agilent色譜柱選擇與保養(yǎng)

1、,HPLC色譜柱選擇與維護(hù)保養(yǎng),,,Sa安捷倫科技,,安捷倫HPLC色譜柱選擇,分離模式的選擇,,,,,,,,,,,,,,,,,樣品,溶于有機(jī)溶劑,溶于水,溶于四氫呋喃,非離子化,離子化,溶于有機(jī)溶劑,溶于水,,溶于正己烷,,溶于甲醇或甲醇/水或乙腈或乙腈/水,用硅膠的正相模式,用鍵合相的正相模式,用鍵合相的反相模式,用鍵合相的反相模式,低分子凝膠滲透色譜,用鍵合相的反相模式,抑制電離反相鍵合相色譜,離子對鍵合相的反相模式,用硅膠的

2、正相模式,離子交換模式,,,凝膠滲透色譜,凝膠過濾色譜,大孔填料的離子交換模式,用大孔填料的反相模式,,,,,,,,,,分子量>2, 000,分子量<2, 000,,,,,,,,,,,反相分配色譜 極性:固定相 < 流動相固定相 - 非極性流動相(甲, 乙醇, 乙腈, THF, 二氯乙烷)- 極性非極性物質(zhì)后出峰,正相吸附色譜 極性:固定相 > 流動相固定相 - 極性流

3、動相(己烷, 庚烷)- 非極性極性物質(zhì)后出峰,正相色譜 20%,反相色譜80%,正相 &反相色譜,硅膠基質(zhì)- pH 3~8 Al2O3 . nH2O - pH1~14 聚合物基質(zhì) - pH1~14,高或低pH下, 硅膠會溶解,化學(xué)修飾困難,孔結(jié)構(gòu)復(fù)雜, 孔徑不均勻?qū)е轮Р粔蚋? 有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物基質(zhì)溶漲而受損,柱填料基質(zhì),C-18柱---性能影響因素,硅膠純度? 填料硅膠的純度與殘留金屬離子濃度色譜柱尺寸

4、? 填料床的長度和內(nèi)徑顆粒形狀? 球型或不規(guī)則型粒徑? 平均顆粒直徑, 通常3-10µm表面積? 顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和, 以m2/gram表示孔徑 ? 顆粒的孔或腔的平均尺寸, 范圍80-300Å,色譜柱物理性質(zhì),C-18柱---性能影響因素,鍵合類型? 單體鍵合 - 鍵合相分子與基體單點相連? 聚合體鍵合 - 鍵合相分子與基體多點相連碳覆蓋率

5、? 與基體物質(zhì)相連的鍵合相的量封端 ? 鍵合步驟之后, 用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來,色譜柱化學(xué)性質(zhì),C-18柱---性能影響因素,A類硅膠Original ZORBAX SIL (1970s)由于帶負(fù)電荷的殘留硅羥基和酸性表面上金屬含量高 (硅羥基的pKa低), 導(dǎo)致堿性化合物發(fā)生拖尾,B類硅膠 (高純)ZORBAX Rx-Sil (1987)由于金屬含量低, 硅羥基pKa高, 堿性化合

6、物不發(fā)生拖尾,Zorbax Rx-SIL: 11種金屬< 35 ppm (未檢出其他雜質(zhì), <1ppm); 99.995% 純度的二氧化硅,C-18柱---性能影響因素,ZORBAX®生產(chǎn)工藝,,微球表面的略微融合專利技術(shù)增強了硅膠填料的耐流動相沖刷能力---Zorbax色譜柱使用壽命長的技術(shù)保障,安捷倫擁有此項溶膠-凝膠填料專利技術(shù),StableBondEclipse XDBBonus-RPExte

7、nd,ZORBAX Rx多孔硅膠微球,色譜柱尺寸 --- 對色譜分離的影響? 短柱 (15-100mm) - 運行時間短, 柱壓低? 長柱 (150-250mm) - 分辨率高, 運行時間長? 窄徑柱 (? 2.1mm) - 檢測器靈敏度高 ? 寬徑柱 (3-21.2mm) - 載樣量高,C-18柱---性能影響因素,顆粒形狀 --- 對色譜分離的影響 當(dāng)使用黏度較大的流動相50:50

