新編芎冰滴丸的藥學(xué)研究

1、芎冰滴丸的藥學(xué)研究,研究生姓名：888指導(dǎo)教師：888888888888,1引言 1.1選題目的,偏頭痛在祖國醫(yī)學(xué)中屬于“頭風(fēng)”、“腦風(fēng)”、“偏頭風(fēng)”范疇，是一種特殊類型的發(fā)作性顱內(nèi)外血管運動和神經(jīng)功能失調(diào)引起的慢性復(fù)發(fā)性疾病，主要表現(xiàn)為一側(cè)或雙側(cè)頭部搏動性疼痛，并伴有惡心嘔吐等植物神經(jīng)癥狀。偏頭痛發(fā)病率較高，且反復(fù)發(fā)作、難以治愈，影響患者的正常生活和工作，所以治療該病一直是中醫(yī)學(xué)界的重要研究課題之一。,目前，中醫(yī)大多在辨證論治的基

2、礎(chǔ)上進(jìn)行治療，取得了較好的療效，但普通劑型難于適應(yīng)現(xiàn)代社會人們較快的生活節(jié)奏。選擇川芎揮發(fā)油和冰片配伍組方，通過對該處方制劑工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及體外評價的研究，以期為臨床提供一種療效確切、服用方便的中藥復(fù)方滴丸制劑，能迅速緩解疼痛，減輕患者痛苦，更好地為人類健康服務(wù)。同時，通過對川芎揮發(fā)油及其新劑型的研究，使川芎的系列產(chǎn)品能達(dá)到整合資源，綜合利用的目的。,,,1.2選題意義1.2.1臨床需要,偏頭痛是一種臨床常見的多發(fā)病，因本病發(fā)病率較

3、高，且反復(fù)發(fā)作，遷延難愈，疼痛劇烈，往往給患者帶來極大痛苦，嚴(yán)重影響其日常生活與工作，因而找尋對偏頭痛行之有效的防治方法是一項重要的課題。,1.2.2市場需要,近三年來，中成藥治療偏頭痛的研究有了新的發(fā)展。但很多品種開發(fā)時間較早，不時有副作用發(fā)生的報道，在臨床上的應(yīng)用受到一定的限制。本課題采用川芎揮發(fā)油和冰片所制的芎冰滴丸具有起效快、服用劑量小的優(yōu)點，可適應(yīng)臨床長期多次用藥的要求，具有良好的市場開發(fā)前景。,1.2.3中藥制劑現(xiàn)代化的需

4、要,滴丸是由藥物與基質(zhì)加熱熔化后，滴入不相混溶的冷卻液中，收縮冷凝成丸的一種速效劑型，具有表面積大、溶出速度快、胃腸刺激小、服用方便等優(yōu)點。它可提高難溶性藥物的生物利用度，還能容納較多的液體，故易于使液體藥物轉(zhuǎn)變成固體制劑。針對本課題的目的，確定選用固體分散技術(shù)將川芎揮發(fā)油與冰片制成滴丸的形式。發(fā)揮速效作用，以適應(yīng)中醫(yī)急癥治療的需要。,,1.3選題依據(jù)1.3.1中醫(yī)藥對于偏頭痛病因病機(jī)的認(rèn)識,歷代醫(yī)家關(guān)于偏頭痛的病因病機(jī)論述頗多，多

5、數(shù)學(xué)者認(rèn)為風(fēng)、火、痰、瘀是致病的重要因素。風(fēng)寒侵襲、脈絡(luò)瘀阻；情志不遂、氣滯血瘀；脾失健運、痰濁阻竅；肝腎陰虛、肝火上擾為其病機(jī)。氣血陰虧，腦竅失養(yǎng)也是發(fā)病的一個關(guān)鍵。由此可以看出，偏頭痛的發(fā)病常為虛實挾雜，即有風(fēng)、火、痰、瘀作為致病要因，又有氣虛、血虧、肝腎不足作為內(nèi)在病理基礎(chǔ)。偏頭痛的病因雖有種種不同，但其發(fā)病機(jī)理確有共同之處，即所謂“不通則痛”，但其程度及性質(zhì)上又各有其特征和差異，這為臨床辨證論治提供了依據(jù)。根據(jù)以上分析，確定

