非發(fā)酵革蘭陰性菌

1、Department of Microbiology, Hebei North University,教學(xué)目的 掌握非發(fā)酵菌的鑒定要點(diǎn)及銅綠假單胞菌的鑒定特征，熟悉不動(dòng)桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬的主要鑒定特征。,第二十四章 非發(fā)酵革蘭陰性桿菌nonfermentative Gram-negative bacilli,Department of Microbiology, Hebei North University,非發(fā)酵菌

2、 Nonfermenters,,,,,,概念：一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌。,Department of Microbiology, Hebei North University,主要菌屬： 假單胞菌屬(Pseudomonas) 產(chǎn)堿桿菌屬(Alcaligenes) 不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)

3、 莫拉菌屬(Moraxella) 黃桿菌屬(Flavobacterium) 叢毛單胞菌屬(Comamonas) 無色桿菌屬（Achromobacter） 艾肯菌屬(Elikenella) 土壤桿菌屬(Agrobacterium),Department of Microbiology, Hebei North University,第一節(jié) 假單胞菌屬（ P

4、seudomonas ） ------銅綠假單胞菌P.aeruginosa,廣泛存在于自然環(huán)境，是引起醫(yī)院內(nèi)感染的常見病原菌，屬于重點(diǎn)監(jiān)測(cè)菌株。 為人體正常菌群的一部分，多數(shù)為條件致病菌。 具有天然抗藥性，常呈多重耐藥,且耐藥率逐年增加。常見菌有： 銅綠假單胞菌P.aeruginosa 熒光假單胞菌P.fluorecence 惡臭假

5、單胞菌P.Putide\,Department of Microbiology, Hebei North University,,1、形態(tài)染色：G-直或微彎細(xì)長桿菌，有莢膜，端生單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑 。 2、培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求不高：專性需氧，4℃不生長，42℃可生長；液體——混濁，形成菌膜；血平板——金屬光澤、特殊氣味、透明溶血環(huán)；普通平板——多種色素（綠膿素和熒光素）MAC---半透明，48h后中心棕綠色,一

6、、生物學(xué)性狀：,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,Department of Microbiology, Hebei North University,Department of Microbiology, Hebei North University,典型菌落,,

7、大腸菌樣型菌落,,粗糙型菌落,,粘液型菌落,,侏儒型菌落,,Department of Microbiology, Hebei North University,3、生化反應(yīng)：,氧化酶陽性；在O/F培養(yǎng)基上，氧化分解葡萄糖；精氨酸雙水解酶陽性；利用枸櫞酸鹽；液化明膠；還原硝酸鹽為亞硝酸鹽并產(chǎn)生氮?dú)狻?Department of Microbiology, Hebei North University,4、抗原構(gòu)造與分型：,外膜

8、蛋白：具有屬的特異性菌體(O)抗原 脂多糖：具有型特異性鞭毛（H）抗原,,Department of Microbiology, Hebei North University,5、抵抗力強(qiáng)： 對(duì)干燥、紫外線有抵抗力； 在蒸餾水中長期存活 對(duì)多種抗生素耐藥---先形成生物膜，產(chǎn) 生耐藥性（通透性差）

9、 對(duì)熱抵抗力弱，56℃ 30min可被殺死； 對(duì)消毒劑敏感，1%石炭酸5min即被殺死；,,Department of Microbiology, Hebei North University,PA 對(duì)亞胺培南的耐藥性,銅綠假單胞菌對(duì)β內(nèi)酰胺酶類抗生素的耐藥性明顯增加 ,尤其是耐碳青霉烯類 PA 所致感染已成為臨床抗感染治療的棘手問題。 耐碳青霉烯類抗生素 PA 的耐藥機(jī)制較復(fù)雜：①產(chǎn)生β--內(nèi)酰胺酶，如：金屬β-

10、內(nèi)酰胺酶②特異性的孔蛋白OprD2缺失③細(xì)菌主動(dòng)外排系統(tǒng)。,Department of Microbiology, Hebei North University,菌體結(jié)構(gòu),,,毒素,,酶,,致病物質(zhì),,二、致病性：,,,Department of Microbiology, Hebei North University,2、所致疾?。?條件致病菌：免疫力低下者易感。 醫(yī)院內(nèi)感染：醫(yī)院環(huán)境監(jiān)測(cè)（水、物體表面、 空氣）；藥物敏感性

11、變遷—指導(dǎo)臨床用藥。 臨床表現(xiàn)多樣：化膿性細(xì)菌燒傷感染：綠色、惡臭膿液—滲透過多層紗布。呼吸道感染：常見于免疫力低下者，肺感染者痰中帶血。中耳炎：常見于慢性感染者。眼角膜炎：穿孔后失明。如果合并敗血癥者死亡率高,Department of Microbiology, Hebei North University,院內(nèi)感染的重要地位,1、在院內(nèi)感染比率僅次于大腸桿菌10%2、院內(nèi)感染常見類型： 下呼吸道或肺部感染

