韭菜β-D-木糖苷酶的分離純化及性質(zhì)和功能基團研究.pdf

1、β-D-木糖苷酶（β-D-xylosidase,EC3.2.1.37）是一種糖苷水解酶，廣泛存在于植物、細菌和真菌之中。能與木聚糖酶一起協(xié)同作用，催化水解木糖苷并且以外切方式從非還原性末端水解木寡糖以及木二糖以上的低聚木糖，分解產(chǎn)生木糖。β-D-木糖苷酶作為木聚糖酶系中的一個關(guān)鍵酶，已廣泛應(yīng)用于食品加工、造紙、能源等多個行業(yè)之中。特別是在食品行業(yè)中，通過β-D-木糖苷酶分解作用得到的木糖可以成為木糖醇的生產(chǎn)原料或者是作為食品配料、風(fēng)味改

2、善劑等。目前，國內(nèi)外對β-D-木糖苷酶的相關(guān)研究主要集中在微生物來源，很少涉及到植物性來源的β-D-木糖苷酶，而對植物中的β-D-木糖苷酶的分離純化就更少了。韭菜屬于百合科多年生宿根蔬菜，適應(yīng)性強，抗寒耐熱，中國各地到處都有栽培，取材十分方便，而本研究選取了植物性材料韭菜，為獲取植物性來源的β-D-木糖苷酶提供了一種的純化方法，并對其性質(zhì)進一步的探究，可以為β-D-木糖苷酶進一步的工業(yè)生產(chǎn)和研究提供參考。研究結(jié)果如下：
　　1.韭

3、菜β-D-木糖苷酶的分離純化
　　新鮮韭菜經(jīng)勻漿、乙酸-乙酸鈉緩沖液提取、硫酸銨分級沉淀、羧甲基離子交換層析（carboxymethyl-Sepharose。CM-Sepharose）離子交換層析再通過Superdex-200凝膠過濾層析，從而獲得電泳純的β-木糖苷酶。純化后該酶的比活力達到18.25 U/mg，純化倍數(shù)為12.59，回收率為1.83％。
　　2.韭菜β-D-木糖苷酶的部分酶學(xué)性質(zhì)
　　根據(jù)研究結(jié)果表明

4、，韭菜的β-D-木糖苷酶全分子質(zhì)量為123.02 kD，亞基分子質(zhì)量為63.14 kD。通過對韭菜β-D-木糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)研究得到最適溫度為65℃，最適pH值為4。該酶在25～55℃及pH3.0～5.0的范圍內(nèi)有較好的穩(wěn)定性。；在最適條件下測得其米氏常數(shù)（Km）值為0.28 mmol/L。
　　3.部分化學(xué)試劑及金屬離子對韭菜β-D-木糖苷酶的影響
　　甲醇、乙醇、異丙醇及十二烷基硫酸鈉、EDTA和Ag+對該酶具有抑制作用

5、。Ca2+、Mn2+和 Co2+對該酶具有一定的激活作用。而 Li+、Cd2+、Zn2+、KSCN和尿素則對韭菜β-D-木糖苷酶的活性基本無影響。
　　4.韭菜β-D-木糖苷酶的功能基團的研究
　　根據(jù)不同的化學(xué)修飾劑對韭菜β-D-木糖苷酶進行作用后得到的結(jié)果表明：氯胺-T、對氯汞苯甲酸（pCMB）和N-溴代琥珀酰亞胺（NBS）對韭菜β-D-木糖苷酶有極強抑制作用，說明甲硫氨酸的硫醚基、蛋白質(zhì)分子的巰基以及色氨酸的吲哚基可能