中藥治療偏頭痛實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物模型的選擇思路

1、<p>　　中藥治療偏頭痛實(shí)驗(yàn)研究動(dòng)物模型的選擇思路</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 偏頭痛；動(dòng)物模型；中醫(yī)藥療法</p><p>　　偏頭痛為臨床常見(jiàn)的特發(fā)性頭痛,全世界約有2.4億偏頭痛患者[1]。我國(guó)偏頭痛年發(fā)病率20.2/10萬(wàn),患病率523.9/10萬(wàn)[2]。偏頭痛屬于中醫(yī)“頭風(fēng)”、“腦風(fēng)”、“偏頭痛”等范疇,中醫(yī)藥治療偏頭痛積累了大量寶貴的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)研究也取

2、得了不少成果。然而,由于中藥研究的特殊性,要求實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型不但在發(fā)病機(jī)制方面與疾病本身有相似性,而且要有證候相似性。對(duì)于中藥治療偏頭痛的實(shí)驗(yàn)研究來(lái)說(shuō),模型選擇較為困難。筆者發(fā)現(xiàn),某些偏頭痛動(dòng)物模型的體征及行為表現(xiàn)與有些中醫(yī)證候有類(lèi)似之處,提示這些動(dòng)物模型對(duì)特定功效藥物的研究有特殊適用性。在此,對(duì)治療偏頭痛中藥研究中動(dòng)物模型的選擇思路發(fā)表幾點(diǎn)意見(jiàn),希望與大家共同探討。</p><p>　　偏頭痛是一種多因素疾病,其

3、發(fā)病機(jī)制目前尚無(wú)定論。繼血管源學(xué)說(shuō)后,又有神經(jīng)源學(xué)說(shuō)、三叉神經(jīng)-血管源學(xué)說(shuō)。5-羥色胺(5-HT)及其受體、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)、P物質(zhì)(SP)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)等血管活性物質(zhì)與偏頭痛發(fā)作有關(guān)。目前,偏頭痛動(dòng)物模型主要是基于各種發(fā)病假說(shuō)進(jìn)行模擬的,國(guó)內(nèi)外實(shí)驗(yàn)性偏頭痛動(dòng)物模型的制備方法有多種,不外是用物理、化學(xué)或生物致病因素作用于動(dòng)物,造成動(dòng)物局部組織、器官或全身性損害,出現(xiàn)某些與人類(lèi)偏頭痛發(fā)作時(shí)類(lèi)似的功能、代謝或

4、形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的病變。主要有以下幾種：①基于血管源學(xué)說(shuō)的偏頭痛模型主要是皮下注射硝酸甘油所致的血管性偏頭痛模型。②基于神經(jīng)源學(xué)說(shuō)的偏頭痛模型包括KCl誘導(dǎo)的大鼠皮層擴(kuò)散型抑制模型和機(jī)械針刺誘導(dǎo)的大鼠模型兩種。③基于三叉神經(jīng)-血管源學(xué)說(shuō)的動(dòng)物模型有電刺激誘發(fā)法和物質(zhì)誘導(dǎo)法兩種,前者包括電刺激大鼠三叉神經(jīng)節(jié)或硬腦膜模型和電刺激貓上矢狀竇區(qū)所致的神經(jīng)源性炎癥反應(yīng)偏頭痛模型,后者為P物質(zhì)誘導(dǎo)的偏頭痛模型。④利血平化低5-HT小鼠偏頭痛模型。⑤其他

5、模型：自體耳動(dòng)脈血緩慢枕大池注入所致的中國(guó)白兔腦血管痙攣模型；電刺激離體豬基底動(dòng)脈標(biāo)本引起對(duì)河</p><p>　　1 皮下注射硝酸甘油所致的大鼠偏頭痛模型</p><p><b>　　1.1 模型原理</b></p><p>　　臨床上發(fā)現(xiàn),心絞痛患者應(yīng)用0.3～0.4 mg硝酸甘油后, 5O%以上患者可出現(xiàn)偏頭痛樣頭痛[3]。持續(xù)靜脈注