6、本處方主治從外感風(fēng)邪、腦絡(luò)瘀阻型偏頭痛著手。,1.3.2處方來源、組成及分析1.3.2.1處方來源,川芎味薄氣雄，性善疏通，其祛風(fēng)散寒止痛、理氣活血通絡(luò)之功頗佳，又秉升散之性，能上行頭目，下行血海，為治諸經(jīng)頭痛之要藥。通過配伍，可用于風(fēng)寒、風(fēng)熱、風(fēng)濕、血瘀、血虛等各種頭痛。以其為主藥，治療病久風(fēng)寒入絡(luò)、寒凝血瘀之頑固性的偏正頭痛和三叉神經(jīng)痛，更能起到意想不到的療效。冰片味辛、苦，微寒，歸心、脾、肺經(jīng)?！侗静菥V目》記載：冰片具“通諸竅

7、、散郁火”之功。中醫(yī)理論認(rèn)為，冰片“芳香走竄”，“獨行則勢弱、佐使則有功”。冰片與川芎配伍可明顯減輕缺血再灌注腦組織含水量和細(xì)胞間質(zhì)水腫和神經(jīng)細(xì)胞的損傷，對腦缺血再灌注所致腦組織超微結(jié)構(gòu)的破壞也有明顯的保護(hù)作用。,兩者配伍使用才能增強(qiáng)川芎對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。故確定了本課題的處方藥物為川芎和冰片，由于川芎揮發(fā)油體現(xiàn)了川芎辛溫芳香的性味，同時有類似川芎的祛風(fēng)活血止痛之功效，故最終確定了制劑處方為：川芎揮發(fā)油、冰片。,1.3.3處

8、方中藥物的現(xiàn)代研究情況,1.3.3.1川芎現(xiàn)代藥理研究證明川芎揮發(fā)油中的藁本內(nèi)酯可抑制血管平滑肌收縮，降低血壓，具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解痙、抗驚厥等作用，被認(rèn)為是治療偏頭痛的物質(zhì)基礎(chǔ)。1.3.3.2冰片冰片含有龍腦和異龍腦。它在胃腸道吸收迅速，極易透過血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)，同時冰片可開放血腦屏障，促進(jìn)某些水溶性大分子物質(zhì)和藥物透過血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)。（為具有“佐使之功”的物質(zhì)基礎(chǔ)？）藥理作用方式可能與通過調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量達(dá)

9、到穩(wěn)態(tài)平衡有關(guān)。,,1.4研究總體思路,以傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，根據(jù)川芎揮發(fā)油和冰片主要有效成分的理化性質(zhì)和藥理作用，借鑒現(xiàn)代制劑成熟的研究方法、技術(shù)、思路與手段，進(jìn)行中藥復(fù)方滴丸的研制。其研究技術(shù)路線見下圖。,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),穩(wěn)定性,成品,,,,,,,,,2正文2.1川芎揮發(fā)油的提取工藝研究,川芎揮發(fā)油是治療頭痛的主要有效成分，而川芎揮發(fā)油中主要含有川芎總酞內(nèi)酯類成分，這些成分的含量占藥材的1%～3%左右。川芎總酞內(nèi)酯類成分中以藁本內(nèi)酯和

10、川芎內(nèi)酯為主，藁本內(nèi)酯的含量可達(dá)50%左右，因此在對川芎揮發(fā)油進(jìn)行提取工藝研究過程中以揮發(fā)油得率和藁本內(nèi)酯的含量為指標(biāo)，考察了共水蒸餾法、重蒸餾法、石油醚提取法、乙醇提取法等幾種方法，以期找到一種提取效率高、且藁本內(nèi)酯含量高的提取方法。,2.1.2實驗方法與結(jié)果2.1.2.1藥材產(chǎn)地的確定,川芎是四川的道地藥材，近年來，國內(nèi)許多地區(qū)都開展了川芎生長、撫育及引種技術(shù)的研究，造成了川芎藥材質(zhì)量參差不齊的現(xiàn)狀，為了保證成品質(zhì)量的穩(wěn)定性和均一

