虎皮魚puntius tetrazona暴發(fā)性死亡超微病理學(xué)研究【畢業(yè)設(shè)計】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　虎皮魚Puntius tetrazona暴發(fā)性死亡超微病理學(xué)研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　

2、專業(yè)班級 生物技術(shù) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>

3、;　　目錄</b></p><p><b>　　1引言1</b></p><p><b>　　2材料與方法2</b></p><p>　　2.1材料與試劑2</p><p>　　2.1.1實驗材料2</p><p>　　2.1.2實驗試劑2&l

4、t;/p><p>　　2.1.3實驗儀器及器皿2</p><p>　　2.2實驗方法2</p><p>　　2.2.1取材2</p><p>　　2.2.2制作超薄切片2</p><p><b>　　3試驗結(jié)果3</b></p><p>　　3.1虎皮魚病

5、癥3</p><p>　　3.2 虎皮魚組織病原觀察3</p><p>　　3.3 電鏡下的虎皮魚各組織超微病理3</p><p><b>　　3.3.1 腸3</b></p><p>　　3.3.2 肌肉5</p><p>　　3.3.3 肝臟6</p>

6、<p>　　3.3.4 生殖細(xì)胞7</p><p><b>　　3.3.5 胃8</b></p><p>　　3.3.6 心臟9</p><p>　　3.3.7 腎臟11</p><p>　　4實驗分析與討論11</p><p>　　致謝錯誤!未定義書簽。</p>

7、;<p><b>　　參考文獻13</b></p><p>　　摘要：虎皮魚是一種主要的觀賞魚類，近年來，虎皮魚的養(yǎng)殖技術(shù)在我國得到了迅速發(fā)展，并且已經(jīng)成為觀賞魚養(yǎng)殖業(yè)的主導(dǎo)養(yǎng)殖品種。但是它的病害問題一直是影響虎皮魚養(yǎng)殖業(yè)的一個重要因素，根據(jù)近年的病害調(diào)查，發(fā)現(xiàn)虎皮魚的發(fā)病率及死亡率都呈上升趨勢，給養(yǎng)殖戶造成了很大的危害，并且這種現(xiàn)象發(fā)生后沒有良好的控制方法。近期，從某養(yǎng)殖場

8、取得的大量暴發(fā)性死亡的虎皮魚，除鰭部輕微充血，尾鰭部分?jǐn)嗔淹?，無其他明顯癥狀。解剖后，部分死魚臟器有明顯囊腫，光學(xué)顯微鏡下觀察無寄生蟲感染。本研究擬通過分析暴發(fā)性死亡虎皮魚的超微病理變化，分析死亡原因，為虎皮魚病害的防治提供理論依據(jù)。取瀕死虎皮魚的腸、肌肉、肝臟、生殖組織、胃、心臟、腎臟制作超薄切片，在透射電鏡下觀察超微病理變化，發(fā)現(xiàn)大量病毒感染，各臟器均有明顯病變。</p><p>　　關(guān)鍵詞：虎皮魚；透射電鏡

9、；超微病理</p><p>　　Abstract: Puntius tetrazona is a major ornamental fish. In recent years, farming Puntius tetrazona developed rapidly in China and has become the leading aquaculture species of ornamental fishe

10、s. But the most important factor that affect it for farming them is the problems of diseases of fishes. According to the investigation of the diseases of fishes in recent years, we found that there is a trend that the ra

11、te of ill and death occurs in more and more fishes. It brings the farmers lots of losses</p><p>　　Keywords: Puntius tetrazon; TEM; Ultrastructural </p><p><b>　　引言</b></p><

12、p>　　我國有著悠久的養(yǎng)殖觀賞魚的歷史[1]。虎皮魚（Puntius tetrazona）屬鯉科，又名四間魚、四間鯽魚。原產(chǎn)地：馬來西亞，印尼蘇門答臘島、加里曼丹島等內(nèi)陸水域。它是一種飼養(yǎng)較普遍的魚種。魚長5-7厘米，呈紡錘形。身體勻稱，色彩鮮艷，以金黃色做底色，頭部、腹部、尾部前端貫有四條豎向黑條紋，隨光線角度不同會閃現(xiàn)出金屬般的光芒。成魚的背鰭、胸鰭、腹鰭及尾部的邊緣都呈現(xiàn)出亮麗的紅色，很有觀賞價值。作為一種重要的觀賞魚，虎皮