8、=MeOH:H2O時, 球型顆?？梢越档椭鶋? 延長色譜柱壽命,C-18柱---性能影響因素,球形,不規(guī)則形,粒徑 --- 對色譜分離的影響 較小的顆粒柱效較高, 但會引起柱壓過高. 3.5µm粒徑的常用于分離復(fù)雜的多組份樣品, 而組份單一的樣品多采用5µm的粒徑,1.8µm 3.5µm 5µm 7µm

9、 10µm,表面積 --- 對色譜分離的影響 高表面積對于多組份樣品的分離具有較強的保留能力, 柱容量和分離度. 表面積低的填料通常能迅速達(dá)到平衡狀態(tài), 對于梯度淋洗尤為重要,C-18柱---性能影響因素,孔徑 --- 對色譜分離的影響 大孔的填料顆?？梢匝娱L溶質(zhì)大分子在填料表面滯留的時間, 達(dá)到充分分離, 改善峰形樣品 MW ?

10、4, 000, 選擇 80Å 的孔徑樣品 MW > 4, 000, 選擇 300Å 的孔徑,大孔徑填料適用于大分子分析,大孔徑300Å 全多孔色譜柱 可用于分離蛋白質(zhì)和多肽 分子量雖小但hydrodynamic volume(水動力學(xué)體積)較大的分子Poroshell 色譜柱 高流速下, 高柱效分析大分子的蛋白

11、質(zhì)和多肽,色譜柱填料孔徑必須適合待測物分子自由進(jìn)出填料孔, 與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配,300Å 孔徑可改善蛋白質(zhì)和多肽峰形,選擇合適的填料孔徑分析大分子可獲得最佳峰形,300Å 孔徑可改善大分子的峰形,色譜柱: 4.6 x 150 mm, 5 mm 流動相: 60% MeOH: 40% 0.1% 三氟乙酸 流速: 0.75 mL/min 溫度: RT

12、 檢測器: UV 282 nm,溶液中的分子尺寸決定適宜的色譜柱孔徑 窄的峰寬表明待測分子進(jìn)入填料孔沒有受到阻礙,分子量雖小但 hydrodynamic volume(水動力學(xué)體積)較大的分子,,,鍵合類型 --- 對色譜分離的影響 單齒鍵合：提高傳質(zhì)速率, 加快色譜柱平衡雙齒鍵合：增加色譜柱穩(wěn)定性, 增加色譜柱的載樣量,C-18柱---性能影響因素,碳覆蓋率--- 對色譜分離的影響 高碳覆

13、蓋率：提高分辨率, 分析時間長低碳覆蓋率：縮短運行時間,封端 --- 對色譜分離的影響 封端：減輕待測組份與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象對于極性樣品, 未封端與經(jīng)過封端處理的色譜柱在選擇性上有明顯差異,C-18柱---性能影響因素,固定相鍵合二甲基硅烷,封端四甲基硅烷,,Si,O,OH,O,O,CH,3,Si,R,CH,3,CH,3,Si,CH,3,CH,3,Si,R,CH,3,R

14、= C8,,C18,,etc,.,O,OH,OH,O,CH,3,Si,R,CH,3,CH,3,Si,R,CH,3,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,+,,,,,,,,,,,,,,,,,+,Cl,CH,3,Si,CH,3,CH,3,OH,OH,OH,OH,CH,3,Cl,R,CH,3,(,TMS),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,傳統(tǒng)鍵合及封端技術(shù),,取代基：五個 旁側(cè)基團(tuán): 異丙基,Zo

15、rbax StableBond 空間位阻保護(hù)---抗水解能力,鍵合相流失, 保留減弱,另一個裸露的硅羥基 , 潛在的拖尾因素,普通硅膠柱低 pH <2不穩(wěn)定, 發(fā)生水解,,安捷倫專利的空間位阻保護(hù),液相柱---保留值與pH的關(guān)系,,,pH變化值0.1,RS變化值1.6,色譜柱：Zorbax StableBond C18 4.6 X 250mm, 5um部件號