11、性，對不同產(chǎn)地的川芎提取的揮發(fā)油的含量進(jìn)行了測定，以確定最佳的產(chǎn)地。采用《中國藥典》2019年版一部附錄XD揮發(fā)油測定法第二法進(jìn)行測定。結(jié)果見表1。,表1 不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)油含量測定結(jié)果,根據(jù)上述測定結(jié)果，都江堰產(chǎn)地川芎藥材中揮發(fā)油含量相對于崇州和彭州更高，故選擇都江堰川芎作為實驗用藥材。,2.1.2.2揮發(fā)油提取方法的比較研究,（1）提取方法 ①共水蒸餾法 ②重蒸餾法 ③石油醚提取法 ④乙醇提取法（2

12、）實驗結(jié)果 對不同提取方法所得的揮發(fā)油品質(zhì)進(jìn)行比較，結(jié)果見表2。,表2 不同提取方法所得揮發(fā)油的比較結(jié)果,上述試驗結(jié)果表明，采用共水蒸餾所得揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯含量最高，而有機(jī)溶劑等提取法純度過低且有溶劑殘留等問題，故選擇共水蒸餾法進(jìn)行提取。,2.1.2.3共水蒸餾法提取川芎揮發(fā)油最佳工藝的確定,以揮發(fā)油得率和藁本內(nèi)酯含量為指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗對川芎揮發(fā)油提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)選，為川芎揮發(fā)油的進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。（1

13、）實驗方法根據(jù)影響揮發(fā)油提取的因素，選取浸泡時間（A）、提取時間（B）、加水量（C）作為考察因素，每個因素選擇3個水平，以揮發(fā)油的得率和藁本內(nèi)酯含量為考察指標(biāo)，設(shè)計L9（34）正交試驗。因素水平表見表3，試驗結(jié)果及分析見表4和表5。,表3 因素水平表,表4 正交試驗設(shè)計及結(jié)果,表5 方差分析表,從以上方差分析結(jié)果可以看出：A因素有顯著的影響，影響因素A＞B＞C；且A3、B1、C1為佳，即最佳工藝為：加8倍量的水，浸泡18小時，共水蒸

14、餾提取6小時。,（3）驗證實驗 為了驗證上述結(jié)果的準(zhǔn)確性，以保證提取工藝的合理可行，稱取川芎藥材3份，每份500g，按上述確定的工藝條件，安排重復(fù)實驗，實驗結(jié)果見表6。表6 驗證實驗結(jié)果,驗證實驗結(jié)果表明：此共水蒸餾法工藝穩(wěn)定，具有重現(xiàn)性和可操作性。因此，最后確定實驗方案為A3B1C1 。即：加8倍量的水，浸泡18小時，共水蒸餾提取6小時。,2.1.2.4揮發(fā)油脫水工藝的研究采用共水蒸餾法提取的川芎揮發(fā)油中含有一定量

15、的水分，對川芎揮發(fā)油的脫水工藝進(jìn)行了研究,表7 揮發(fā)油脫水工藝研究結(jié)果（n=3）,上述試驗結(jié)果表明，采用冷凍分離法和石油醚萃取法所得揮發(fā)油損失都較小，且藁本內(nèi)酯含量均較高。冷凍分離法為物理方法，簡便，易行，不會使有機(jī)溶劑殘留，不加熱，故最終選擇將其作為脫水方法進(jìn)行川芎揮發(fā)油的脫水處理。,,2.2川芎揮發(fā)油的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性研究,2.2.2.1川芎揮發(fā)油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究（1）揮發(fā)油中功能基的鑒定： 根據(jù)實驗結(jié)果，鑒定出揮發(fā)油中含有

16、酚類，醛類，內(nèi)酯類及不飽和化合物。（2）物理常數(shù)測定 ①相對密度 暫定為0.8917～1.0899。 ②折光率 暫定為1.3600～1.6641。 ③pH值 暫定為3.83～4.67。 ④酸值 暫定酸值為24.8～30.4。 ⑤皂化值 暫定為201～245。,（3）川芎揮發(fā)油的TLC鑒別 取本品10mg，加甲醇20m

