蒜苗過氧化氫酶的分離純化和性質(zhì)及功能基團(tuán)研究.pdf

1、過氧化氫酶(Catalase，CAT)又稱觸酶，是一類普遍存在于動植物和絕大多數(shù)需氧微生物體內(nèi)的末端氧化酶。其生理功能是催化細(xì)胞內(nèi)過氧化氫分解，防止過氧化，清除生物體內(nèi)的活性氧。與超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)共同組成了生物體內(nèi)活性氧防御系統(tǒng)。它在食品加工、臨床醫(yī)療、紡織、印染、環(huán)保等行業(yè)具有十分重要的應(yīng)用價值。同時來源于植物的CAT市場上很少，而且植物材料含有相對較少的雜蛋白，因此研究開發(fā)取材簡便、價格低廉、活性較高而

2、且性質(zhì)穩(wěn)定的植物CAT有著十分重要的意義。
　　 蒜苗，又叫蒜毫、青蒜，是大蒜幼苗發(fā)育到一定時期的青苗，是一種四季生長又廉價易得的綠色蔬菜。它含有豐富的VC、以及可溶性蛋白質(zhì)、游離氨基酸、多糖、大蒜素等營養(yǎng)成分并能增進(jìn)食欲，具殺菌作用。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，蒜苗中過氧化氫酶含量較一般植物中高，在實(shí)驗(yàn)過程中較穩(wěn)定且從蒜苗中分離純化過氧化氫酶未見報道，故本研究以新鮮的蒜苗為實(shí)驗(yàn)材料，從中分離純化CAT并對其部分性質(zhì)進(jìn)行研究，以期為進(jìn)一步的開發(fā)

3、應(yīng)用該酶提供參考依據(jù)。研究結(jié)果如下:
　　 1.蒜苗過氧化氫酶的分離純化
　　 新鮮蒜苗經(jīng)勻漿、緩沖液抽提、硫酸銨分級沉淀、DEAE-Sepharose離子交換層析、Superdex-200凝膠過濾層析，獲得電泳純的過氧化氫酶。該酶比活力達(dá)到25975.36U/mg，回收率為40.05％，純化倍數(shù)為125.97。
　　 2.蒜苗過氧化氫酶的酶學(xué)性質(zhì)
　　 研究結(jié)果表明，蒜苗過氧化物酶的全分子質(zhì)量和亞基分子

4、質(zhì)量分別為234.93kD和59.16kD，推測該酶是由四個相同亞基構(gòu)成。該酶最適反應(yīng)溫度為45℃，最適pH值為7.2。該酶在25～45℃及pH5～10的范圍內(nèi)有較好的穩(wěn)定性;在最適條件下，以過氧化氫為底物測得其Km值為38.2mmol/L。
　　 3.部分化學(xué)試劑對蒜苗過氧化氫酶的影響
　　 甲醇、乙醇、異丙醇及SDS、KSCN、Ag+、Cu2+、Mn2+、Co2+、Cd2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Ba2+該酶