16、：880975-906流動相：27%甲醇：73%磷酸pH 2.5 & 2.6溫度：500C流速： 1.0mL/min.,色譜柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8 4.6 x 75 mm, 3.5 µm流動相: 44% 25 mM磷酸, pH 7.00 : 56% 甲醇流速: 1.0 mL/min 溫度: 25°C

17、 檢測: UV 250 nm,可電離的組份的分離可能會隨pH變化發(fā)生顯著變化 —甚至很小的 0.05–0.25 個pH變化單位.,樣品: ketoprofen ethyl paraben Hydrocortisone fenoprofen propyl paraben Propranolol ibuprofen,液相柱---保留值與pH的關(guān)系,0.25 個pH,,液相柱---保留值與pH的

18、關(guān)系,pH變化：0.2個pH(7.0~7.2)保留時間改變：1.2分鐘 (13.6~14.8分鐘),保留時間隨pH改變不明顯,保留時間隨pH改變不明顯(酸性環(huán)境中),,,,方法穩(wěn)定區(qū) 方法波動區(qū)(pKa+1.5) 方法穩(wěn)定區(qū),液相柱---保留值與pH的關(guān)系,液相柱---保留值與pH的關(guān)系,,,,,,復(fù)雜組分的流動相pH選擇技巧,色譜柱: ZORBAX Extend-C184.6 x 1

19、50 mm, 5 mm 流動相: 30% 緩沖液: 70% MeOH pH 7 緩沖液20 mM Na2HPO4 pH 11緩沖液 20 mM TEA 流速: 1.0 mL/min 溫度: RT檢測器: UV 254 nm,,,,,,,,0 5,1,2, 3,4,5,Time (min),7,6,Extend-C18pH 7,1. Mal

20、eate 馬來酸鹽 2. Scopolamine 東莨菪堿 pKa 7.6 3. PseudoEphedrine 假麻黃堿 pKa 9.8 4. Doxylamine 抗敏安(多西拉敏) pKa 9.2 5. Chlorpheniramine 氯苯吡胺pKa 9.1 6. Triprol內(nèi)徑ine 苯丙烯啶pKa 6.5 7. Diphenhydramine 苯海拉明 pKa 9.0,,,,Extend-C1

21、8pH 11,,,,,0 5 10,1,2,3,4,Time (min),6,5,7,高pH下, 堿性成分的保留增加,待測物pKa+1.5以外的流動相pH可保證方法的穩(wěn)定性,Zorbax?色譜柱發(fā)展史,1973 ZORBAX SIL發(fā)明專用于HPLC分離的球狀、小顆粒硅膠(專利)1977 ZORBAX ODS單官能團(tuán),

22、 單層鍵合相發(fā)明者之一1978 ZORBAX column首先推出色譜柱的質(zhì)量信譽保證1982 ZORBAX GF-250改善了蛋白質(zhì)尺寸分離的穩(wěn)定性1987 ZORBAX Rx-SIL推出適合堿性化合物的HPLC分離的全新硅溶膠技術(shù)(專利)1990 ZORBAX StableBond增強了低pH條件下鍵合相的穩(wěn)定性(專利)1996 ZORBAX Eclipse XDB雙封端技術(shù)提高了中等pH條件下鍵合相的穩(wěn)定性(專

23、利)1997 Zorbax LC/MS column 15和30 mm(3.5um)快速, 高分辨率, 高通量LC/MS色譜柱1998 ZORBAX Bonus-RP 極性鍵合技術(shù)使堿性化合物的分離得到改善(專利)1999 ZORBAX CombiHT 專為小規(guī)模組合化學(xué)樣品制備設(shè)計的高通量色譜柱1999 ZORBAX Eclipse dsDNA 用于分析雙鏈DNA

24、的多孔硅膠柱1999 ZORBAX Carbohydrate 分析單, 雙, 三糖和糖醇的專用柱1999 Zorbax Extend C18獨特寬pH跨度, 高pH下使用的硅膠基質(zhì)色譜柱(專利)2001 Zorbax SB-aq可在低pH下(1~8)使用100%水相的填料(專利)2002 Zorbax Poroshell 300SB蛋白質(zhì)高速, 高效反相分離新填料2002 ZORBAX 3.0