17、l使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材1g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作為對照藥材溶液。取藁本內(nèi)酯對照品適量，加甲醇使溶解作為對照品溶液，照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗，以正己烷-醋酸乙酯（9:1）和石油醚-醋酸乙酯（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，結(jié)果見圖4和圖5。,,（4）

18、川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯的含量測定①色譜條件色譜柱：Kromasil C18柱（4.6mm×250mm）；流動相：甲醇-水（75：25）；流速：1ml/min；檢測波長：280nm；靈敏度：0.01AUFS。在上述色譜條件下藁本內(nèi)酯與其他組分均能達(dá)到基線分離（結(jié)果見圖6、圖7）。,圖6 藁本內(nèi)酯對照品的HPLC圖,圖7 川芎揮發(fā)油的HPLC圖譜,②標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取藁本內(nèi)酯對照品約20mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇稀

19、釋至刻度，再精密吸取1ml置25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得（每1ml含32.032μg藁本內(nèi)酯）。分別吸取1、2、4、6、8、10μl進(jìn)樣，測定，記錄色譜圖，測定峰面積，結(jié)果見下表。并以峰面積A對進(jìn)樣量C（μg）回歸得回歸方程為：A=12684557.6513C-47471.5452，r=0.9999，結(jié)果見表13和圖8。 表13 進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系,,圖8 線性關(guān)系圖

20、 測定結(jié)果表明，藁本內(nèi)酯進(jìn)樣量在0.032032µg～0.320320µg內(nèi)呈良好線性關(guān)系。,③精密度實驗試驗結(jié)果表明，該儀器精密度良好。④重復(fù)性實驗結(jié)果表明該測定方法重復(fù)性良好。⑤穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明：供試品溶液峰面積值在8小時內(nèi)無顯著性變化，可滿足測定要求。⑥加樣回收率實驗表明該含量測定方法合理可行。 ⑦樣品含量測定表18 川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯的含量測定結(jié)果（n=3）,測定結(jié)果表明：三批樣

21、品的測定結(jié)果表明，川芎揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯含量穩(wěn)定，暫定其標(biāo)示量為61.86%，樣品的含量以標(biāo)示量計應(yīng)在±10%以內(nèi)，即55.67%～68.05%。,2.2.2.2川芎揮發(fā)油的穩(wěn)定性研究在避光、不避光、室溫、－20℃、4℃、37℃、密閉、不密閉等條件下取揮發(fā)油進(jìn)行留樣觀察，在不同時間（1天、15天、30天、60天、90天）精密取樣，并進(jìn)行含量測定。實驗結(jié)果見表。 表19 川芎揮發(fā)油

22、的穩(wěn)定性測定結(jié)果（n=3）,根據(jù)上述試驗結(jié)果對川芎揮發(fā)油的不同影響因素進(jìn)行分析，結(jié)果見圖9～圖11。,,圖9 光線對川芎揮發(fā)油穩(wěn)定性的影響,,圖10 空氣對川芎揮發(fā)油穩(wěn)定性的影響,,圖11 溫度對川芎揮發(fā)油穩(wěn)定性的影響,由此可見，為了保證川芎揮發(fā)油的質(zhì)量和制劑臨床療效，應(yīng)將其置于-20℃避光、密閉條件下保存，同時可選用不透光的棕色塑料瓶進(jìn)行包裝。,,2.3 芎冰滴丸的研制,2.3.2 實驗方法與結(jié)果2.3.2.1藥物配伍劑量的確定本

23、實驗設(shè)計了川芎與冰片配伍的三個劑量組進(jìn)行藥效學(xué)實驗。該實驗如下：（1）熱板法鎮(zhèn)痛試驗取雌性小鼠，于給藥后15分鐘、30分鐘、45分鐘、60分鐘，分別在恒溫鎮(zhèn)痛儀上測痛閾值，如60秒仍無反應(yīng)，其痛閾值以60秒計算。結(jié)果見表20。,表20 川芎揮發(fā)油與冰片配伍對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（熱板法）（x±s）,注：與給藥前相比ΔP＜0.05、ΔΔP＜0.01。 從上表可知，川芎揮發(fā)油與冰片配伍各劑量組給藥后15min～60min不同

