C1209C 超凈工作臺）、電子顯微鏡（YSZ-2）、制冰機（SIM-F140AY65）、可調(diào)式封閉電爐（上海錦凱科學儀器有限公司），干燥箱（PH070A型

24、，上海一恒科學儀器有限公司），高壓蒸汽滅菌鍋等。</p><p><b>　　方法</b></p><p><b>　　誘導(dǎo)菌的準備</b></p><p>　　1.3.1.1 培養(yǎng)基配制</p><p><b>　　液體培養(yǎng)基配制：</b></p><p&

25、gt;　　在電子天平上準確稱取胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化鈉10 g；</p><p>　　加入950 ml去離子水，在電爐上加熱至完全溶解；</p><p>　　用1 mol/l NaOH調(diào)PH 7.0，定容至1000 ml；</p><p>　　121 oC高壓蒸汽滅菌20 min。</p><p><b>　　固體

26、培養(yǎng)基配制：</b></p><p>　　在電子天平上準確稱取胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，氯化鈉10 g，加瓊脂15 g；</p><p>　　加入950 ml去離子水，在電爐上加熱至完全溶解；</p><p>　　用1 mol/l NaOH調(diào)PH 7.0，定容至1000 ml；</p><p>　　121 oC高

27、壓蒸汽滅菌20 min；</p><p>　　待培養(yǎng)基冷卻到50 oC左右后倒平板；</p><p>　　無菌操作臺紫外滅菌30 min后，靠近酒精燈將培養(yǎng)皿打開一小口，迅速倒入固體培養(yǎng)基約15 ml，酒精燈滅菌后加蓋；</p><p>　　輕輕晃動培養(yǎng)皿使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部。平放于無菌操作臺上，待培 養(yǎng)基凝固。</p><p>　

28、　1.3.1.2 菌種純化</p><p>　　將接種環(huán)浸在盛有酒精的燒杯中，將沾有少量酒精的接種環(huán)在火焰上燃燒，待酒精燃燒后，冷卻8至10 s；</p><p>　　靠近酒精燈火焰，用接種環(huán)沾取少量菌液均勻的在培養(yǎng)基表面劃平行線。劃線時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使劃線均勻；</p><p>　　接種完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，將培養(yǎng)皿正面放置30 min后倒置37 oC培養(yǎng)過夜；

29、</p><p>　　觀察生長出來的菌落的形態(tài)，并從平板上挑取單個菌落于含3 ml液體培養(yǎng)基的試管中37 oC 200 轉(zhuǎn)/min搖床培養(yǎng)過夜。</p><p><b>　　注射用菌的準備</b></p><p>　　1．取潔凈的血球計數(shù)板一塊，在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片；</p><p>　　從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)

30、沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿產(chǎn)生氣泡，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌液；</p><p>　　靜置片刻，使細胞沉降到計數(shù)板上，不再隨液體漂移；</p><p>　　將血球計數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)；</p><p>　　計數(shù)得細菌濃度為108 個/ml，由于菌

31、液濃度過大因此用無菌水稀釋10倍后備用。</p><p>　　三疣梭子蟹的誘導(dǎo)和血細胞計數(shù)</p><p>　　1.3.3.1 誘導(dǎo)前血細胞計數(shù)</p><p>　　1．將40只梭子蟹隨機分成4組，每組10只25 oC海水飼養(yǎng)備用；</p><p>　　2．用潔凈的1 mL一次性注射器吸取0.1 mL用冰預(yù)冷的10%甲醛固定液，然后從三疣梭

32、子蟹的步足基關(guān)節(jié)處抽取0.1 mL血淋巴液，混合至均勻；</p><p>　　3．取潔凈的血球計數(shù)板一塊，在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片；</p><p>　　4．從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓血淋巴利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿產(chǎn)生氣泡，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余血淋巴液；</p><p>　　靜置片刻，使細胞沉降到計數(shù)板上

33、，不再隨液體漂移；</p><p>　　將血球計數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū) 后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。</p><p>　　1.3.3.2 菌液誘導(dǎo)</p><p>　　1．用1ml一次性注射器抽取20 ul藤黃菌液，注射到第一組的10只梭子蟹中；</p><p>　　2．用1ml一次性注射器抽取20

