bcl┐6表達對生發(fā)中心形成及淋巴瘤發(fā)生的作用

1、<p>　　BCL┐6表達對生發(fā)中心形成及淋巴瘤發(fā)生的作用</p><p>　　作者：張永清　黃高升　王哲　閆慶國　郭英 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 淋巴瘤 </p><p>　　關(guān)鍵詞: BCL-6;原癌基因淋巴結(jié);增生;淋巴瘤;免疫組織化學 </p><p>　　摘 要:目的 探討B(tài)CL-6在正常淋巴組織和一組淋巴瘤

2、中的表達與生發(fā)中心形成及不同類型淋巴瘤發(fā)生的關(guān)系. 方法 形態(tài)學及免疫組織化學方法對17例反應(yīng)性增生淋巴組織（RLH）及74例不同類型淋巴瘤進行檢測并分類，免疫組化法檢測各組織石蠟標本中BCL-6表達情況. 結(jié)果 17例RLH生發(fā)中心細胞、10例濾泡性淋巴瘤（FL）及4例彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）中等強度表達BCL-6;3例FL及21例DL-BCL BCL-6表達為強陽性（72%），高于其他各組（P&lt;0.01）

3、.17例RLH生發(fā)中心外細胞，4例DLBCL，14例小淋巴細胞淋巴瘤（SLL）、4例套細胞淋巴瘤（MCL）及14例經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤（HD）BCL-6陰性. 結(jié)論 BCL-6表達與生發(fā)中心形成密切相關(guān).少數(shù)FL和大部分DLBCL中BCL-6過表達，可能與這些淋巴瘤發(fā)病機制有關(guān).檢測BCL-6有助于FL與SLL，MCL間及RLH與HD間的鑒別診斷. </p><p>　　Keywords:BCL-6;proto-

4、oncogenes lymph nodes;hyperplsi-a;lymphoma;immunohistochemistry </p><p>　　Abstract:AIM To study the effects of bcl-6expression on the formation of lymphoid germinal center and the pathogene-sis of different

5、types of lymphomas.METHODS Histomor-phology and immunophenotype of17cases of lymph node re-active hyperplsia（RLH）and74cases of lymphoma were de-tected and classified.BCL-6was detected in both paraffin sections of RLH and

6、 lymphoma with immunohistochemistry.RESULTS BCL-6was expressed moderately in cells within the germinal center of the17cases of RLH，in10cases of fol</p><p><b>　　0 引言 </b></p><p>　　BCL

7、-6是位于3q27原癌基因bcl-6編碼，具有鋅指結(jié)構(gòu)的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄抑制因子［1］ .BCL-6與部分白血病細胞凋亡［2］ 及B淋巴細胞分化關(guān)系密切［3］ ，bcl-6基因缺失，小鼠不能形成生發(fā)中心［4］ ，其基因5’端調(diào)控區(qū)的突變或易位而導致的BCL-6表達異常，推測是某些淋巴瘤發(fā)生的基礎(chǔ)［5］ .為進一步闡明BCL-6表達與生發(fā)中心形成及淋巴瘤發(fā)生的關(guān)系，我們對17例反應(yīng)性增生淋巴組織及74例不同類型的淋巴瘤組織中BCL-6表達情況進行

8、了檢測. </p><p><b>　　1 材料和方法 </b></p><p>　　1.1 材料 1980/1999西京醫(yī)院病理科反應(yīng)性增生淋巴結(jié)（RLH）活檢標本17例及不同類型淋巴瘤活檢標本74例，標本用10g L-1 中性多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，3μm厚連續(xù)切片.所有標本經(jīng)組織形態(tài)學及CD20，CD45RO和CD30（CD20，CD30單克隆抗體均購自丹

9、麥Dako公司，工作濃度1 100;CD45ROmAb購自Sigma公司，工作濃度1 800）相關(guān)免疫學標記檢測（用Dako EnVision+兩步法）后，按1997年WHO淋巴瘤分類草案［6］ 進行分類，RLH17例，F(xiàn)L13例，DLBCL29例，SLL14例，MCL（Men-tle細胞淋巴瘤）4例，HD（霍奇金淋巴瘤）14例.BCL-6mAb購自英國Novocastra公司，Evision+及DAB試劑購自Dako公司. </