13、魚的商業(yè)價值非常高。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，虎皮魚在養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)病害的頻率也越來越高。目前，對虎皮魚的病理研究還鮮有報道。</p><p>　　近幾十年來，有關(guān)于魚類暴發(fā)性死亡的研究有：黃琪琰等[2，3]在對魚類流行病學(xué)方面進行了深入透徹的分析；徐伯亥等[4-6]在魚類病原及防治方法上進行了深入的探索；李凱彬, 石存斌, 李新輝, 黃志斌, 余德光[7]對眼斑擬石首魚暴發(fā)性傳染病病原進行了初步的研究，列舉了流行的魚

14、類病病毒，如鮭鱒魚類經(jīng)IPNV感染后, 導(dǎo)致魚苗、 魚種有較高的死亡率。據(jù)研究,IPNV能感染37種硬骨魚類(包括海水魚和淡水魚)及3種蝦類[8],引起近乎世界范圍的流行, 給魚病的防治帶來困難。并且，通過這項研究，初步認(rèn)定虹彩病毒是眼斑擬石首魚暴發(fā)性傳染病的主要致病原；梅廣海，王羽，劉加成，劉厚軍，王立峰等[9]總結(jié)了對鯽魚暴發(fā)性斜管蟲病的診治技術(shù)；2010年第一期的《科學(xué)養(yǎng)魚》對2009年東平湖網(wǎng)箱養(yǎng)殖鱖魚暴發(fā)性死亡流行情況進行了分

15、析，分析內(nèi)容包括：病魚的主要癥狀、可能誘發(fā)的病因、以及防治措施。由此可見，魚類的暴發(fā)性疾病及死亡在近些年來時有發(fā)生，所以，對其病癥的總結(jié)，發(fā)病原因的探究及預(yù)防這些魚類發(fā)病及死亡所采取的措施已成為當(dāng)今生物科學(xué)研究的重要課題之一。</p><p>　　但是，在已有的報道中，對發(fā)病魚的超微病理方面的分析與討論相對而言較少，現(xiàn)已有的相關(guān)方面的報道有：袁莉民，李恕，叢寧等運用電子顯微的技術(shù),對患暴發(fā)性流行病鯽魚的肝、心組織

16、進行超薄切片的觀察,發(fā)現(xiàn)發(fā)病鯽魚的肝、心組織結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯的變化,其變化與一些高等動物的相應(yīng)組織在急性致病因子作用下的病理變化相似；2007年，卓玉琛在其碩士畢業(yè)論文中，對歐洲鰻鱺的敗血癥病理學(xué)和組織化學(xué)進行研究，探討了敗血癥的發(fā)生過程和發(fā)生原因?；加袛⊙Y的歐洲鰻鱺的一些重要器官的超微病理變化表現(xiàn)為: 心肌纖維呈扭曲狀態(tài)、部分溶解、局部出現(xiàn)空泡現(xiàn)象，細(xì)胞核腫脹、胞質(zhì)較疏松，出現(xiàn)空隙，肌節(jié)結(jié)構(gòu)模糊，線粒體呈空泡化；鰓中大量細(xì)胞呈崩解狀態(tài)

17、，細(xì)胞的界線已經(jīng)消失，僅見崩解后的膜質(zhì)結(jié)構(gòu)；肝細(xì)胞，細(xì)胞核的染色質(zhì)、核膜模糊、膜間隙增大、斷裂，胞質(zhì)疏松，核糖體增多，脂肪滴多且大；脾臟中，淋巴細(xì)胞核的異染色質(zhì)邊集化，核膜破裂，紅髓區(qū)紅細(xì)胞核固縮、胞質(zhì)稀疏，腸粘膜的微絨毛排列缺失，不整齊；腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增厚、破裂，上皮細(xì)胞足突融合且微絨毛化現(xiàn)象嚴(yán)重，胞漿內(nèi)的線粒體呈嚴(yán)重空泡化現(xiàn)象，腎小管胞質(zhì)中的線粒體空泡化，溶酶體、次級溶酶體、殘</p><p>　　在

18、虎皮魚的養(yǎng)殖過程中，時常發(fā)生各種各樣的病變甚至死亡。本實驗分析了從養(yǎng)殖場中取得的暴發(fā)性死亡虎皮魚樣本的超微病理變化，從而為確定發(fā)病或死亡虎皮魚原因奠定基礎(chǔ)，也為病害的防治提供理論依據(jù)。</p><p><b>　　材料與方法</b></p><p><b>　　材料與試劑</b></p><p><b>　　實驗