34、 ul酵母菌液，注射到第二組的10只梭子蟹中；</p><p>　　3．用1ml一次性注射器抽取20 ul副溶血弧菌菌液，注射到第三組的10只梭子蟹中；</p><p>　　4．用1ml一次性注射器抽取20 ul無菌水，注射到第四組的10只梭子蟹中，作為對照組。</p><p>　　1.3.3.3 誘導(dǎo)后血細胞計數(shù)</p><p>　　注射菌

35、液后分別過0.5 h、1 h、2 h、4 h、8 h、16 h、24 h、48 h，從每組中隨機選3只梭子蟹抽取血細胞觀察。</p><p>　　用潔凈的1 mL一次性注射器吸取0.1 mL用冰預(yù)冷的10%甲醛固定液，然后從三疣梭子蟹的步足基關(guān)節(jié)處抽取0.1 mL血淋巴液，混合至均勻；</p><p>　　2．取潔凈的血球計數(shù)板一塊，在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片；</p><

36、;p>　　3．從計數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓血淋巴利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿產(chǎn)生氣泡，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余血淋巴液；</p><p>　　靜置片刻，使細胞沉降到計數(shù)板上，不再隨液體漂移；</p><p>　　5．將血球計數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計數(shù)。</p>&l

37、t;p><b>　　數(shù)據(jù)統(tǒng)計</b></p><p>　　本研究中的統(tǒng)計計算均在Microsoft office的Excel中進行。</p><p>　　標準偏差(Std Dev， Standard Deviation)按公式計算</p><p>　　用以衡量數(shù)據(jù)值偏離算術(shù)平均值的程度。標準偏差越小，這些值偏離平均值就越少，反之亦然。標準

38、偏差的大小可通過標準偏差與平均值的倍率關(guān)系來衡量。</p><p>　　以F檢驗比較兩組數(shù)據(jù)的方差，以確定他們的精密度是否有顯著性差異。若兩總體方差相等，則直接用t 檢驗，若不等，可采用t' 檢驗。</p><p>　　T檢驗是用于小樣本（樣本容量小于30）的兩個平均值差異程度的檢驗方法。</p><p><b>　　計算公式：</b>

39、</p><p>　　它是用T分布理論來推斷差異發(fā)生的概率，從而判定兩個平均數(shù)的差異是否顯著。</p><p><b>　　結(jié)果</b></p><p><b>　　對照組血細胞變化</b></p><p>　　如圖1所示，對照組誘導(dǎo)前后血細胞各類群的細胞總量未發(fā)現(xiàn)顯著變化，表明實驗條件穩(wěn)定，實驗組

40、血細胞各類群的細胞量若發(fā)生顯著變化，則有統(tǒng)計意義。同時血細胞各細胞群的比值也沒有明顯的變化趨勢，基本保持恒定。</p><p>　　圖1 對照組誘導(dǎo)前后血細胞數(shù)量的變化 A. 對照組血細胞變化趨勢圖； B. 對照組血細胞百分率變化圖</p><p>　　FIG 1. The control group before and after induction of changes in t

41、he number of haemocyte A. Changes in the control group trend of haemocyte; B. Percentage change in the control group Figure haemocyte </p><p>　　藤黃微球菌誘導(dǎo)后血細胞變化</p><p>　　如圖2所示，G+藤黃微球菌誘導(dǎo)前后血細胞各類群的細胞

42、量雖有先降后升再下降的運行趨勢，但與誘導(dǎo)前相比，這種變化趨勢沒有顯著變化，不具備統(tǒng)計學意義。同時血細胞各細胞群的比值也沒有明顯的變化趨勢，基本保持恒定。表明血細胞在清除G+藤黃微球菌時可能是協(xié)同作用，并沒有某種細胞起主導(dǎo)作用。</p><p>　　圖2 藤黃微球菌誘導(dǎo)前后血細胞數(shù)量的變化 A. 藤黃微球菌誘導(dǎo)后血細胞變化趨勢圖；B. 藤黃微球菌誘導(dǎo)后血細胞百分率變化圖</p><p>

43、　　FIG 2. Micrococcus luteus induced changes in the number of haemocyte before and after A. M. luteus induced changes in trends in haemocyte B. M. luteus induced changes in haemocyte percentage figure</p><p&