25、mm 內(nèi)徑.3-mm 柱徑溶劑節(jié)省柱2003 ZORBAX sub 2 micron1.8um粒徑的高通量, 超高速色譜柱 (5月1日上市)2003 ZORBAX PrepHT高通量全系列制備柱---分析柱向制備柱直接放大 (6月1日上市),鍵合相-適用pH范圍,,低pH下, 分析酸性, 堿性和中性組分, 峰形優(yōu)異, 柱壽命長,中等pH下, 分析酸性, 堿性和中性組分, 尤其堿

26、性組分峰形優(yōu)異, 柱壽命長,中等pH下, 分析酸性, 堿性和中性組分, 可用于100%全水相, 尤其極性組分峰形優(yōu)異, 柱壽命長,中~高pH下, 分析酸性, 堿性和中性組分, , 尤其堿性組分峰形優(yōu)異, 柱壽命長,,,,,,,,SB-C1880 A & 300 ApH: 1~8,SB-C880 A & 300 ApH: 1~8,SB-苯基80 A

27、pH: 1~8,反相色譜柱,Bonus-RP空間位阻保護(hù) + 三封端80 ApH: 2~9,Extend-C1880 A & 300 ApH: 2~11.5,Eclipse XDB雙封端,Eclipse XDB-C1880 ApH: 2~9,Eclipse XDB-C880 ApH: 2~9,Eclipse XDB-苯基80 ApH: 2~9,StableBond空間位阻保護(hù),Poroshell 30

28、0SB-C18實心核多孔殼pH: 1~8,SB-CN80 A & 300 ApH: 1~8,SB-C380 A & 300 ApH: 1~8,Zorbax 產(chǎn)品系列,,,SB-AQ空間位阻保護(hù)80 ApH: 1~8,,可使用100%水相,Extend雙齒鍵合+雙封端,低pH,中pH,高pH,安捷倫HPLC色譜柱維護(hù)保養(yǎng),Zorbax色譜柱=高柱效 +長壽命,,,min,,0,,0.5,,1,,1.5

29、,,2,,,Norm.,,0,,10,,20,,30,,40,,50,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,色譜柱: ZORBAX SB-C18 4.6 x 30 mm, 1.8um 流動相: 60% 甲醇: 40 水 流速: 1mL/min 溫度: 室溫檢測: UV 254 nm,柱效進(jìn)樣次數(shù) #3 #41

30、66356138100685763722006882638130068956381400688362945006815631260066876236700665361158006695622190067816300 681063021300 68586528203468236343,1,2,3,4,樣品尿嘧啶 苯酚

31、 4-Cl-硝基苯 甲苯,色譜柱柱內(nèi)體積和平衡時間,單次樣品運行時間 = 分析時間 + 色譜柱平衡時間色譜柱平衡時間 = 10倍柱內(nèi)體積 ÷ 流速,清洗液相色譜柱,沖洗色譜柱---用比流動相更強的溶劑,反相色譜柱用以下溶劑至少各25mL沖洗色譜柱(分析柱) 不含緩沖鹽的流動相100%甲醇100%乙腈75%乙腈+25%異丙醇100%異丙醇100%二氯甲烷 *100%己烷**若使用己烷或二氯甲烷沖洗色

32、譜柱, 則在重新使用反相流動相以前, 必須用異丙醇沖洗色譜柱 !!!,正相色譜柱用以下溶劑至少各50mL沖洗色譜柱(分析柱) 50%甲醇+50%三氯甲烷100%乙酸乙酯,,<0.12mm內(nèi)徑管線用于毛細(xì)管HPLC中<2.1內(nèi)徑色譜柱0.17mm內(nèi)徑管線用于分析型HPLC中2.1~4.6內(nèi)徑色譜柱0.25mm內(nèi)徑管線用于半制備型HPLC中9.4內(nèi)徑色譜柱0. 5mm內(nèi)徑管線用于制備型HPLC中21.2內(nèi)徑色

33、譜柱,連接管線與接頭,色譜柱: StableBond SB-C18, 4.6 x 30 mm, 3.5 mm 流動相: 85% H2O with 0.1% 三氟乙酸 : 15% ACN 流速: 1.0 mL/min 溫度: 35°C,50 mL 柱外體積（管線）,樣品: 1. 苯丙胺酸2. 5-苯基-3, 6-二氧-2-哌嗪乙酸3. Asp-Phe