19、材料</b></p><p>　　取發(fā)生暴發(fā)性死亡虎皮魚為實驗用材料，另取健康虎皮魚做對照觀察。</p><p><b>　　實驗試劑</b></p><p>　　0.1M PBS、各種不同濃度的酒精、25%戊二醛溶液、1%鋨酸、醋酸鈾、檸檬酸鉛、Epon812包埋劑等。</p><p>　　0.1M PBS

20、：8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4，溶于1000ml蒸餾水中，PH7.4。</p><p>　　2.5%戊二醛：取25%戊二醛溶液用0.1M PBS稀釋。</p><p><b>　　實驗儀器及器皿</b></p><p>　　解剖刀、鑷子、剪刀、解剖針、解剖鏡、單面刀片、酒精燈、染色缸、冰箱、電爐

21、、洗凈的青霉素空瓶、載玻片、蓋玻片、玻璃器皿、Sartorius電子天平、切片刀、KD-BMⅡ電腦生物組織包埋機、KD型輪鏈?zhǔn)角衅瑱C、KD-T電腦生物組織攤片機、Nikon ECLIPSE 80i光學(xué)顯微鏡、RMC POWER TOME XL超薄切片機、日立S-3400N掃描電子顯微鏡等。</p><p><b>　　實驗方法</b></p><p><b>

22、;　　取材</b></p><p>　　觀察病魚的外在病癥，后解剖，并在光學(xué)顯微鏡下觀察各臟器。取腸、肌肉、肝臟、生殖組織、胃、心臟、腎臟為樣本組織。用新的鋒利刀片切小，修成1mm×1mm×1mm的組織塊。</p><p><b>　　制作超薄切片</b></p><p>　　將修好的腸、肌肉、肝臟、生殖組織、胃

23、、心臟、腎臟組織塊移至戊二醛-鋨酸固定液中，4℃下，于2.5%戊二醛中固定2h，后用1%鋨酸固定液黑暗下固定1h，冷PBS緩沖液漂洗20min，pH7.4。乙醇梯度脫水：15%乙醇15min，30%乙醇15min，50%乙醇15min，70% 乙醇15min，85%乙醇15min，95%乙醇15min，100%乙醇10min（二次）。脫水后的組織塊用Epon812環(huán)氧樹脂包埋，烘箱內(nèi)烘干，制成包埋塊。用超薄切片機將包埋塊進行切片，用醋酸

24、鈾-檸檬酸鉛對其進行雙染色，于室溫下15-20min透射電鏡觀察，進行拍照并保存結(jié)果。</p><p><b>　　試驗結(jié)果</b></p><p><b>　　虎皮魚病癥</b></p><p>　　從某養(yǎng)殖場取得的大量暴發(fā)性死亡的虎皮魚，除鰭部輕微充血，尾鰭部分?jǐn)嗔淹?，無其他明顯癥狀。解剖后，部分死魚臟器有明顯囊腫，光

25、學(xué)顯微鏡下觀察無寄生蟲感染。（如下圖1、圖2所示）</p><p>　　圖1 圖2</p><p>　　3.2 虎皮魚組織病原觀察</p><p>　　對發(fā)病虎皮魚進行組織病原觀察，發(fā)現(xiàn)無寄生蟲，無細(xì)菌感染，但可看到大量病毒。（如圖3所示）</p><p>

26、;<b>　　圖3</b></p><p>　　3.3 電鏡下的虎皮魚各組織超微病理</p><p><b>　　3.3.1 腸</b></p><p>　　腸是下消化道重要的組成部分，也是食物消化和吸收的主要部位，是消化吸收系統(tǒng)中重要的器官之一。腸細(xì)胞的結(jié)構(gòu)不完整會直接影響虎皮魚正常的生理活動。</p>

27、;<p>　　透射電鏡下可觀察到暴發(fā)性死亡虎皮魚腸細(xì)胞線粒體腫脹，嵴斷裂，減少，線粒體不同程度的空化；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變性，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體脫落；細(xì)胞核，核大，不規(guī)則，偏向一側(cè)；核質(zhì)固縮趨邊化，核仁模糊不確定，或有消失跡象。核被膜凹陷、不規(guī)則；線粒體發(fā)生變性，形成髓鞘樣結(jié)構(gòu)，線粒體固縮，體積縮小，周圍形成空隙。</p><p>　　這些不同于正?；⑵~超微結(jié)構(gòu)的病變會嚴(yán)重影響虎皮魚各細(xì)胞器的生理生化作用及其所