44、gt;　　副溶血弧菌誘導(dǎo)后血細胞變化</p><p>　　如圖3所示，G-副溶血弧菌誘導(dǎo)前后半顆粒細胞與透明細胞上升趨勢，最后又基本恢復(fù)到誘導(dǎo)前水平，而顆粒細胞則沒有明顯的變化趨勢，但統(tǒng)計結(jié)果表明所有細胞類群變化量沒有顯著的統(tǒng)計意義，這種變化趨勢提示半顆粒細胞與透明細胞可能在G-的免疫中起主要作用，但有待進一步的嚴謹實驗去證實。</p><p>　　圖3 副溶血弧菌誘導(dǎo)前后血細胞數(shù)量的變化

45、 A. 副溶血弧菌誘導(dǎo)后血細胞變化趨勢圖；B. 副溶血弧菌誘導(dǎo)后血細胞變化百分率圖</p><p>　　FIG 3. Vibrio parahaemolyticus induced changes in the number of haemocyte before and after A. V. parahaemolyticus induced changes in trends of haemocyte

46、; B. V. parahaemolyticus induced changes in haemocyte percentage figure </p><p>　　酵母誘導(dǎo)后血細胞變化</p><p>　　如圖4所示，酵母誘導(dǎo)前后血細胞各類群的細胞量基本保持恒定，并沒有明顯的變化趨勢，且變化量的統(tǒng)計結(jié)果也表明實驗時間區(qū)段沒有顯著變化，細胞的波動值

47、沒有統(tǒng)計學意義。同時血細胞各細胞群的比值也沒有明顯的變化趨勢，基本保持恒定。表明血細胞在針對酵母的免疫防御時可能是協(xié)同作用，并沒有某種細胞起主導(dǎo)作用。</p><p>　　圖4酵母菌誘導(dǎo)前后血細胞數(shù)量的變化 A. 酵母誘導(dǎo)后血細胞變化趨勢圖；B. 酵母誘導(dǎo)后血細胞變化百分率圖</p><p>　　FIG 4 Yeast induced changes in the number of

48、haemocyte before and after A. Induced changes in haemocyte of yeast trend; B. Induced changes in haemocyte of yeast percentage figure</p><p><b>　　討論</b></p><p>　　一般認為甲殼動物的3種細胞中，大顆粒

49、細胞在受到誘導(dǎo)后，可釋放免疫因子，如激活酚氧化酶原等，具有細胞毒作用；而小顆粒細胞也釋放免疫因子，殺滅入侵微生物，具有細胞毒作用，同時還有包囊作用和有限的吞噬作用；透明細胞主要通過吞噬作用清理入侵微生物。但在不同微生物，如革蘭氏陰性菌、陽性菌及酵母等感染后，是由那一類型細胞發(fā)揮主要作用，還是不同類型細胞協(xié)同清除目前還不清楚。特別是近年來對甲殼類直接殺滅微生物的免疫因子――抗菌肽的大量研究結(jié)果表明：一般抗菌肽對革蘭氏陽性菌具有較強的殺滅或

50、抑制作用，而對致病菌的主要類群――革蘭氏陰性菌則作用較弱或沒有效果[14]，使得人們對甲殼類血細胞的免疫防御機制更加困惑。Matozzo V等[15]研究濱蟹（Carcinus aestuarii）血細胞在免疫反應(yīng)中的作用時發(fā)現(xiàn)，血細胞總體波動幅度很大，只有透明細胞對酵母有吞噬作用，在誘導(dǎo)過程中細胞總體吞噬能力很弱，主要依賴于水解作用、氧化酶活性及超氧離子的活性清除入侵微生物[15]。在本研究中，對照組與3個誘導(dǎo)組血細胞的波動范圍并不顯

51、著，沒有哪個細胞群在不同微生物的誘導(dǎo)中出現(xiàn)顯著變化，表明三疣梭子蟹血細胞在免疫中可能</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 趙潤朝. 三疣梭子蟹養(yǎng)殖中常見疾病的防治. 河北農(nóng)業(yè)科技, 2007, V2: 41.</p><p>　　[2] Johansson MW, Keyser P, Sritunyaluc

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56、hores F, Gollas-Galvan T, Hernandez-Lopez J. Functional characterization of Farfantepenaeus californiensis, Litopenaeus vannamei and L. stylirostris haemocyte separated using density gradient centrifugation. Aquacul Res,

