甘薯葉多酚氧化酶的分離純化及部分性質(zhì)與功能基團(tuán)研究.pdf

1、多酚氧化酶(polyphenol oxidase，EC1.10.3.1，簡(jiǎn)稱(chēng)PPO)是一類(lèi)廣泛存在于植物、動(dòng)物、微生物等體內(nèi)的一類(lèi)銅結(jié)合酶。多酚氧化酶在植物體內(nèi)能夠催化酚類(lèi)物質(zhì)生成鄰醌，醌類(lèi)再進(jìn)一步氧化生成褐色素。多酚氧化酶是引起果蔬褐變的主要原因之一，會(huì)降低果蔬等的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及經(jīng)濟(jì)價(jià)值，并影響其風(fēng)味及品質(zhì)。此外，多酚氧化酶與植物抗病、植物光合作用、花色形成、乙烯生成等方面都有聯(lián)系。甘薯葉作為一種耐寒耐貧瘠的綠色蔬菜，含有豐富的礦物質(zhì)、維

2、生素等，可提高人體抗病能力，有降血糖，抗腫瘤等作用，已引起大家廣泛關(guān)注。目前，對(duì)甘薯葉多酚氧化酶的分離純化未見(jiàn)報(bào)道。本文以甘薯葉為材料，對(duì)多酚氧化酶的分離純化、酶學(xué)性質(zhì)、抑制劑及功能基團(tuán)的化學(xué)修飾等方面進(jìn)行了研究，以將甘薯葉的利用價(jià)值得到開(kāi)發(fā)，提高其經(jīng)濟(jì)效益。主要研究結(jié)果如下：
　　 本文通過(guò)對(duì)新鮮甘薯葉進(jìn)行組織勻漿、磷酸鹽緩沖液抽提得到粗酶，再經(jīng)硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE-Sepharose離子交換層析和Superdex-200

3、凝膠過(guò)濾層析等純化步驟，最終從甘薯葉中得到了多酚氧化酶的電泳純制品。純化得到的酶比活力為50075.43U/mg，純化倍數(shù)為597.99，回收率為0.48％。
　　 理化性質(zhì)研究表明，甘薯葉多酚氧化酶的全酶的相對(duì)分子質(zhì)量128.6kd，亞基相對(duì)分子質(zhì)量約為64.4kd，可見(jiàn)該酶由兩個(gè)相同的亞基組成。該酶的最適溫度為35℃。在25-55℃內(nèi)酶有較好的穩(wěn)定性。最適pH為6.5，在pH6～7內(nèi)酶較穩(wěn)定。在最適條件下，以不同濃度的鄰苯二

4、酚溶液為底物測(cè)得該酶的Km值為0.0445mol/L。
　　 金屬離子Ca2+、Hg2+對(duì)甘薯葉多酚氧化酶有明顯的抑制作用；Pb2+、Co2+、Fe2+對(duì)甘薯葉多酚氧化酶有明顯的激活作用；K+、Mn2+、Li+、Zn2+、Mg2+、Ba2+對(duì)該酶活性基本無(wú)影響。
　　 研究有機(jī)溶劑對(duì)甘薯葉多酚氧化酶的抑制作用，甲醇、乙醇和異丙醇對(duì)甘薯葉多酚氧化酶活性抑制強(qiáng)度不同，異丙醇抑制作用最強(qiáng)，乙醇次之，甲醇抑制作用相對(duì)最弱。低濃度