28、參加的整個生命活動。戴瑜來、呂永林、李凱、陶震、王國良[10]等對正常大黃魚的體腸內(nèi)壁細(xì)胞進行了研究，即：正常大黃魚的腸內(nèi)壁細(xì)胞，游離面有較為明顯的微絨毛, 它們排列整齊呈紋狀, 即紋狀緣。他們還對發(fā)病大黃魚的魚腸內(nèi)壁吸收細(xì)胞特點進行了比較研究，研究表明：發(fā)病魚的腸內(nèi)壁吸收細(xì)胞已經(jīng)破裂消解, 幾乎沒有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，肌層也失去了原有結(jié)構(gòu), 經(jīng)研究還發(fā)現(xiàn)，病魚肌纖維散亂, 呈現(xiàn)潰瘍狀態(tài)。細(xì)菌通過內(nèi)壁感染組織,此結(jié)果與本實驗中分析暴發(fā)性死亡

29、虎皮魚的腸細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)結(jié)果相似。</p><p>　　圖1-1 圖1-2</p><p><b>　　圖1-3圖1-4</b></p><p>　　圖1-1. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚腸細(xì)胞，線粒體腫脹，嵴斷裂，減少，線粒體不同程度的空化（黑色箭頭），無法維持線

30、粒體的基本生命活動，以此影響虎皮魚的正常的代謝活動。</p><p>　　圖1-2. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚腸細(xì)胞，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變性，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體脫落。線粒體腫脹，趨于空化（黑色箭頭）。</p><p>　　圖1-3. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚腸細(xì)胞，核大，不規(guī)則，偏向一側(cè)。核質(zhì)固縮趨邊化（長黑色箭頭），核仁模糊不確定，或有消失跡象。核被膜凹陷、不規(guī)則（短黑色箭頭）。</

31、p><p>　　圖1-4. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚腸細(xì)胞，線粒體發(fā)生變性，形成髓鞘樣結(jié)構(gòu)（長黑色箭頭），線粒體固縮，體積縮小，周圍形成空隙（短黑色箭頭）。</p><p><b>　　3.3.2 肌肉</b></p><p>　　健康虎皮魚的肌肉細(xì)胞,排列緊密而規(guī)則,有較多的線粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排列整齊，胞漿分布均勻。作為一種重要的細(xì)胞器，線粒體

32、不僅是細(xì)胞的呼吸代謝中心，更是重要的能源中心，它對各種細(xì)胞損傷極其敏感，與細(xì)胞各種生命活動有著緊密的關(guān)系；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）是普遍存在于真核細(xì)胞中的一種細(xì)胞器，細(xì)胞處于功能活躍期時，可觀察到較豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。上述細(xì)胞器在虎皮魚的生命活動中有著重要的作用，但患病或死亡的虎皮魚細(xì)胞中，這些細(xì)胞器都或多或少受到損壞，使細(xì)胞中各項生命活動都無法進行。</p><p>　　透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚的肌肉細(xì)胞，可見患病虎皮魚

33、肌肉細(xì)胞肌纖維斷裂，局部肌肉纖維溶解為不規(guī)則狀；線粒體腫大，嵴不規(guī)則斷裂，細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，其線粒體結(jié)構(gòu)無法維持正常的生命活動；還可見，肌肉細(xì)胞腫大，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體脫落，分布不均勻，部分細(xì)胞溶解成空泡狀結(jié)構(gòu)；還可觀察到有電子致密顆粒存在的現(xiàn)象。</p><p>　　這些細(xì)胞器對生物的生理活動有著決定性的作用，叢寧，袁莉民[11]在研究羅氏沼蝦“白體病”肌肉組織超微病理時得出肌肉細(xì)胞線粒體代謝失調(diào)會導(dǎo)致生物體

34、能量代謝障礙。因此，線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變，直接影響到細(xì)胞正常的生命活動。肌肉細(xì)胞其他結(jié)構(gòu)的破壞和不完整也直接或間接導(dǎo)致其功能不能維持正常，影響生物的健康。</p><p><b>　　圖2-1圖2-2</b></p><p>　　圖2-3 圖2-4</p><p>　　

35、圖2-1. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚肌肉細(xì)胞，可見患病虎皮魚肌肉細(xì)胞肌纖維斷裂，局部肌肉纖維溶解為不規(guī)則狀。</p><p>　　圖2-2. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚肌肉細(xì)胞，可見患病虎皮魚肌肉細(xì)胞中線粒體腫大，嵴不規(guī)則斷裂，細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，其線粒體結(jié)構(gòu)無法維持正常的生命活動。</p><p>　　圖2-3. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚肌肉細(xì)胞，可見患病虎皮魚肌肉細(xì)胞腫大，內(nèi)