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58、15.</p><p>　　[10] Kobavashi M, Johansson MW, Soderhall K. The 76 kD cell-adhesion factor from crayfish haemocytes promotes encapsulation in vitro. Cell Tissue Res, 1990, V260: 13-18. </p><p>　　[

59、11] Smith VJ, Soderhall K. β-1, 3 -glucan activation of crustacean hemocytes in vitro and in vivo. Biol Bull, 1983, V164: 299-314.</p><p>　　[12] Thornqvist PO, Johansson MW, Soderhall K. Opsonic activity of

60、cell adhesion protein and β-1, 3 -glucan binding protein from two crustaceans. Dev Comp Immunol, 1994, V18: 3-12.</p><p>　　[13] Matozzo V, Marin MG. The role of haemocytes from the crab Carcinus aestuarii (C

61、rustacea, Decapoda) in immune responses: A first survey. Fish and Shellfish Immunology, 2010, 28: 534-541.</p><p>　　[14] 黃文樹, 王克堅, 李少菁. 甲殼動物抗菌肽研究進展. 海洋科學, 2005, 29(2): 64-68.</p><p>　　[15] Matoz

62、zo V, Marin M G. The role of haemocytes from the crab Carcinus aestuarii (Crustacea, Decapoda) in immune responses: A first survey. Fish & Shellfish Immunology, 2010, 28: 534-541.</p><p><b>　　致謝<

63、;/b></p><p>　　本課題實驗和學位論文是在指導(dǎo)老師申望老師的悉心指導(dǎo)下完成的。申老師淵博的專業(yè)知識，嚴謹?shù)闹螌W態(tài)度，精益求精的工作作風對我影響深遠。</p><p>　　本論文從選題到完成，每一步都是在導(dǎo)師的指導(dǎo)下完成的，傾注了導(dǎo)師大量的心血。在此，謹向?qū)煴硎境绺叩木匆夂椭孕牡母兄x.另外，還要感謝胡波同學在實驗過程中對我的無私幫助，使我得以順利完成論文。</p&g

64、t;<p>　　在四年的大學生涯里，還得到眾多老師和同學的關(guān)心、支持和幫助，在此，謹向他們致以衷心的感謝和崇高的敬意!</p><p><b>　　附件</b></p><p>　　一．對照組誘導(dǎo)前后血細胞數(shù)量變化統(tǒng)計（*106 個/mL）</p><p>　　1.對照組顆粒細胞數(shù)量變化</p><p>&

65、lt;b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>　　2.對照組半顆粒細胞數(shù)量變化</p><p>

66、<b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>　　3.對照組透明粒細胞數(shù)量變化</p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p>

67、;<b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>　　二．藤黃微球菌誘導(dǎo)前后血細胞數(shù)量變化統(tǒng)計（*106 個/mL）</p><p>　　1. 藤黃微球菌誘導(dǎo)前后顆粒細胞數(shù)量變化</p><p><b>　　F-檢驗</b></

68、p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>　　2. 藤黃微球菌誘導(dǎo)前后半顆粒細胞數(shù)量變化</p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b&

69、gt;</p><p>　　3. 藤黃微球菌誘導(dǎo)前后透明細胞數(shù)量變化</p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>　　三．副溶血弧菌誘導(dǎo)前后血細胞數(shù)量變化統(tǒng)計（*106 個/mL）</p><p>　　1. 副溶

70、血弧菌誘導(dǎo)前后顆粒細胞數(shù)量變化</p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>

71、　　2. 副溶血弧菌誘導(dǎo)前后半顆粒細胞數(shù)量變化</p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p>&

72、lt;p>　　3. 副溶血弧菌誘導(dǎo)前后透明細胞數(shù)量變化</p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>　　四．酵母菌誘導(dǎo)前后血細胞數(shù)量變化統(tǒng)計（*106 個/mL）

73、</p><p>　　1. 酵母菌誘導(dǎo)前后顆粒細胞數(shù)量變化</p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>　　2. 酵母菌誘導(dǎo)前后半顆粒細胞數(shù)量變

74、化</p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　F-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p><b>　　t-檢驗</b></p><p>　　3. 酵母菌誘導(dǎo)前后透明