34、 4. 天冬甜素,HPLC常用的色譜柱接頭,Troubleshooting LC Fittings, Part II. J. W. Dolan and P. Upchurch. LC/GC Magazine 6:788 (1988),,HPLC常用的色譜柱接頭,活塞桿與密封圈,藍(lán)寶石活塞桿 1/包裝部件號：5063-6586活塞桿密封圈（Vespel聚酰亞胺用于反相）2/包裝部件號：5063-6589*己烷

35、對Vespel聚酰亞胺有溶漲作用活塞桿密封圈（聚乙烯用于正相）2/包裝部件號：0905-1420,樣品: 尿嘧啶苯酚N, N-二甲基苯胺,更換前 更換后,塔板數(shù)USP拖尾因子 (5%) 1.36701.452.104571.093.100851.00,活塞桿與密封圈,檢測器用燈,檢測器用燈,檢測器用燈,1. DAD的氘燈替代VWD的

36、氘燈關(guān)閉燈電源, 冷卻5min以上將lamp設(shè)定的VWD configuration的燈類型改為2140-05902. 燈能量測試以水為流動相燈預(yù)熱10min以上在化學(xué)工作站Diagnosis狀態(tài)下進(jìn)行波長校準(zhǔn), 將紫外燈的使用時間歸零,DAD的氘燈替代VWD的氘燈,DAD故障診斷與維護(hù),要進(jìn)行DAD故障診斷, 單擊DAD圖標(biāo), 然后選擇Show Module Test選項, 進(jìn)入DAD測試選項畫面,DAD故障診斷測試共有

37、8項內(nèi)容：DAD Self-TestDAD Intensity TestDAD Cell Test,常做的DAD維護(hù)：更換燈清洗或更換流動池窗,Diagnosis界面故障原因分析,故障選擇框,,可能原因框,,診斷過程故障分析 樣品分析過程中故障分析,在Diagnosis畫面中為用戶提供了在診斷過程或樣品分析過程中出現(xiàn)的問題以及可能的原因,樣品溶劑溶解強度,樣品溶劑溶解能力強于流動相導(dǎo)致色譜峰峰形問題：裂分峰或?qū)挿?,,中性

38、分析時為何要使用緩沖液？,色譜柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8, 4.6 x 75 mm, 3.5 µm 流動相: 44% A : 56% 甲醇流速: 1.0 mL/min 溫度: 25°C 檢測: UV 250 nm,含緩沖液的流動相可改善保留, 分離和色譜峰峰形.,樣品: 1. ketoprofen 2. ethyl paraben 3. hyd

39、rocortisone 4. fenoprofen 5. propyl paraben 6. propranolol 7. ibuprofen,A = pH 7.0水,A = pH 7.0 水+25 mM 磷酸緩沖液,增加緩沖液濃度減少拖尾,色譜柱:ZORBAX Eclipse XDB-C84.6 x 150 mm, 5 mm流動相:40% 磷酸鹽緩沖液60% ACN流速:1.5 mL/min.溫度:

40、40°C,USP Tf1.621.651.631.771.831.12,10 mM 磷酸鹽pH 7.0,USP Tf1.411.501.331.391.361.00,25 mM 磷酸鹽pH 7.0,在中等pH下, 離子強度較高, 能有效掩蔽硅羥基的二次作用減少拖尾,樣品:Tricyclic Antidepressants（三環(huán)抗抑郁劑）1. Desipramine（脫甲丙咪嗪）2. No

41、rtriptyline（去甲替林）3. Doxepin（多塞平）4. Imipramine（丙咪嗪）5. Amitriptyline（阿米替林）6. TrImipramine（三甲丙咪嗪）,,,TEA對堿性成分峰形的影響,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,0

42、 2.5 5.0,Time (min),1,2,3,4,5,色譜柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8, 4.6 x 150 mm, 5 mm 流動相: 85% 25 mM Na2HPO4 : 15% ACN 流速: 1.0 mL/min. 溫度: 35°C,USP TF 5%1.