36、質(zhì)網(wǎng)擴張，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體脫落，分布不均勻，部分細(xì)胞溶解成空泡狀結(jié)構(gòu)。</p><p>　　圖2-4. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚肌肉細(xì)胞，可見患病虎皮魚肌肉細(xì)胞中線粒體增多、腫脹，排列紊亂，嵴不規(guī)則斷裂。還可觀察到電子致密顆粒（黑色箭頭）。</p><p><b>　　3.3.3 肝臟</b></p><p>　　肝臟是機體重要器官之一，它具

37、有代謝、合成、分泌、解毒等多種功能，行使這些功能的基本結(jié)構(gòu)單位為肝小葉。對于肝臟超微病理的研究已近四十年，肝臟是電鏡技術(shù)應(yīng)用于醫(yī)學(xué)生物學(xué)中研究最早的生物器官之一。機體多種疾病，無論是原發(fā)性或繼發(fā)性的，也無論是化學(xué)因素、生物因素還是創(chuàng)傷性因素，都會直接或間接地影響到肝臟細(xì)胞的亞微結(jié)構(gòu)，所以對肝臟的研究具有重要意義。</p><p>　　正常魚的肝臟細(xì)胞, 邊界清楚，呈多邊形。細(xì)胞質(zhì)中含有豐富的細(xì)胞器及其它內(nèi)含物,

38、有數(shù)量較多的呈圓形或橢圓形的線粒體, 嵴的排列規(guī)則且清晰。細(xì)胞核位于細(xì)胞中央, 呈正常圓形。此外，還富含粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),它們繞細(xì)胞核質(zhì)排列成環(huán)狀。經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)暴發(fā)性死亡虎皮魚的肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)被嚴(yán)重破壞, 如滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)聚集，腫脹，排列無序；細(xì)胞核腫大，核內(nèi)物質(zhì)外溢，核仁凸出，核質(zhì)趨邊化，細(xì)胞核位于細(xì)胞一側(cè)，而不是位于中央；細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞裂解，胞內(nèi)物質(zhì)外溢，個別細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹；有明顯纖維化現(xiàn)象。</p>

39、<p><b>　　圖3-1圖3-2</b></p><p><b>　　圖3-3圖3-4</b></p><p>　　圖3-1. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚肝臟細(xì)胞，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)聚集，腫脹，排列無序；細(xì)胞核腫大，核內(nèi)物質(zhì)外溢，核仁凸出（黑色箭頭）。</p><p>　　圖3-2. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死

40、亡虎皮魚肝臟細(xì)胞，可見細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞裂解，胞內(nèi)物質(zhì)外溢，個別細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹，嵴增多（黑色箭頭）。</p><p>　　圖3-3. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚肝臟細(xì)胞，肝細(xì)胞細(xì)胞核腫脹變大，核質(zhì)趨邊化，核仁不明顯或消失，核周圍線粒體腫脹，嵴明顯增多，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受到損害。</p><p>　　圖3-4. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚肝臟細(xì)胞，可見細(xì)胞核增大，位于細(xì)胞一側(cè)，

41、不是位于中央；核質(zhì)分布不均，向邊緣富集，有明顯纖維化現(xiàn)象。</p><p>　　3.3.4 生殖細(xì)胞</p><p>　　透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚生殖系統(tǒng)細(xì)胞，細(xì)胞核變形，核仁不明顯或消失，核周圍有大量初級溶酶體和次級溶酶體，胞內(nèi)細(xì)胞器溶解成小泡，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整；胞內(nèi)纖維化現(xiàn)象嚴(yán)重。此前尚無有關(guān)虎皮魚生殖細(xì)胞超微病理的報道，相關(guān)魚類的報道也很少。對此唯一的了解是M. Manjusha

42、等[12]報道了對蝦卵巢組織被病毒侵染后結(jié)締組織壞死，細(xì)胞核腫大，而卵母細(xì)胞中無腫大細(xì)胞核，說明病毒侵染細(xì)胞是來自于卵巢結(jié)締組織和卵母細(xì)胞病毒釋放[13]。而在本實驗中，生殖細(xì)胞本身的結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化，與正常的虎皮魚生殖細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)相比，在暴發(fā)性死亡虎皮魚的生殖細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)中，核質(zhì)、細(xì)胞器都有不同程度的異常，這使生殖細(xì)胞的基本功能不能保證完成，最終導(dǎo)致生殖組織或生殖系統(tǒng)不能完成自生的生理功能，從而影響虎皮魚正常的生命活動。</p&g