6、射硝酸甘油可引起健康人劑量依賴(lài)性的反復(fù)發(fā)作性頭痛,而機(jī)體其它任何部位無(wú)疼痛。硝酸甘油在體內(nèi)生成N0,一方面大量N0可使腦血管過(guò)度擴(kuò)張,并造成無(wú)菌性炎癥；另一方面,NO具有神經(jīng)毒性作用,可激發(fā)三叉神經(jīng)-血管反射,誘發(fā)實(shí)驗(yàn)性偏頭痛。疼痛刺激激活了谷氨酸-NMDA受體或其他受體,進(jìn)一步激活神經(jīng)元第二信使,誘導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)c-fos、c-jun基因表達(dá)異常增強(qiáng)。c-fos、c-jun作為即早基因,已被廣泛用作神經(jīng)元激活標(biāo)記物。</p&g

7、t;<p>　　1.2 造模方法[4-5]</p><p>　　SD 大鼠,雌雄各半,體重(300±30)g。皮下注射硝酸甘油注射液10 mg/kg。</p><p>　　1.3 模型特點(diǎn)及應(yīng)用</p><p>　　注射硝酸甘油后3～30 min左右,動(dòng)物出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)增多、煩躁不安現(xiàn)象,此現(xiàn)象持續(xù)約3 h,繼而出現(xiàn)

8、蜷臥,活動(dòng)減少狀態(tài)。該模型以血管學(xué)說(shuō)為基礎(chǔ),模型癥狀表現(xiàn)及病理變化與人類(lèi)偏頭痛發(fā)作有一定的相似性,而且具有動(dòng)物易于獲得、經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、相似性好、適用性強(qiáng)等特點(diǎn)。模型大鼠出現(xiàn)耳紅、前肢頻繁搔頭、爬籠次數(shù)增多、煩躁不安現(xiàn)象,與偏頭痛肝陽(yáng)上亢證、風(fēng)火上擾證類(lèi)似。研究以平肝、清熱、熄風(fēng)、潛陽(yáng)立法的中藥,選用這種模型較為合適。任氏等[6]研究了頭風(fēng)飲(川芎、天麻)對(duì)硝酸甘油型實(shí)驗(yàn)性偏頭痛大鼠的作用,結(jié)果表明,頭風(fēng)飲能顯著抑制偏頭痛大鼠腦干、下丘腦增

9、強(qiáng)的c-fos、c-jun基因表達(dá)。頭風(fēng)膠囊(川芎、天麻)[7]能明顯降低硝酸甘油所致的大鼠偏頭痛模型血中CGRP和組織胺(His)的含量,并能明顯升高大鼠血中ET的含量。</p><p>　　2 利血平化低5-HT伴局部腦血管痙攣的小鼠偏頭痛模型</p><p><b>　　2.1 造模機(jī)制</b></p><p>　　臨床研究發(fā)現(xiàn),偏頭

10、痛患者發(fā)病先兆期外周血5-HT升高,引起血管收縮；發(fā)病高峰時(shí)5-HT降低,并伴有血管過(guò)度擴(kuò)張。這種5-HT含量的變化是偏頭痛發(fā)作的直接原因。單胺類(lèi)遞質(zhì)耗竭劑利血平能夠耗竭體內(nèi)5-HT,從而誘發(fā)偏頭痛。已知偏頭痛發(fā)作期因局部小血管收縮而造成腦內(nèi)代謝產(chǎn)物堆積,炎性物質(zhì)(如前列腺素、組織胺等)增多,從而加重頭痛,顱內(nèi)局部注射血凝塊可以誘發(fā)腦血管痙攣。將上述兩種方法結(jié)合起來(lái)就形成了利血平化低5-HT伴局部腦血管痙攣的偏頭痛模型。</p&g