43、 1.292. 1.333. 1.634. 2.355. 1.57,No TEA,10 mM TEA,USP TF 5%1. 1.192. 1.183. 1.204. 1.265. 1.14,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,pH 7,樣品:1. Phenylpropanolamine （去甲麻黃堿）

44、2. Ephedrine（麻黃素）3. Amphetamine（苯丙胺） 4. MethAmphetamine（脫氧麻黃堿）5. Phenteramine （苯丁胺）,,,競爭酸對酸性組分的峰形的影響,色譜柱:ZORBAX StableBond SB-C184.6 x 150 mm, 5 mm流動相:40% A: 60% ACN流速:1.0 mL/min.溫度:室溫樣品:Ibuprofen（異丁苯

45、丙酸） pKa 4.4,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,pH 35 mM NaH2PO4,Tf = 1.8,pH 35 mM NaH2PO41% 乙酸,pH 2.50.1% 三氟乙酸,Tf = 1.0,Tf = 1.09,A:,乙酸和三氟乙酸均能作為競爭酸填加至流動相中 三氟乙酸由于所需濃度較低, 可作為

46、首選,,,色譜柱技術(shù) – 5988-6467EN流動相對色譜的影響(TE40),液相色譜柱: ZORBAX Eclipse XDB-C8色譜柱尺寸: 4.6 x 50 mm 3.5µm部件號: 935967-906,UV: 254 nm流速: 1 mL/ min.室溫,UracilButylparabenNaphthaleneDipropylphthalateAcenaphthene,尿嘧啶尼帕爾金丁

47、酯萘二丙基鄰苯二甲酸酯苊,刻度混合: Dial-a-Mix A: 水 B: 甲醇, 用泵抽取50% B,體積比混合: Vol/Vol250 mL水 + 250 mL甲醇, 用泵抽取100%混合液,定容混合: Mix-to-Mark 250 mL甲醇, 用水定容至500 mL, 用泵抽取100%混合液,預(yù)混合（重量比混合）: Premixed (w/w) 200 g甲醇 + 200 g水, 用泵抽取100%混合液

48、,改變流動相配比方式, 可增加柱效（提高靈敏度）,液相分析-小訣竅,提高柱溫，可增加柱效（提高靈敏度）減小柱內(nèi)徑，可增加柱效（提高靈敏度）縮短檢測器響應(yīng)時間，可增加柱效（提高靈敏度）減小柱外體積，可增加柱效（提高靈敏度）使用超純硅膠，可增加柱效（提高靈敏度）使用高能量氘燈，可增加柱效（提高靈敏度）使用中孔透光氘燈，可增加柱效（提高靈敏度）改變流動相pH ，可增加柱效（提高靈敏度）改變有機(jī)相% ，可增加柱效（提高靈敏度）

49、改變鍵合相 ，可增加柱效（提高靈敏度）改變有機(jī)添加劑 ，可增加柱效（提高靈敏度）改變流動相配比方式 ，可增加柱效（提高靈敏度）,,生化 –多肽- 5988-6316EN升溫對于反相 HPLC分離強疏水肽的影響 (B27)Polypeptide,流動相: A: 含0.05%三氟乙酸的水B: 含0.05%三氟乙酸的乙腈2% B / min進(jìn)樣量: 100µL (50µg的6M脲/5%乙酸)UV

50、: 210 nm流速: 1 mL/min室溫,液相色譜柱: ZORBAX StableBond-C18色譜柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5µm部件號: 880975-902,室溫300C400C500C600C700C,提高柱溫，可增加柱效（提高靈敏度）,環(huán)保,樣品: 除草劑流動相: 52/48 0.1 M乙酸鈉/甲醇, pH 6流速: 0.45

51、 mL/min溫度: 40℃, 90℃檢測: UV,除草劑: 柱溫的影響Herbicides: Effect of Column Temperature,1. 西瑪津2. 敵草隆3. 撲滅津4. 撲滅凈5. 異丙甲草胺,1. Simazine2. Diuron3. Propazine4. Prometryn5. Metolachlor,液相色譜柱: Zorbax StableBond