43、t;<p><b>　　圖4-1圖4-2</b></p><p>　　圖4-1. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚生殖系統(tǒng)細(xì)胞，細(xì)胞核變形，核仁不明顯或消失，核周圍有大量初級溶酶體和次級溶酶體，胞內(nèi)細(xì)胞器溶解成小泡，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。</p><p>　　圖4-2. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚生殖系統(tǒng)細(xì)胞，胞內(nèi)纖維化現(xiàn)象嚴(yán)重，細(xì)胞器溶解成小泡，細(xì)胞結(jié)構(gòu)

44、嚴(yán)重不完整。</p><p><b>　　3.3.5 胃</b></p><p>　　胃系消化道主要的組成器官，具有儲存食物并進行消化的功能，發(fā)生于胃的疾病甚多，對胃病的研究，也深化到超微病理層面。</p><p>　　本實驗中，透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚的胃部細(xì)胞，可見胃細(xì)胞空泡化嚴(yán)重；細(xì)胞核不規(guī)則，核腫大，核質(zhì)嚴(yán)重不均勻，核電子密度高，

45、核質(zhì)趨邊化，部分細(xì)胞器溶解成空泡狀；細(xì)胞內(nèi)有大量脂滴聚集，部分線粒體變形，嵴斷裂，或消失，有多數(shù)細(xì)胞器空泡化；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，核糖體脫落，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整；核仁邊緣有突起，不規(guī)則。對魚類胃部的超微病理研究的報道還很少見，對動物胃部超微病理的研究，主要以人類、甲殼類動物及鼠類方面為主。這些已知的研究結(jié)果均表明，胃細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化能影響動物的攝食活動。</p><p><b>　　圖5-1圖5-2<

46、/b></p><p><b>　　圖5-3圖5-4</b></p><p>　　圖5-5 圖5-6</p><p>　　圖5-1. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚胃部細(xì)胞，胃細(xì)胞空泡化嚴(yán)重。</p><p>　　圖5-2. 透射電鏡下觀察暴

47、發(fā)性死亡虎皮魚胃部細(xì)胞，細(xì)胞核不規(guī)則，核腫大，核質(zhì)嚴(yán)重不均勻，核電子密度高，核質(zhì)趨邊化，部分細(xì)胞器溶解成空泡狀。</p><p>　　圖5-3. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚胃部細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)有大量脂滴聚集，部分線粒體變形，嵴斷裂，或消失，有多數(shù)細(xì)胞器空化。</p><p>　　圖5-4. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚胃部細(xì)胞，細(xì)胞器溶解成小泡，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。</p>&

48、lt;p>　　圖5-5. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚胃部細(xì)胞，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，核糖體脫落，部分細(xì)胞器空化，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。</p><p>　　圖5-6. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚胃部細(xì)胞，核仁邊緣有突起，不規(guī)則，和周圍核質(zhì)中有空化小泡。</p><p><b>　　3.3.6 心臟</b></p><p>　　心肌的超微病變在

49、心肌疾病中占有重要的地位，對了解心肌疾病的發(fā)生，發(fā)展過程及臨床診治和預(yù)后判斷均有重要意義。</p><p>　　透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚心肌細(xì)胞，可見肌原纖維有多處斷裂，肌節(jié)嚴(yán)重受損，使之變得極不完整,呈帶狀崩解狀態(tài),各收縮帶間充滿了移位線粒體，線粒體腫脹，多處嵴斷裂，呈不規(guī)則狀排列，部分細(xì)胞器空泡化；線粒體內(nèi)，嵴排列不整齊，線粒體膜破裂，內(nèi)含物質(zhì)外溢，或線粒體空泡化。叢寧, 袁莉民，李恕在研究鯽魚暴發(fā)性流

50、行病肝心組織的超微病理變化中，對發(fā)病鯽魚心臟組織的超微病理分析與本實驗的結(jié)果相似，并指出：病魚的心肌結(jié)構(gòu)變化與其它脊椎動物心肌結(jié)構(gòu)變化相似，都是由co中毒、一過性心肌缺血和內(nèi)、外源兒茶酚胺過多等因素引起的，肌原纖維斷裂，呈帶狀崩解，屬不可逆性凝固性肌溶解，并以肌原纖維段狀凝聚、嵴密型的小線粒體增多、胞核腫脹后向中間游走、染色質(zhì)邊集等為特點；心肌細(xì)胞變性的基本表現(xiàn)還包括泡狀脂滴的出現(xiàn)，這種現(xiàn)象與部分線粒體的致密變性相關(guān)聯(lián)，心肌細(xì)胞里眾多的

