2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、牛結(jié)核病防控進展,中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 毛開榮13621394758Email:maokairong@ivdc.gov.cn,牛結(jié)核病,,人型菌,牛型菌,人,犬,貓,牛,馬,羊,豬,雞,,,,,,,,,,,,,,,病原-致病性結(jié)核分枝桿菌屬,人型菌 & 牛型菌基因水平上99.95%同源感染譜相互交叉10%結(jié)核病人感染牛型菌人型菌可感染牛,(Chen, 2009),,,,,,,,結(jié)核病防治的新挑戰(zhàn)?人 -牛,除非

2、撲滅牛結(jié)核病,否則人類結(jié)核病的控制是不會成功的。 ——世界衛(wèi)生組織第七次專家委員會報告,牛結(jié)核是可以控制的,美國1917年開始根除計劃,用約50年宣布根除牛的牛結(jié)核,但野生動物依然存在感染英國每年約花費7000多萬英鎊控制牛結(jié)核澳大利亞1970至1997年歷時27年根除牛結(jié)核控制牛結(jié)核需要科學(xué)的方法加長期的規(guī)劃根除牛結(jié)核則需國家大量的投入,1. 流行病學(xué),傳染原:開放性結(jié)核病牛是主要的傳染源 引起牛結(jié)核病原

3、牛分枝桿菌、結(jié)核分枝桿菌。引起(人)結(jié)核病原結(jié)核分枝桿菌、牛型結(jié)核桿菌其他動物結(jié)核病原靈長類與人相似其他哺乳動物與牛相似、禽類以禽型結(jié)核桿菌為主,《伯杰細菌學(xué)鑒定手冊》,分枝桿菌屬為2 大類: 緩慢生長分枝桿菌快速生長分枝桿菌(通常不致?。?快速生長分枝桿菌( NTM ),目前發(fā)現(xiàn)NTM有150多種,僅20余種致病。代表性菌種為日內(nèi)瓦分枝桿菌致HIV/AIDS發(fā)生播散型NTM病,并迅速致死。I群一光產(chǎn)色分枝桿菌代表

4、性菌種有:堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌、猿猴分枝桿菌。Ⅱ群一暗產(chǎn)色分枝桿菌代表性菌種有:瘰疬分枝桿菌、戈登分枝桿菌、蟾蜍分枝桿菌、蘇加分枝桿菌。Ⅲ群一不產(chǎn)色分枝桿菌代表性菌種有鳥一胞內(nèi)復(fù)合體分枝桿菌、瑪爾摩分枝桿菌、潰瘍分枝桿菌、土地分枝桿菌、嗜血分枝桿菌。Ⅳ群—快速生長分枝桿菌代表性菌種有:偶然分枝桿菌、龜分枝桿菌、膿腫分枝桿菌。,緩慢生長分枝桿菌,結(jié)核分枝桿菌復(fù)合物(或群) 結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌非洲分枝桿菌田鼠分

5、枝桿菌麻風(fēng)分枝桿菌 禽結(jié)核分枝桿菌副結(jié)核分枝桿菌……,宿主,牛分枝桿菌主要引起牛結(jié)核病。也引起人類結(jié)核病。有5%~ 10% 以上的人結(jié)核是由牛分枝桿菌引起。還可感染牛、豬、人、鹿和大象等50 種溫血脊椎動物。 20 多種禽類。結(jié)核分枝桿菌主要引起人類結(jié)核病, 參考菌株為H37Rv;田鼠分枝桿菌引起鼠類結(jié)核病; 非洲分枝桿菌引起人類結(jié)核病。,主要感染途徑為呼吸道和消化道。相對來說,成年牛易經(jīng)呼吸道感染,而青年牛

6、易經(jīng)消化道感染。呼吸道感染主要由帶菌塵?;驓馊苣z所造成。消化道感染則常因飼草、飼料被污染。犢牛感染主要是吮吸帶菌的乳汁造成的。此外,也可通過交配感染。,傳染途徑,易感動物,牛人、豬、鹿和大象等50 種溫血脊椎動物。20 多種禽類。,影響因素,飼養(yǎng)管理不良,使役過度,與牛結(jié)核病的傳染有密切關(guān)系。特別是牛舍過于擁擠,通風(fēng)不良,潮濕,光線不好,是造成本病擴散的重要因素。飼料配比不當(dāng)、飼料中缺乏維生素和礦物質(zhì)等,均可促進本病的發(fā)