52、-C18色譜柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5μm部件號: 883975-902,目錄P625,40℃,90℃,提高柱溫，可增加柱效（提高靈敏度）,生物制藥,液相色譜柱: Zorbax 300 StableBond-C3色譜柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5μm 部件號: 883995-909,肽類/蛋白質(zhì): 升溫對分離的影響Peptides/Proteins: Effect of Elevat

53、ed Temperature,樣品: 多肽 流動相: A = 5: 95, 乙腈 : 水, 0.10%三氟乙酸 (V/V%)B = 95: 5, 乙腈 : 水, 0.085%三氟乙酸 (V/V%)梯度: 在 20 min內(nèi) 15-53%, 后運行時間 12 min流速: l.0 mL/min 溫度: 室溫 -60℃檢測: UV 215 nm,1. 亮氨酸腦啡呔

54、 2. 血管緊張素II 3. 核糖核酸酶A 4. 牛胰島素 5. 細(xì)胞色素C 6. 溶菌酶 7. 肌紅蛋白 8. 碳酸酐酶,1. Leucine Enkephalin2. Angiotensin II3. Rnase A4. Insulin(BOV)5. Cytochrome C6. Lysozyme7. Myoglobin8. Carbonic anhydrase,目錄P611,提高柱溫，

55、可增加柱效（提高靈敏度）,,,,,生物制藥,液相色譜柱: Zorbax StableBond-C8色譜柱尺寸: 150 mm, 5μm,減小毛細(xì)管內(nèi)徑來提高低濃度樣品的檢測靈敏度Reducing Capillary ID to Improve Sensitivityfor Concentration-Limited Samples,流動相: 60%乙腈/40%水流速: 內(nèi)徑 0.3 mm-4 uL/min

56、內(nèi)徑 0.5 mm-10 uL/min內(nèi)徑 1.0 mm-50 uL/min內(nèi)徑 4.6 mm-1.0 uL/min溫度: 室溫檢測器: UV 254 nm樣品: 200 ng聯(lián)二苯 (100 nl),目錄P611,減小柱徑，可增加柱效（提高靈敏度）,色譜柱技術(shù) – 5988-6454EN使用小體積色譜柱對于檢測器響應(yīng)時間的重要性 (TE32),液相色譜柱: ZORBAX Stable

57、Bond-C18色譜柱尺寸: 4.6 x 15 mm 3.5µm部件號: 831975-902,流動相: 乙腈: 1%甲酸=32: 68UV: 254 nm流速: 1.0 mL / min. 30°C進(jìn)樣量: 5 µL,響應(yīng)時間: 4.0秒響應(yīng)時間: 2.0秒響應(yīng)時間: 1.0秒響應(yīng)時間: 0.5秒響應(yīng)時間: 0.1秒,尿嘧啶乙酰水楊酸N-乙酰苯胺,Uraci

58、lAcetylsalicylic acidAcetanilide,縮短檢測器響應(yīng)時間，可增加柱效（提高靈敏度）,色譜柱技術(shù) – 5988-6428EN不同硅膠類型比較 (TE1),流動相: 含0.05%甲醇的二氯甲烷,液相色譜柱,toluenebenzanilidephenolbenzyl alcohol,Zorbax SilSpherisorbZorbax Rx-Sil,甲苯N-苯甲酰

59、苯胺苯酚苯甲醇,使用高純硅膠，可增加柱效（提高靈敏度）,有機(jī)化學(xué)– 5988-6366ENpH對苯胺取代物分析的影響 (ORCH1),流動相25mM磷酸: 甲醇=58: 42 流速: 1 mL/min 22°C,液相色譜柱: ZORBAX StableBond-C18色譜柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5µm部件號: 883975-902,對位甲氧基苯胺間位苯甲胺3-氨基-苯甲腈對位氯

60、苯胺間位氯苯胺鄰位氯苯胺,p-anisidinem-toluidine3-amino-benzonitrilep-chloroanilinem-chloroanilineo-chloroaniline,pH: 2.5pH: 7.0,改變流動相pH，可增加柱效（提高靈敏度）,,生化 –肽– 5988-6293EN三氟乙酸濃度對于反相肽的分離的影響 (B10)Peptide,流動相:

