IBDV-DDK病毒株的全基因組測定和序列分析.pdf

1、雞傳染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease, IBD）是由傳染性法氏囊病病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病。自超強毒株（vvIBDV）出現(xiàn)后，致病力顯著加強。vvIBDV不僅能夠突破母源抗體保護，感染3~6周齡雛雞，還能夠躲避多數(shù)疫苗株產(chǎn)生的抗體保護。IBDV-MB株為國外常用的中等偏強毒力疫苗株，其特征性氨基酸位點與vvIBDV保持

2、基本一致，僅有個別氨基酸突變，因而在臨床上能夠較為有效防控vvIBDV，該疫苗株從九十年代起就有在國內(nèi)臨床應(yīng)用研究和使用的報道。本試驗通過對IBDV-DDK病毒株的全基因組序列進行測定，并對其核苷酸序列進行同源性分析，明確了該病毒株的遺傳進化地位，有助于了解該毒株的變異情況及其與IBDV疫苗株之間的差異，以探求其分子流行特征和變異規(guī)律，為今后控制IBDV的流行和科學(xué)研究提供一定的參考依據(jù)。
　　根據(jù) GenBank公布的IBDV毒

3、株全基因組序列，設(shè)計出四對引物用于IBDV-DDK病毒株全基因組序列擴增。通過RT-PCR技術(shù)分段擴增出DDK病毒株的核苷酸序列，分別連接到pGEM-T Easy載體上，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細胞，挑取單克隆菌落，提取質(zhì)粒并進行 PCR、酶切和測序鑒定，然后進行核苷酸同源性和遺傳進化關(guān)系分析。結(jié)果表明，各個基因片段的重組質(zhì)粒構(gòu)建成功，核苷酸序列分析表明，IBDV-DDK病毒株A節(jié)段大小為3257 bp，含有兩個開放閱讀框（ORF），大閱讀框

4、編碼多聚蛋白 VPx，小閱讀框編碼 VP5蛋白；B節(jié)段大小為2823 bp，含有一個ORF，編碼VP1蛋白。通過與本研究所選參考毒株核苷酸的同源性比對分析，DDK病毒株 A節(jié)段與參考毒株的核苷酸同源性范圍在83.4％~98.3%，其中與MB毒株同源性為98.3%，與血清Ⅱ型23/82和OH毒株同源性為83.4%；B節(jié)段核苷酸同源性范圍在88.9%~98.7%，其中與MB毒株同源性為98.7%，與E毒株同源性為88.9%。遺傳進化樹分析表

5、明，DDK病毒株A、B節(jié)段均與MB、UK661等毒株親緣關(guān)系相對較近。將DDK病毒株與強弱毒株氨基酸序列進行比對分析表明，DDK病毒株VPx中第222位特征性氨基酸是T，而其他vvIBDV的該位點均為A，中等偏強毒力疫苗MB株和2512株的該位點分別為A和P，常見弱毒疫苗株的該位點為P，且該位點對于IBDV致病性有重要影響，其余特征性氨基酸與vvIBDV基本保持一致；B節(jié)段相對于A節(jié)段比較保守，IBDV-DDK病毒株的VP1蛋白中第4位