12、 傷口感染 尿路感染 免疫功能低下者—敗血癥 心臟術(shù)后,Department of Microbiology, Hebei North University,三、微生物檢驗(yàn),,1、標(biāo)本采集：血液、腦脊液、胸腹水、尿液、痰液、膿汁等。醫(yī)院環(huán)境監(jiān)控：可采集空氣、水、物體表面等。2、直接鏡檢：涂片、革蘭染色3、分離培養(yǎng)：直接接種或增菌后接種血平板和MAC4、鑒定：根據(jù)菌落特征、色素、菌體形態(tài)、氧化酶

13、試驗(yàn)等作出鑒定。對(duì)無色素菌株應(yīng)與其他假單胞菌鑒別。5、結(jié)果報(bào)告：①無正常菌群部位的標(biāo)本，有臨床意義。 ②有正常菌群的部位標(biāo)本，有臨床特征，檢出有意義。 ③有正常菌群的部位標(biāo)本，無臨床特征，檢出無意義,病房物體表面不得檢出銅綠假單胞菌外科、婦科空氣培養(yǎng)不得檢出銅綠假單胞菌,Department of Micro

14、biology, Hebei North University,2.檢驗(yàn)程序 血液 腦脊液、胸腹水、膿液、痰、尿液 糞便  營養(yǎng)肉湯 分離培養(yǎng) 分離培養(yǎng) （血瓊脂，麥康凱) 涂片染色 (SS

15、，麥康凱)              初步鑒定

16、 最后鑒定  菌落；形態(tài)；色素；氧化酶 生化反應(yīng) 分型

17、 血 噬 綠 基 清 菌 膿 因

18、 型 體 素 型,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Department of Microbiology, Hebei North University,非發(fā)酵菌生化編碼鑒定結(jié)果記錄表,鑒定值 鑒定結(jié)果 鑒定者,Department of Microbiology, Hebei North University,銅綠假單胞菌的鑒定要點(diǎn)及與

19、其他假單胞菌的區(qū)別,Department of Microbiology, Hebei North University,銅綠假單胞菌的鑒定依據(jù),,Department of Microbiology, Hebei North University,四、防治原則,銅綠假單胞菌可由各種途徑傳播，但主要是通過污染醫(yī)療器械、用具及帶菌醫(yī)護(hù)人員引起醫(yī)源性感染。 結(jié)合臨床感染癥狀，如果無感染癥狀則作為正常菌群（住院患者帶菌率20%）。

20、 臨床治療必須密切遵循藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果。,Department of Microbiology, Hebei North University,第二節(jié)不動(dòng)桿菌屬Acinetobacter,不動(dòng)桿菌(Acinetobacter)為一群氧化酶陰性，不發(fā)酵糖類、無動(dòng)力的革蘭陰性菌。主要包括：,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbi

21、ology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,,見下表,二、致病性,1、腐生菌、水中100%有、自來水清洗器

22、械。2、產(chǎn)生青霉素酶。3、其感染多見于嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病、大量使用抗生素、激素、呼吸機(jī)使用者、透析患者： ※菌血癥：靜脈導(dǎo)管導(dǎo)致 ※傷口感染：蜂窩組織炎 ※胸外科術(shù)后易感,Department of Microbiology, Hebei North University,不動(dòng)桿菌屬主要菌種生化反應(yīng)特征,Department of Microbiology, Hebei North University,,,血平板和MAC,D

23、epartment of Microbiology, Hebei North University,,(3)初步鑒定,染色為革蘭陰性球桿狀菌，成對(duì)排列，氧化酶（-），O/F 試驗(yàn)為氧化型，動(dòng)力（-），硝酸鹽還原（-）。 符合上述結(jié)果即可判定為不動(dòng)桿菌屬的細(xì)菌。與屬內(nèi)其他菌的鑒別：,Department of Microbiology, Hebei North University,不動(dòng)桿菌屬檢驗(yàn)程序,,血液、腦脊液,增菌培養(yǎng),

24、,,血平板和MAC,,Department of Microbiology, Hebei North University,第三節(jié) 產(chǎn)堿桿菌屬Alcaligenes,,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, H

25、ebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,窄食單胞菌,,Department of Microbiology, Hebe

26、i North University,生物學(xué)性狀,,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,,,Department of Microbiology, Hebei North University,窄食單胞菌鑒定依據(jù),,Department of Microbiology

27、, Hebei North University,其他臨床常見的非發(fā)酵菌,黃桿菌屬：1、氧化酶陽性、H2O2陽性2、細(xì)長桿菌，無鞭毛，專性需氧3、血平板上產(chǎn)生色素（黃）4、磷酸酶陽性5、O-F為氧化型,Department of Microbiology, Hebei North University,其他臨床常見的非發(fā)酵菌,莫拉菌屬：1、氧化酶陽性、H2O2陽性2、球桿菌，無鞭毛，專性需氧3、營養(yǎng)要求高，最適32-35