10、p><p>　　1.1 方法 石蠟切片用EDTA修復(fù)液配合高壓修復(fù)［7，8］ ，免疫組化采用Dako Evision+兩步法（按說明操作），扁桃體炎標本作陽性對照，TBS代替一抗作陰性對照.采用半定量方法評價結(jié)果:陰性（-）不著色，陽性為棕黃色胞核，散在棕黃色顆粒為中等強度陽性（+），棕黃色團塊為強陽性（）. </p><p>　　統(tǒng)計學方法:采用χ2 檢驗. </p><

11、;p><b>　　2 結(jié)果 </b></p><p>　　2.1 BCL┐6表達 除RLH為CD20及CD45RO雙陽性標記外，所有淋巴瘤標本為CD20（+），CD45RO（-）表型，CD30是HD較特異標記（Fig1）.17例RLH及13例FL均表達BCL-6，RLH表達部位為生發(fā)中心內(nèi)細胞，生發(fā)中心外細胞不表達BCL-6（Fig2）.FL均表達BCL-6，絕大部分DLBCL表達B

12、CL-6（陽性率為86%）.SLL，MCL及HD均未見BCL-6表達（Tab1）. </p><p>　　表1 RLH及淋巴瘤組織免疫標記及BCL-6表達　略 </p><p>　　2.2 BCL┐6表達強度 RLH組BCL-6表達為中等陽性強度（Fig2）.FL組大部分BCL-6亦為中等陽性強度（Fig3），少數(shù)（3/13）為強陽性表達（Fig4）.29例DLBCL中，72%為強陽性表

13、達（Fig5），BCL-6表 達陽性強度顯著高于以上兩組（P&lt;0.01，Tab2）. </p><p>　　表2 BCL-6在RLH，F(xiàn)L及DLBCL中表達陽性強度情況　略 </p><p><b>　　3 討論 </b></p><p>　　經(jīng)免疫學標記檢測進一步證實，F(xiàn)L，DLBCL，SLL，MCL及HD主要為B淋巴細胞起源，

14、CD30為霍奇金淋巴瘤的特征性標記之一，本研究中14例HD CD30均為陽性，提示分類可靠.Allman等［3］ 研究發(fā)現(xiàn)，BCL-6在多種細胞增殖時表達水平下降，而在細胞分化時表達水平上調(diào).在增殖非常活躍的生發(fā)中心B淋巴細胞中，BCL-6mRNA水平與生發(fā)中心外靜止狀態(tài)的B細胞水平相當，但BCL-6蛋白水平卻可高出外周B細胞30余倍.提示BCL-6蛋白在翻譯及翻譯后水平受到嚴格調(diào)控.Dent等［4］ 證實BCL-6基因缺陷鼠其淋巴組織

15、不能形成生發(fā)中心.本研究用組化方法證實，BCL-6主要表達于正常淋巴組織生發(fā)中心，表達水平為中等陽性強度，生發(fā)中心以外淋巴細胞不表達BCL-6，與Flenghi等［9］ 的報道一致，進一步證實BCL-6持續(xù)表達與生發(fā)中心形成密切相關(guān).生發(fā)中心這一特殊環(huán)境可能提供給B細胞某種刺激信號，使得BCL-6處于持續(xù)表達狀態(tài)，BCL-6表達又是生發(fā)中心形成不可缺少的條件.13例濾泡性淋巴瘤均表達BCL-6，大部分表達水平與正常淋巴組織生發(fā)中心相似，

16、僅少部分呈強陽性表達.而29例D</p><p>　　FL的發(fā)生一直認為主要與14q32染色體易位有關(guān)，與BCL-6關(guān)系不大［10］ .Capello等［11］ 最近研究發(fā)現(xiàn)，部分FL同樣存在bcl-6調(diào)控區(qū)基因突變，當基因突變至一定程度時，可使惡性程度較低的FL轉(zhuǎn)化為惡性程度較高DLBCL.本研究發(fā)現(xiàn)少數(shù)FL患者BCL-6異常表達，是否因其調(diào)控區(qū)基因突變引起，而異常表達的BCL-6是否能促使FL向DLBCL轉(zhuǎn)化