61、A: 水和三氟乙酸B: 乙腈和三氟乙酸0 - 30% B （30 min.內(nèi)）流速: 1 mL/minUV: 254 nm進(jìn)樣量: 6uL十肽菌素標(biāo)樣S1-S5（疏水性有略微差異）40°C,液相色譜柱: ZORBAX 300 SB-C8色譜柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5µm部件號: 883995-906,1.0%三氟乙酸,0.05%三氟乙酸,0.25%三氟乙酸,改變流動相pH，可增加

62、柱效（提高靈敏度）,食品分析– 5988-6360EN流動相強度對單糖和二糖分離的影響 (FD4),流動相: 乙腈/水如圖流速: 1 mL/min示差折光檢測器,液相色譜柱: ZORBAX NH2 色譜柱尺寸: 4.6 x 250 mm 5µm部件號: 880952-708,果糖葡糖蔗糖Palatinose海藻糖異麥芽糖,FructoseGlucoseSaccharosePalatinose

63、TrehaluloseIsomaltose,乙腈/水70/30乙腈/水75/25,改變有機(jī)相%，可增加柱效（提高靈敏度）,色譜柱技術(shù) – 5988-6468EN有機(jī)改性劑和pH對于選擇性的影響 (TE5),流動相: 25 mM磷酸緩沖液流速: 1.0 mL/min.22°C,液相色譜柱: ZORBAX StableBond-CN色譜柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5µ

64、m部件號: 883975-905,anisidinem-toluidine4-cl-aniline3-aminobenzonitrile3-cl-aniline2-cl-aniline,甲氧基苯胺間位苯甲胺4-氯-苯胺3-氨基苯甲腈3-氯-苯胺2-氯-苯胺,42%甲醇 ：58%緩沖液 30%甲醇 ：70%緩沖液,pH 2.6,pH 3.0,改變有機(jī)相%，可增加柱效（提高靈敏度）,色譜柱技術(shù) – 5988-6

65、453ENZORBAX Eclipse系列色譜柱的選擇性 (TE31),液相色譜柱: ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl色譜柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5µm部件號: 993967-912,流動相: 甲醇 : 水=70: 30UV: 254 nm流速: 1.0 mL / min.室溫,Zorbax Eclipse XDB-苯基Zorbax Eclipse XDB-C8

66、Zorbax Eclipse XDB-C18,尿嘧啶苯酚4-氯-硝基苯甲苯萘,UracilPhenol4-Cl-nitrobenzeneTolueneNaphthalene,改變鍵合相，可增加柱效（提高靈敏度）,生物制藥,液相色譜柱: Zorbax Extend-C18色譜柱尺寸: 2.1 x 150 mm, 5um部件號: 773700-902,三氟乙酸和氫氧化銨用于肽類RP-HPLC\ESI-MS分

67、離的選擇性比較Selectivity Comparison of TFA and NH4OH for Peptide RP-HPLC\ESI-MS Analysis,流速: 0.25 mL/min. 溫度: 25℃ 梯度: 5-60% B in 20 min.LC/MS: 正離子, ESI- Vf 70V, Vcap 4.5 kV, N2- 35 psi, 12 L/min., 300℃樣品:

68、4μL (各50 ng),三氟乙酸條件: A- 0.1%三氟乙酸水溶液B-0.085%三氟乙酸 80%的乙腈溶液,NH4OH條件: A- 20 mM NH4OH水溶液B- 20 mM NH4OH 80%的乙腈溶液,目錄P613,改變有機(jī)添加劑，可增加柱效（提高靈敏度）,,生化 – 肽 –十肽菌素 – 5988-6299EN酸對于反相肽的分離的影響(B16)decapeptide,流動相: A: 含相應(yīng)的酸的水

69、相 B: 含相應(yīng)的酸的乙腈 0%-30% B（30 min.內(nèi)）進(jìn)樣量: 6µL肽標(biāo)樣UV: 254 nm流速: 1 mL/min40°C,液相色譜柱: ZORBAX 300 SB-C8 色譜柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5µm部件號: 883995-906,十肽菌素 S1十肽菌素 S2十肽菌素 S3十肽菌素 S4十肽菌素 S5,decapeptide S1