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文檔簡介
1、本研究在課題組已有的杉木分子木材形成的分子生物學(xué)研究基礎(chǔ)上,利用RNA原位雜交技術(shù)對擴展蛋白基因ClEXP2在莖段組織中的表達進行了空間定位。主要結(jié)果如下:
1.用杉木基因型020的當(dāng)年生莖段為實驗材料,制作石蠟切片。結(jié)果顯示組織切片清晰完整。
2.本研究中,用NBT/NCIP顯色法對石蠟組織切片中內(nèi)源性堿性磷酸酶進行檢測顯示,被檢組織具有高豐度的藍紫色斑點,且集中分布于髓、韌皮部和皮層中。這說明在本實驗的活
2、體組織切片中內(nèi)源性的堿性磷酸酶具有活性,必須在原位雜交實驗中進行內(nèi)源性堿性磷酸酶的封阻。
3.通過設(shè)計5’端加有酶切位點的特異引物擴增得到CLEXP2基因的280bp特異序列,構(gòu)建至含有T7啟動子的T載體,經(jīng)線性化處理陽性克隆質(zhì)粒,并以此為模板,合成了帶有地高辛標記的CLEXP2基因mRNA反義探針。
4.在用CLEXP2基因mRNA反義探針進行反復(fù)的原位雜交實驗中發(fā)現(xiàn),僅在實驗組中檢測到反義探針所具有的雜交
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