7、生。,牛結(jié)核的分布,廣泛流行于世界各地尤以奶牛業(yè)發(fā)達國家為嚴(yán)重。地區(qū)流行或散發(fā)流行,2012年全球牛結(jié)核分布,,診斷,1. 流行病學(xué)2. 癥狀 3. 病理變化4. 檢測病原免疫學(xué)試驗,結(jié)核病檢測,膠體金,γ-干擾素,ELISA,PPD皮試,免疫學(xué)診斷,分子生物學(xué),體液免疫,細菌學(xué)診斷,,,,,,細胞免疫,,,,,2.癥狀,,,消瘦,臨床癥狀只能提示但不能確定該病。牛型結(jié)核分枝桿菌感染初期或輕度感染時,可能不出現(xiàn)

8、臨床癥狀。通常呈慢性經(jīng)過,病初癥狀不明顯,患病較久,由于患病器官不同,癥狀亦不一致。,癥狀,潛伏期,活動期,16-45d長者達數(shù)月,甚至數(shù)年、終生,無明顯癥狀不發(fā)病,肺結(jié)核,肺外結(jié)核,,,咳嗽病牛常發(fā)肺結(jié)核,易疲勞,常有短而干的咳嗽,尤其當(dāng)起立、運動、吸入冷空氣或塵埃時隨后咳嗽加重,頻繁且表現(xiàn)痛苦。呼吸次數(shù)增多或發(fā)生氣喘。消瘦消瘦,貧血,有的牛肩前、股前、腹股溝、頜下、咽及頸淋巴結(jié)等體表淋巴結(jié)腫大。當(dāng)縱膈淋巴結(jié)受侵害腫大,

9、壓迫食道,則有慢性脹氣癥狀。病勢惡化,可能發(fā)生全身性結(jié)核,即粟粒性結(jié)核。胸膜、腹膜發(fā)生結(jié)核病灶時呈現(xiàn)所謂的“珍珠病”,胸部聽診可聽到摩擦音。,乳房感染多數(shù)病牛乳房常被感染侵害,可見乳房上淋巴結(jié)腫大無熱無痛,泌乳量減少,乳汁初期無變化,病重時呈水樣稀薄。頑固性下痢腸道結(jié)核多見于犢牛,可表現(xiàn)為消化不良,食欲不振,頑固性下痢,迅速消瘦。,性機能紊亂生殖器官結(jié)核可出現(xiàn)性機能紊亂,發(fā)情頻繁且表現(xiàn)性欲亢進,慕雄狂與不孕。孕畜流產(chǎn),公畜副睪及

10、睪丸腫大,陰莖前部可發(fā)生結(jié)節(jié)、糜爛等。神經(jīng)癥狀中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要是腦及腦膜發(fā)生結(jié)核病變,常引起神經(jīng)癥狀,如癲癇樣發(fā)作、運動障礙等。,禽型結(jié)核分枝桿菌感染可能無臨床癥狀,但亦可能出現(xiàn)昏睡和消瘦。在應(yīng)激條件下,可能發(fā)生突然死亡,這往往與嚴(yán)重的肝臟病變有關(guān),象這樣的病變在死后解剖時容易觀察到。禽型結(jié)核分枝桿菌能引起人的一種漸進性的難以治療的疾病。因此所有操作均須在有充分生物防護裝置的條件下進行。,人型結(jié)核分枝桿菌感染除靈長類動物會出現(xiàn)

11、咳嗽等癥狀外,其他動物一般無明顯臨床癥狀。,3. 病理變化,牛型結(jié)核分枝桿菌感染病變可發(fā)生在所有內(nèi)臟器管最常見的是肺、胸膜、腸系膜淋巴結(jié)。感染早期,可在肺門部位及肺門淋巴結(jié)見到干酪樣壞死或鈣化的病灶。感染中后期,可在胸膜、胸腔見到“珍珠狀”增生,形成所謂的“珍珠胸”。在腸系膜可見到串珠狀淋巴結(jié)腫大。,分枝桿菌培養(yǎng)鑒定,實驗流程1、染色鏡檢確定是否是抗酸菌的培養(yǎng)陽性菌株2、確定該菌株屬于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群還是NTM首