51、嵴密型的小線粒體，雖然有完整的結(jié)構(gòu)，但其功能可能有些缺陷，不能正常地進行脂肪酸的氧化，從而導(dǎo)致了心肌細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的堆積[14]。</p><p><b>　　圖6-1圖6-2</b></p><p>　　圖6-3 圖6-4</p><p>　　圖6-1. 透射電鏡下觀

52、察暴發(fā)性死亡虎皮魚心肌細(xì)胞，可見由于肌原纖維有多處斷裂，從而而變得非常不完整 ,呈帶狀崩解狀態(tài) 。各收縮帶間充滿了移位的線粒體，線粒體腫脹，多處嵴斷裂，呈不規(guī)則狀排列，部分細(xì)胞器空泡化。</p><p>　　圖6-2. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚心肌細(xì)胞，線粒體內(nèi)嵴排列不整齊，線粒體膜破裂，內(nèi)含物質(zhì)外溢，嵴斷裂。</p><p>　　圖6-3. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚心肌細(xì)胞，

53、肌纖維嚴(yán)重斷裂，肌絲排列松散，線粒體裂解，嵴排列混亂，或線粒體空泡化。</p><p>　　圖6-4. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚心肌細(xì)胞，肌纖維扭曲斷裂，肌節(jié)受損，間帶間充滿移位的多嵴線粒體，部分線粒體及其它細(xì)胞器呈空泡狀或已裂解。</p><p><b>　　3.3.7 腎臟</b></p><p>　　電鏡技術(shù)在腎臟上的應(yīng)用已越來越普

54、遍和廣泛，對腎臟疾病闡明發(fā)病機制發(fā)揮了重要的作用。同時，電鏡對一些光鏡認(rèn)識不清的腎病能起到確定診斷、輔助診斷和分型作用，對腎臟腫瘤的診斷、分型、識別組織來源、判斷預(yù)后等都起到重要作用。</p><p>　　透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚腎臟細(xì)胞，可見細(xì)胞核腫大，核仁凸出，核膜裂解，不規(guī)則，核周圍有大量空泡狀細(xì)胞器，胞質(zhì)內(nèi)有脂滴，線粒體內(nèi)嵴排列雜亂，或膜破裂，線粒體內(nèi)物質(zhì)外溢。戴瑜來、呂永林、李凱、陶震、王國良在《

55、大黃魚潰瘍病的組織病理和超微病理研究》中研究了腎小管的超微組織病變，將正常大黃魚的腎小管與發(fā)病魚的腎小管的超微結(jié)構(gòu)作對比，指出：正常的魚的腎小管由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成，游離端有刷狀緣，細(xì)胞核呈圓形且靠近基底，上皮細(xì)胞界限清晰，排列緊湊且整齊。但是病魚的腎小管上皮細(xì)胞卻發(fā)生了形變，還發(fā)現(xiàn)刷狀緣纖毛排列紊亂，斷裂，部分胞核溶解后消失。與此同時，細(xì)胞內(nèi)的顆粒變性現(xiàn)象明顯，溶酶體增多，一些內(nèi)源或外源性的物質(zhì)在溶酶體內(nèi)得到貯積，細(xì)胞里有不同程度的空泡

56、[10]等。</p><p><b>　　圖7-1圖7-2</b></p><p>　　圖7-1. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚腎臟細(xì)胞，可見細(xì)胞核腫大，核仁凸出，核膜裂解，不規(guī)則，核周圍有大量空泡狀細(xì)胞器。</p><p>　　圖7-2. 透射電鏡下觀察暴發(fā)性死亡虎皮魚腎臟細(xì)胞，胞質(zhì)內(nèi)有脂滴，線粒體內(nèi)嵴排列雜亂，或膜破裂，線粒體內(nèi)物質(zhì)外溢

57、，部分細(xì)胞器空泡化。</p><p><b>　　實驗分析與討論</b></p><p>　　關(guān)于虎皮魚的超微病理方面的分析、虎皮魚的病理特征及其致病因素等還鮮有報道。但關(guān)于魚類的這三方面的相關(guān)研究，并不少見。影響魚類健康的因素有許多：陳雅芳等[15]研究表明，宿主的體質(zhì)及免疫系統(tǒng)可能會被水體細(xì)菌的胞外蛋白酶破壞，Balebona等[16]對溶藻弧菌致病性的研究結(jié)果表

