外源抗原在蠟樣芽胞桿菌細胞表面展示的可行性研究.pdf

1、本研究室劉梅利用蘇云金芽胞桿菌的S-層蛋白在蘇云金芽胞桿菌細胞表面成功展示了禽流感病毒核衣殼蛋白（NP）、血凝素蛋白（HA1）和雞毒霉形體粘附素蛋白（pMGA）等禽類病原體抗原，雖然實驗證實蘇云金芽胞桿菌BMB171對小鼠和雞都安全無毒，但其是否具有益生作用，還未見相關報道；蠟樣芽胞桿菌在畜牧業(yè)中常被用作微生態(tài)制劑來使用，本文在劉梅等研究的基礎上利用細菌細胞表面展示技術，探索在蠟樣芽胞桿菌細胞表面展示外源抗原的可行性，為研制能耐高溫同時

2、具有益生作用的禽用口服疫苗提供理論基礎。
　　 1．蠟樣芽胞桿菌重組菌株的構建
　　 以蘇云金芽胞桿菌CH和BCCH菌株為出發(fā)菌株，進行質(zhì)粒pCSHA1P、pCTC-HA1P和pMIL-CSA的抽提和酶切鑒定，將鑒定正確的重組質(zhì)粒分別電轉(zhuǎn)化至蠟樣芽胞桿菌中，其中包含質(zhì)粒pCSHA1P的重組菌株命名為BcA，同時含有兩個質(zhì)粒pCTC-HA1P和pMIL-CSA的重組菌株命名為BcC。其中質(zhì)粒pMIL-CSA攜帶有csaAB

3、操縱元，在轉(zhuǎn)化不含csaAB操縱元的重組質(zhì)粒時要同時轉(zhuǎn)化該質(zhì)粒，以便給受體菌株提供csaAB操縱元。
　　 2．檢測外源抗原蛋白在重組菌株細胞表面的展示情況
　　 用血凝和血凝抑制試驗檢測BcA和BcC這兩個重組菌株的表面展示情況。結果，這兩個重組菌株均表現(xiàn)出了預計的生物學活性，說明所構建的S-層融合蛋白基因在受體菌株中得到表達并展示到了細胞表面且具有活性。
　　 3．檢測重組菌株對雛雞的免疫原性