12、先經(jīng)對硝基苯甲酸 (PNB)生長試驗、28℃生長試驗、耐熱觸酶試驗、觀察記錄細菌的生長速度、菌落形態(tài)和菌落顏色確定該菌株屬于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群還是NTM。3、確定該菌株屬于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群什么型進行TCH生長試驗、硝酸還原試驗和煙酸試驗進行菌種鑒定。,結(jié)核菌素反應(yīng)與病變,牛結(jié)核菌素陽性反應(yīng),但剖檢時找不到病變。當(dāng)牛結(jié)核病在牛群中嚴(yán)重流行時,遇到這種情況不多。但對于牛結(jié)核病清凈的牛群,這種情況就比較常見了。無

13、病變的牛結(jié)核菌素陽性反應(yīng)是不是完全屬于非特異性反應(yīng)?這種情況很難作出明確診斷,因為有些牛雖然感染牛型結(jié)核分枝桿菌,但病變很少或不明顯,解剖時不易發(fā)現(xiàn),有的感染牛沒有任何病變。,病原分離及鑒定,病料淋巴結(jié)痰乳精液子宮分泌物尿和糞便,病原檢測,染色鏡檢培養(yǎng)特性動物試驗生化試驗分子生物學(xué)診斷,染色鏡檢,涂片先在玻片上涂布一層薄甘油蛋白,甘油蛋白的配制:雞蛋白20mL,甘油20mL,水楊酸鈉0.4g,混勻。如檢驗標(biāo)本

14、為乳汁等含脂肪較多的材料,在涂片制成后,用二甲苯或乙醚脫脂1-2分鐘后傾去,再滴加95%酒精以除去二甲苯,待酒精揮發(fā)后即可染色。然后吸取標(biāo)本滴加其上,涂布均勻。,萋-尼氏抗酸染色,涂片后,經(jīng)火焰固定加石炭酸復(fù)紅染色液用100mL 95%酒精加3g堿性復(fù)紅配制成堿性復(fù)紅飽和酒精溶液,取堿性復(fù)紅飽和酒精溶液10mL,與5%苯酚溶液90mL混合后用濾紙濾過將玻片在火焰上加熱至出現(xiàn)蒸汽(不能產(chǎn)生氣泡),如此熱染5分鐘(如染色液干涸,須加

15、適量補充)。水洗后滴加3%鹽酸酒精脫色30-60秒(至無色素脫下為止)濃鹽酸3mL,95%酒精97mL,混勻。水洗后,以駱氏美蘭染色液復(fù)染1分鐘。甲液:美蘭0.3g,95%酒精30mL。乙液:0.01%氫氧化鉀溶液100mL?;旌霞闯伤矗桑R檢。抗酸菌應(yīng)不被鹽酸酒精脫色而染成紅色,其他細菌與動物細胞可被鹽酸酒精脫色而均被染成蘭色。,菌體形態(tài),牛結(jié)核分枝桿菌呈細長平直或微彎曲的桿菌,長1.5-5微米,寬0.2-0.5微米

16、.在陳舊培養(yǎng)基上或干酪性淋巴結(jié)內(nèi)的菌體,偶而可見長達10微米或更長,培養(yǎng),將經(jīng)過處理的被檢樣品標(biāo)本接種到培養(yǎng)基上(同時作2-4份)培養(yǎng)一天后,以熔化的石蠟封口,繼續(xù)培養(yǎng)。 牛型結(jié)核分枝桿菌生長緩慢,初次分離培養(yǎng)時,需36-37℃培養(yǎng)5-8周方可出現(xiàn)菌落。在固體培養(yǎng)基上不產(chǎn)生任何顏色,菌落濕潤、略顯粗糙并發(fā)脆。加1%的丙酮酸鈉能促進生長。若是非典型分枝桿菌,則生長較快,大部分(但不是全部)產(chǎn)生白色或具有橙色或黃色色素,常