24、時間均可提高小鼠的痛閾值，顯示其具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。,（2）扭體法鎮(zhèn)痛試驗,表21 川芎揮發(fā)油與冰片配伍對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（扭體法）（x±s）,從上表可知，川芎揮發(fā)油與冰片配伍的各劑量組均可顯著減少小鼠的扭體次數(shù)，與對照組相比有顯著差異，提示該藥具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。 根據(jù)藥效學(xué)實驗結(jié)果，選擇川芎、冰片的用量初步定為：川芎揮發(fā)油0.67mg/kg，冰片0. 22mg/kg，即成人（60kg）一日用量為川芎揮發(fā)油40mg、

25、冰片13mg。,2.3.2.2 滴丸的制備,（1）處方中藥材的提取 采用共水蒸餾法提取川芎揮發(fā)油，再采用冷凍分離法進(jìn)行脫水處理。（2）實驗步驟 與冰片按3：1的比例混勻后加一定量的基質(zhì)熔融后滴制。 評價方法：以滴制的難易（與基質(zhì)熔融后的粘稠度等有關(guān)），圓整度，溶散時限，丸重差異，硬度，光潔度等為指標(biāo)進(jìn)行考察，在不同的情況下選擇不同的指標(biāo)。,（3）冷卻劑的選擇 分別用植物油，液體石蠟，甲基硅油及后兩者的混

26、合液做冷卻劑，結(jié)果見表22。 表22 冷卻劑的選擇,結(jié)果表明，用液體石蠟與甲基硅油1：1的混合液為冷卻劑較好。,（4）藥物與基質(zhì)比例范圍的篩選以PEG4000作基質(zhì)，將其熔融后與藥物混合均勻后，滴入80cm長的冷卻柱中，以滴丸基本能成型為依據(jù)，結(jié)果見表23。 表23 藥物與基質(zhì)比例的篩選,經(jīng)綜合分析，篩選出藥物與基質(zhì)

27、的最低配比為1：2 。,（5）成型處方篩選①處方設(shè)計在藥物與基質(zhì)最低配比的基礎(chǔ)上，以PEG6000替換PEG4000，設(shè)計出一系列不同配比的復(fù)合基質(zhì)處方，見表24。 表24 成型處方組成,按上述表稱取各處方的藥物和基質(zhì)，制成滴丸，以其圓整度，溶散時限，影響滴丸滴制時的難易程度及滴丸的硬度為考察指標(biāo)，結(jié)果見表25。

28、表25 處方篩選結(jié)果,由表可看出，隨著PEG6000量的增加，雖硬度得到改善但其它指標(biāo)均有下降趨勢，綜合分析后選取PEG4000與PEG6000二者以1：1的比例混合。,②吸收劑的選擇 由于方中含大量揮發(fā)油，為使滴丸硬度增加加入吸收劑。所加吸收劑種類及比例見表26。 表26 吸收劑的選擇,注：吸收劑的比例為占揮發(fā)油的比例

29、 結(jié)果表明，加入吸收劑后能提高滴丸硬度。以淀粉為吸收劑的滴丸各指標(biāo)較好，且價廉易得，最終選擇淀粉為吸收劑，加入量為10% 。,③抗氧劑的選擇,因揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯在室溫條件下不穩(wěn)定，實驗中也發(fā)現(xiàn)放置一段時間后，滴丸顏色變淺，說明有效成分已有所變化。為提高滴丸的穩(wěn)定性加入一系列抗氧劑，并對揮發(fā)油的有效成分藁本內(nèi)酯的含量變化進(jìn)行考察。實驗結(jié)果見表27。表27 抗氧劑的考察,結(jié)果表明，加入抗氧劑后能有效提高藁本內(nèi)酯含量，保證

