Ⅰ型鴨病毒性肝炎SG株的致病性研究及全基因組序列測定與分析.pdf

1、鴨I型病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH-I)是由I型鴨肝炎病毒引起的雛鴨高度致死性、傳播性的病毒性疾病，主要侵害6周齡以內(nèi)雛鴨，以2日齡至3周齡的雛鴨最為易感，成年鴨有抵抗力。DHV有I型、II型和Ⅲ型，其中I型和Ⅲ型屬于小RNA病毒科，II型屬于星狀病毒科。我國主要流行的是I型鴨肝炎病毒，該病是養(yǎng)鴨業(yè)的主要疾病之一，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。 本研究主要包括以下內(nèi)容： 1、對山東壽光地區(qū)

2、的疑似鴨病毒性肝炎的病鴨肝組織進行病原分離，通過鴨胚尿囊腔接種分毒、血凝實驗、標準血清中和實驗、動物回歸實驗以及RT-PCR檢測對病毒進行鑒定，并在此基礎(chǔ)上對該病毒的ELD50和LD50進行了測定。結(jié)果表明所分離病毒無血凝性，人工感染12日齡鴨胚和7日齡雛鴨后表現(xiàn)出典型的鴨肝炎病毒致病特征，能被DHV-I標準抗血清中和，RT-PCR檢測及序列測定為傳統(tǒng)的DHV-I，其第5代病毒尿囊液對12日齡鴨胚的ELD50為10-5.58/0.2ml

3、，對7日齡雛鴨的LD50為10-4.68/0.2ml。實驗結(jié)果表明本研究在山東壽光地區(qū)成功分離到一株傳統(tǒng)I型鴨肝炎病毒強毒，命名為SG株DHV-I。 2、根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的DVH-I的全基因組序列，本研究設(shè)計了9對特異性引物對SG株DVH-I全基因組進行擴增及克隆測序，序列拼接后，進行BLAST在線同源比較，確定為I型鴨肝炎病毒序列，并提交GenBank，登錄號為FJ971623。測序結(jié)果顯示SG株DVH-I基因組全長7690bp(

4、3'端ploy(A)尾巴除外)，基因組結(jié)構(gòu)為5'UTR-VP0-VP3-VP1-2A1-2A2-2B-2C-3A-3B-3C-3D-3'UTR，包含一個全長6750bp大的ORF，編碼2249個氨基酸長的多聚蛋白(Polyprotein)，具有與小RNA病毒科其他成員相似的切割位點，且被切割成11個終蛋白產(chǎn)物。將所獲得的SG株DHV-I的全基因組核苷酸序列、Polyprotein氨基酸序列、VP1氨基酸序列、P1核苷酸序列以及3D氨基酸