17、形成黃色或橙色菌落。某些種類的色素只有在亮處才顯出。,BACTEC培養(yǎng)法,利用放射性測定技術(shù)與培養(yǎng)技術(shù)相結(jié)合的一種技術(shù)。BACTEC培養(yǎng)法商品盒試劑。本方法的優(yōu)點是:比標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法檢測到的菌量更低,培養(yǎng)時間更短(只需2~8周左右)。本法的缺點是:費用高,需專用儀器,需防止放射性污染。,用動物分離,豚鼠和家兔對牛型結(jié)核分枝桿菌敏感,雞對牛型結(jié)核分枝桿菌不敏感。處理過的病料,皮下或肌肉、腹腔內(nèi)注射接種后30天左右,進行禽型提純結(jié)核菌

18、素和牛型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗如有陽性反應(yīng),可剖檢其中的半數(shù)動物進行病理學(xué)觀察、細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢。另一半繼續(xù)觀察至3個月再剖檢觀察。如果為陰性反應(yīng),可于40天左右剖檢其中的半數(shù),觀察病理學(xué)變化、細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢,另一半繼續(xù)觀察至3個月再剖檢觀察。,牛型、禽型和人型結(jié)核分枝桿菌鑒定,動物試驗,牛型、禽型和人型結(jié)核分枝桿菌鑒定,生化試驗:,分子生物學(xué)診斷,DNA針擴增從臨床樣品提取的靶序列,是來自熱休克基因,大小為402堿基

19、對(bp)片段,336bp和123bp為重復(fù)片段,或者單獨插入對結(jié)核分枝桿菌特異的IS986、ISl081序列。PCR報道PCR能區(qū)別結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌。在實際應(yīng)用中,需要進一步評價其特異性,特別是敏感性。擴增片段可以看得見,可用生物素或地高辛代替同位素進行標(biāo)記。,免疫學(xué)試驗,結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗全血試驗 淋巴細胞增生試驗、Υ-干擾素試驗 血清學(xué)試驗ELISA、膠體金,結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗,用結(jié)核菌素進行的皮

20、內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗是檢查牛結(jié)核病主要方法。亦是OIE指定國際貿(mào)易用檢測試驗。試驗分2種,一種是牛型結(jié)核菌素單一試驗,僅用牛型提純結(jié)核菌素進行,目的是檢測是否存在牛型結(jié)核分枝桿菌的感染。另一種是結(jié)核菌素比較試驗,用牛型提純結(jié)核菌素和禽型提純結(jié)核菌素同時進行,這是一種鑒別診斷試驗,用以明確是牛型結(jié)核分枝桿菌感染,還是禽型或副結(jié)核分枝桿菌或其他分枝桿菌感染。,PPD皮試操作流程,皮試工具,判定標(biāo)準(zhǔn),結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)的特點,世界動物衛(wèi)生組織OI

21、E迄今為止唯一推薦的牛結(jié)核病的診斷方法非特異性反應(yīng)重癥牛敏感性低操作復(fù)雜煩瑣結(jié)果判斷主觀性大,皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)比較試驗,本試驗采用牛型提純結(jié)核菌素和禽型提純結(jié)核菌素同時進行。操作方法:在牛頸中部選2個點,一個在上1/3處一個在下1/3處。2個點之間的距離不得少于10cm。注射點及周圍的皮膚應(yīng)無異常。禽型提純結(jié)核菌素的注射劑量為每頭0.1ml,含0.25萬IU。即將禽型提純結(jié)核菌素稀釋成每毫升含2.5萬IU后,皮內(nèi)注射0.1毫升

22、。牛型提純結(jié)核菌素的注射劑量為每頭0.1ml,含0.20~0.5萬IU。即將牛型提純結(jié)核菌素稀釋成每毫升含2.0~5.0萬IU后,皮內(nèi)注射0.1毫升。,結(jié)果判定a)牛型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性。對牛型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)為陽性(局部有明顯的炎性反應(yīng),皮厚差大于或等于4.0 mm),并且對牛型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)大于對禽型提純結(jié)核菌素的反應(yīng),二者皮差在2.0 mm以上,判為陽性。對已經(jīng)定性為牛型結(jié)核分枝桿菌感染的牛群。其中即使