11、t;<p>　　2.2 造模方法[8]</p><p>　　KM小鼠非近交系封閉群,雌雄各半,體重(19.57±0.88)g。皮下注射利血平注射液10 mg/kg,共14 d。于第14天將小鼠乙醚麻醉,大腦皮層注射鼠血凝塊2 μL/只,同時(shí)根據(jù)藥物特點(diǎn)選用不同給藥途徑給藥。</p><p>　　2.3 造模特點(diǎn)及應(yīng)用</p><p>　　

12、此模型支持血管學(xué)說(shuō)。該模型造模周期較長(zhǎng),操作較繁瑣,動(dòng)物死亡率高,但造模后小鼠凝血時(shí)間明顯縮短,痛閾降低,全血及腦內(nèi)5-HT含量明顯下降,基本反映了偏頭痛的特點(diǎn)。模型動(dòng)物精神不振,眼睛瞇成線狀,體溫明顯下降,倦縮少動(dòng),四肢震顫,類(lèi)似寒戰(zhàn),前肢緊貼口鼻,前肢腕關(guān)節(jié)彎曲,貼近軀干,頭縮向軀干,肛門(mén)口有糞便堆積,部分小鼠腹下部濕漉,體重逐日下降,毛發(fā)無(wú)光[9]。上述表現(xiàn)與偏頭痛寒證、血瘀證、陽(yáng)虛證類(lèi)似,若研究具有溫經(jīng)散寒、活血化瘀、益氣溫陽(yáng)功

13、效的中藥可選用這種模型。杜氏等[8]觀察了精制吳茱萸膠囊對(duì)利血平化低5-HT伴局部腦血管痙攣的實(shí)驗(yàn)性偏頭痛小鼠的作用,結(jié)果顯示,精制吳茱萸膠囊能延長(zhǎng)模型小鼠的凝血時(shí)間,調(diào)節(jié)5-HT的過(guò)度降低,提高痛閾并抑制腦內(nèi)炎性刺激物的升高。</p><p>　　對(duì)中藥研究來(lái)說(shuō),動(dòng)物模型的證候?qū)傩允遣豢珊鲆暤闹匾獥l件,理應(yīng)給與足夠的重視。偏頭痛癥狀表現(xiàn)復(fù)雜多樣,臨床常見(jiàn)中醫(yī)證型有多種,因此,上述模型遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足中藥研究的需求,積

14、極研究與中醫(yī)證候相結(jié)合的偏頭痛動(dòng)物模型具有十分重要的意義。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　　[1] 倫道夫 W.埃文斯.頭痛診療手冊(cè)[M].于元生,蒲傳強(qiáng)譯.北京：科學(xué)出版社,2002.1.</p><p>　　[2] 郭述蘇.中國(guó)偏頭痛流行病學(xué)調(diào)查[J].臨床神經(jīng)病學(xué)雜志,1991,4(2)：65.<

15、;/p><p>　　[3] 閻 海.偏頭痛診治大成[M].北京：學(xué)苑出版社,1996.122－123.</p><p>　　[4] 彭 成,任永欣,姚 干,等.實(shí)驗(yàn)性偏頭痛動(dòng)物模型c-fos、c-jun基因表達(dá)[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào),2000,8(2)：112－119.</p><p>　　[5] 付先軍,宋旭霞,周永紅,等.硝酸甘油型實(shí)驗(yàn)性偏頭痛大鼠模型行為癥狀學(xué)評(píng)

16、價(jià)[J].中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志,2005,4(5)：449－451.</p><p>　　[6] 任永欣,彭 成,姚 干.頭風(fēng)飲對(duì)實(shí)驗(yàn)性偏頭痛動(dòng)物模型c-fos、c-jun基因表達(dá)的影響[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2000,23(3)：34－36.</p><p>　　[7] 姚 干,陳明嶺,任永欣.頭風(fēng)膠囊對(duì)偏頭痛大鼠血中CGRP、ET和His含量的影響[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2001,