17、，此問題值得進一步研究.研究中還發(fā)現(xiàn)，并非所有DLBCL均強表達BCL-6，檢測BCL-6表達對進一步研究DLBLC的起源及發(fā)病機制有重要意義，BCL-6表達陽性的DLBCL可能起源于生發(fā)中心B淋巴細胞.14例SLL，4例MCL及14例典型HD患者均不表達BCL-6，與Raible等［12］ 報道結(jié)果相似.提示以上淋巴瘤可能起源于非生發(fā)中心B淋巴細胞，且這些類型淋巴瘤發(fā)病機制可能與BCL-6關(guān)系不大.但檢測BCL-6有一定的鑒別診斷價值

18、.①FL與SLL及MCL的鑒別，三者為中低度惡性淋巴瘤，瘤細胞與正常淋巴濾泡的帽帶細胞相似，時常彌漫一致，難以區(qū)別，可借助BCL-6鑒別診斷;②RLH與HD的鑒別:部分淋巴結(jié)持續(xù)炎性病變亦可致淋巴結(jié)</p><p>　　圖1 － 圖5 略 </p><p><b>　　參考文獻: </b></p><p>　?。?］Chang CC，Ye B

19、H，Chaganti RS，Dalla-Favera R.BCL-6，a PoZ/zinc-finger，is a sequence-specific transcriptional repressor ［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1996;93:6947-6952. </p><p>　?。?］Zhang YG，Huang GS，Guo Y，Wang Z，Tong SY.Apoptos

20、is related gene bcl-6expression increased in K562cell induced by matrine ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（3）:Cover2. </p><p>　?。?］Allman D，Jain A，Dent A，Maile RR，Selvaggi T，Kehry M

21、R，Staudt LM.BCL-6expression during B-cell activation ［J］.Blood，1996;87:5257-5268. </p><p>　?。?］Dent AL，Shaffer AL，Yu X，AllmanD，Standt LM.Control of　inflammation，cytokine expression，and germinal center forma-

22、tion by BCL-6［J］.Science，1997;276:589-592. </p><p>　?。?］Lossos IS，Levy R.Mutation analysis of the5’noncoding regu-latory region of the BCL-6gene in non-Hodgkin lymphoma:Ev-idence for recurrent mutations and

23、intraclonal heterogeneity ［J］.Blood，2000;95:1400-1405. </p><p>　　［6］Harris NL，Jaffe ES，Diebold J，F(xiàn)landrin G，Muller-Hermelink HK，Vardiman J，Lister TA，Bloomfield CD.The World Health Organization classification

24、 of neoplastic diseases of the haematopoietic and lymphoid tissues:Report of the Clinical Ad-visory Committee Meeting，Airlie House，Virginia，November1997［J］.Histopathology，2000;36:69-87. </p><p>　?。?］Zhang YQ

25、，Huang GS，Zhao YL，Wang Z，Yan QG，Guo Y.Inactivity mechanism and retrieval of the antigenic activity of BCL-6in paraffin sections ［J］.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（5）:1352-1354. </p><p&

26、gt;　?。?］Norton AJ，Jordan S，Yeomans P.Brief，high-temperature heat denaturation（pressure cooking）:A simple and effective method of antigen retrieval for routinely processed tissues ［J］.J Pathol，1994;173:371-379. </p>

27、<p>　?。?］Flenghi L，Bigerna B，F(xiàn)izzotti M，Venturi S，Pasqualucci L，Pileri S，F(xiàn)alini B.Monoclonal antibodies PG-B6a and PG-B6p recognize，respectively，a highly conserved and a formol-resis-tant epitope on the human BCL-

28、6protein amino-terminal region ［J］.Am J Pathol，1996;148:1543-1555. </p><p>　?。?0］Merup M，spasokoukotskaja T，Einhorn S，Smith CI，Gahrton　G，Juliusson G.BCL-2rearrangemints with breakpoints in both vcr and mbr i

29、n non-Hodgkin’s lymphomas and chronic lympho-cytic leukaemia ［J］.Br J Haematol，1996;92（3）:647-652. </p><p>　　［11］Capello D，Vitolo U，Pasqualucci L，Quattrone S，Migliaretti G，F(xiàn)assone L，Ariatti C，Gaidano G.Distr

30、ibution and pattern of BCL-6mutation throughout the spectrum of B-cell neoplasia ［J］.Blood，2000;95:651-659. </p><p>　?。?2］Raible MD，His ED，Alkan S.BCL-6protein expression by fol-licle center lymphomas.A mark