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1、實(shí)驗(yàn)10柱色譜分離實(shí)驗(yàn)報(bào)告亞甲基藍(lán)與熒光黃的分離一實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊粚?shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)并掌握色譜法的原理及其應(yīng)用。?學(xué)習(xí)并掌握柱色譜的實(shí)驗(yàn)操作技能。二實(shí)驗(yàn)原理二實(shí)驗(yàn)原理色譜法亦稱色層法,層析法等,是分離,純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一。色譜法的基本原理是利用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能(即分配)的不同,或其它親和作用性能的差異,混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì),進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配等作用,從而將各組分分開。色譜分離法的分類色譜分離法的分類(
2、按操作條件的不同)(按操作條件的不同)當(dāng)加入的洗脫劑流下時(shí),由于不同化合物吸附能力不同,因而以不同的速度沿柱向下流動(dòng),繼續(xù)洗脫時(shí),吸附能力弱的組分隨溶劑首先流出。在連續(xù)洗脫過程中,不同組分或不同色帶就能分別收集,從而達(dá)到分離純化的目的。1吸附劑常用的吸附劑:氧化鋁,硅膠,氧化鎂,碳酸鈣,活性炭或纖維素粉。選擇吸附劑的首要條件:不與被分離物或展開劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。吸附能力與以下幾點(diǎn)有關(guān):(1)吸附劑顆粒大小(2)吸附劑含水量柱色譜柱色譜2溶
3、劑通常根據(jù)被分離物中各組分的極性、溶解度和吸附活性等來考慮。先將帶分離的樣品溶于盡量少的非極性溶劑中,從柱頂流入柱中,依次增大溶劑的極性,將不同化合物依次洗脫。常用洗脫劑的極性:石油醚<環(huán)己烷<四氯化碳<甲苯<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水<乙酸三實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)三實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)(1)取一支色譜柱,在柱子的收縮部塞一小團(tuán)脫脂棉花,注意松緊要適度。然后在棉花上鋪一層粗硅膠或石英砂。(2)將色譜柱垂直固定在鐵
4、架臺(tái)上,往柱內(nèi)加適量70%乙醇溶液,打開活塞,趕走氣泡。(3)再向柱中倒入適量70%乙醇溶液,打開活塞,控制滴速為1滴/秒,用小錐型瓶承接,同時(shí)通過漏斗慢慢裝入5gAl2O3,使其逐漸沉入底部。【在裝吸附劑的過程中,應(yīng)用質(zhì)軟的物體如試管夾、吸耳球等輕輕敲擊柱身,促使吸附劑裝填緊密,排除氣泡。最終應(yīng)使吸附劑的上端平整,無凹凸面?!浚?)加完吸附劑后,在吸附劑上再蓋一張直徑大小合適的小濾紙。(5)當(dāng)溶劑的液面剛好流至濾紙面時(shí)關(guān)閉二通活塞,立
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