58、明,溶藻弧菌的胞外產(chǎn)物在感染魚體時會發(fā)揮巨大的作用，其胞外產(chǎn)物能引起組織的損傷, 促進細(xì)菌的侵染。鄢慶枇等[17]的研究表明，菌體內(nèi)的脂多糖在魚體內(nèi)達到一定濃度的時可以使組織嚴(yán)重?fù)p害，以加快細(xì)菌的蔓延擴散并發(fā)展為全身性的病癥。吳淑勤，李新輝，潘厚軍，等報道感染后的鱖魚，病毒主要在脾臟 [18]。</p><p>　　在以往的報道中，以分析感染魚類的致病因子，造成魚病害的物理因素，及其相應(yīng)的防治措施等居多，對于魚病

59、變的超微結(jié)構(gòu)分析還很少，本實驗以暴發(fā)性死亡的虎皮魚為材料，解剖、切片后觀察各組織中的超微變化，并進行分析。透射電鏡下發(fā)現(xiàn)暴發(fā)性死亡的虎皮魚同正?；⑵~的超微結(jié)構(gòu)有明顯不同，主要集中在以下幾個方面：暴發(fā)性死亡虎皮魚腸細(xì)胞線粒體腫脹，嵴斷裂，線粒體不同程度的空化；肌肉細(xì)胞肌纖維斷裂，局部肌肉纖維溶解為不規(guī)則狀；還可觀察到有電子致密顆粒存在的現(xiàn)象；肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,細(xì)胞核腫大，核內(nèi)物質(zhì)外溢，核仁凸出，核質(zhì)趨邊化，細(xì)胞核位于細(xì)胞一側(cè)，而不是位

60、于中央。胞內(nèi)有明顯纖維化現(xiàn)象；生殖系統(tǒng)細(xì)胞，細(xì)胞核變形，核仁不明顯或消失，核周圍有大量初級溶酶體和次級溶酶體，胞內(nèi)細(xì)胞器溶解成小泡，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整；胃部細(xì)胞，細(xì)胞器空泡化嚴(yán)重，細(xì)胞內(nèi)有大量脂滴聚集，部分線粒體變形，嵴斷裂，或消失；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，核糖體脫落；心肌細(xì)胞，可見肌原纖維部分?jǐn)嗔眩」?jié)嚴(yán)重受損，變得非常不完整,并且呈帶狀崩解狀,各收縮帶間充滿了移位的線粒體，線粒體發(fā)生腫脹，多處嵴斷裂，呈不規(guī)則狀排列，部分細(xì)胞器空泡化；腎臟細(xì)胞，

61、可見細(xì)胞核腫大，核仁凸</p><p>　　細(xì)胞膜是維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的重要結(jié)構(gòu)，細(xì)胞膜上具有受體和催化作用的酶，是細(xì)胞與外界環(huán)境的屏障，擔(dān)負(fù)細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)運輸、代謝等功能。細(xì)胞膜的溶解破壞可能會導(dǎo)致細(xì)胞缺少生化反應(yīng)所必需的酶，也會破壞胞膜上鈉、鉀泵的功能，從而影響ATP酶分解ATP釋放主動運輸所需的能量，同時也會影響細(xì)胞吞噬、代謝等其它功能；細(xì)胞核是細(xì)胞的控制中心，在細(xì)胞的代謝、生長、分化中起著重要作用，細(xì)胞核一

62、旦發(fā)生病變，有可能會導(dǎo)致整個細(xì)胞的凋亡或生物體的死亡；線粒體是細(xì)胞結(jié)構(gòu)中重要的細(xì)胞器之一，線粒體的形狀大小與外界環(huán)境有關(guān)，其中嵴的數(shù)量多少與器官、組織的功能有關(guān)，心肌細(xì)胞發(fā)生病理變化時，線粒體嵴形成管狀髓鞘樣結(jié)構(gòu)。同時線粒體是細(xì)胞能量供給的重要細(xì)胞器，線粒體膜和基質(zhì)內(nèi)含有大量酶，包括大量生物氧化酶系，形成腺苷三磷酸（ATP）[19]。因此當(dāng)線粒體發(fā)生腫脹、嵴斷裂甚至呈空泡狀等病理變化時，ATP產(chǎn)生受到抑制，細(xì)胞得不到其能量的提供，也就不

63、能進行正常的生理生命活動；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是產(chǎn)生蛋白質(zhì)（包括酶）的重要場所[20]，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上覆蓋有核糖體，病變的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體脫落，影響蛋白質(zhì)合成等細(xì)胞正常的生理功能；通過對暴發(fā)性死亡虎皮</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1]王玉堂.觀賞漁業(yè)的發(fā)展概況[J].中國水產(chǎn),2006,6(01):15-17.</p><

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