23、少數(shù)牛的皮差在2.0 mm以下,甚至對牛型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)略小于對禽型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)(反應(yīng)差小于或等于2.0 mm),只要對牛型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)在2.0 mm以上,也應(yīng)判定為牛型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性牛。,b)禽型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性。 對禽型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)大于對牛型提純結(jié)核菌素的反應(yīng),兩者的皮差在2.0 mm以上,判為禽型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性。對已經(jīng)定性為副結(jié)核分枝桿菌或禽型結(jié)核分枝桿

24、菌感染的牛群。其中即使少數(shù)牛的皮差在2.0 mm以下,甚至對禽型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)略小于對牛型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)(不超過2.0 mm),只要對禽型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)在2.0 mm以上,也應(yīng)判為禽型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗陽性牛。,全血試驗,除了傳統(tǒng)的結(jié)核菌素試驗方法外,現(xiàn)有了一些新的血液診斷試驗方法。淋巴細胞增生試驗原理測定全血樣品中致敏淋巴細胞對結(jié)核菌素PPD抗原的細胞反應(yīng)性。這種試驗具有科學(xué)價值,但在常規(guī)診斷中并不采用,

25、因為試驗耗時,而且前期準(zhǔn)備以及試驗操作都比較復(fù)雜(需要較長的孵育期,并使用放射性核甙酸)。然而,這種試驗可用于野生動物以及動物園動物的檢測.,r干擾素試驗本試驗是測定全血培養(yǎng)系統(tǒng)中淋巴因子的釋放原理有特異性抗原(PPD--結(jié)核菌素)培育16—24小時培育期間內(nèi),致敏淋巴細胞釋放出r干擾素。用對牛r干擾素的兩種MAb,作夾心ELISA法。 單抗1 單抗1+干擾素 單抗1+干擾素+單

26、抗2,,,,,,,,,,,,,,,IFN-?檢測方法,IFN-?釋放檢測特點,高特異性,高敏感性 外周血,24h出結(jié)果 比TST更貴,采血后在12小時內(nèi)檢測 Bovi?TB IFN-gamma kit 目前發(fā)達國家均以該方法輔助進行結(jié)核病根除計劃樣品不能存放,在8小時內(nèi)進行。此外,這種方法僅適用于??苿游?。,尾靜脈采血,方便快速 一般不需要保定減小應(yīng)激,尾靜脈采血方法,牛尾靜脈位于尾椎腹側(cè)正中的脈管溝內(nèi)左手抓住

27、尾巴垂直上舉,右手用鑷子取5%碘酒棉球在尾根1 /2~1 /3處(離尾根處7-15cm)進行消毒手持9號采血器,順血管斜角刺入,見有血液回流,即可外拉針芯使血液流入采血器采血完畢,局部消毒適當(dāng)按壓,結(jié)核菌的細胞免疫與體液免疫規(guī)律,90%結(jié)核菌感染者不發(fā)病細胞免疫和體液免疫分離早期發(fā)生細胞免疫病程后期體液免疫增加,牛結(jié)核病特異抗體檢測方法,ELISA方法膠體金方法Rv3872CFP10ESAT6MPB70MPB83

28、,牛結(jié)核特異抗體檢測,檢測針對特異抗原(單個或多個)的抗體抗體消長規(guī)律復(fù)雜!總體而言抗體水平與病程發(fā)展成正比抗體針對的抗原,抗體類型,抗體水平因個體而異,因時而異方法敏感性低多抗原聯(lián)合使用及與TST聯(lián)合使用可顯著提高檢出率,防制,5個方面 1.監(jiān)測2.檢疫3.公共衛(wèi)生4.封閉與消毒5.規(guī)范管理,1.監(jiān)測一年2次變態(tài)反應(yīng)。或者2次r干擾素試驗。2.檢疫出入動物必須檢疫,隔離2個月左右, 2次變態(tài)反應(yīng)。3.公共衛(wèi)

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