30、滴丸的質(zhì)量。維生素E（Vit E）效果最好，故選用0.1%的Vit E為抗氧劑。 本實驗篩選出滴丸最佳成型處方是藥物（含占揮發(fā)油10%的淀粉和0.1% Vit E）與基質(zhì)比例為1:2，基質(zhì)為PEG4000與PEG6000（1:1）的混合物。,（6）成型工藝研究①藥物的加入順序?qū)嶒灠l(fā)現(xiàn)，藥物與基質(zhì)混合的順序?qū)Φ瓮栀|(zhì)量有一定影響。實驗結(jié)果見表28。

31、 表28 藥物與基質(zhì)混合順序的考察,結(jié)果表明，藥物在基質(zhì)熔融后加入較理想。②藥物與基質(zhì)熔融溫度的考察實驗中，對藥物與基質(zhì)混合熔融的溫度進(jìn)行了考察。結(jié)果見表29。 表29 藥物與基質(zhì)熔融溫度的考察,結(jié)果表明，藥物在70℃時圓整度較好，丸重差異相差不大，為避免溫度過高對藥物成分的影響，故選擇在藥物與基質(zhì)的混合熔融溫度為70℃。,③滴制溫度、冷卻柱

32、長、滴口徑的選擇,經(jīng)預(yù)試，確定滴丸的滴距為5cm，滴速為/min。 30滴影響滴丸成型工藝的因素除藥物、基質(zhì)本身外，滴制溫度、冷凝柱長短、滴口徑(丸重)對成型工藝的穩(wěn)定、可控和易行有著重要影響，故用正交試驗法L9(34)，以滴制溫度(A)、冷卻柱長(B)、滴口徑(C)3因素選用表安排實驗，滴丸的優(yōu)選方案為A3B1C1，并通過④驗證實驗證明較優(yōu),⑤冷卻時間的考察 按優(yōu)選的藥物與基質(zhì)的配比及滴制條件進(jìn)行滴制，經(jīng)冷卻柱緩慢下降

33、后冷凝成型，分別冷凝30min，60min，90min，120min后，取出，用石油醚洗去冷凝液，以圓整度、硬度、及藁本內(nèi)酯含量作為評價標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果見表38。表38 冷凝時間的考察,通過外觀與內(nèi)在質(zhì)量綜合分析，確定冷凝時間為60min。,（7）去冷卻劑方法的選擇 滴制完成后，滴丸表面冷卻劑的去除在實驗室中選擇了石油醚洗滌和用紙屑擦拭進(jìn)行比較。以表面光潔度和藁本內(nèi)酯含量變化作為評價指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果見表39。表39 滴丸去

34、冷卻劑方法的比較,結(jié)果表明，紙屑擦拭光潔度較好且對有效成分的影響較小。因此，在實驗制備過程中選擇紙屑擦拭作為去除冷卻劑的方法，以保證滴丸的內(nèi)在質(zhì)量。,（8）滴丸干燥方法的選擇實驗中以光潔度及藁本內(nèi)酯含量變化作為評價指標(biāo)進(jìn)行分析，以選擇最適合滴丸的干燥方法，結(jié)果見表40。表40 滴丸干燥方法的選擇,結(jié)果表明吸濕干燥較理想。,,2.4芎冰滴丸的質(zhì)量評價研究2.4.1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究,（1）鑒別(對滴丸中的揮發(fā)油進(jìn)行TLC鑒別）樣品色譜

35、中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上（Rf=0.7），顯相同顏色的亮藍(lán)色熒光斑點。,（2）檢查①溶出度檢查測定藁本內(nèi)酯含量，并計算相對累積溶出百分率，即得。結(jié)果見表41。表41 藁本內(nèi)酯累積溶出百分率（%）（n=3）,以取樣時間點為橫坐標(biāo)，藁本內(nèi)酯累積溶出百分率為縱坐標(biāo)作圖，得藁本內(nèi)酯溶出曲線。見圖11。,根據(jù)測定結(jié)果，暫定在6分鐘時，本品的累積溶出百分率不得少于65%。,②含量均勻度檢查取本品10粒，研細(xì)，分別置100ml量瓶中，加

36、甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，0.45µm微孔濾膜濾過，測定藁本內(nèi)酯含量，計算結(jié)果。結(jié)果見表42。表42 樣品均勻度測定結(jié)果（n=10）,結(jié)果表明，A+1.80S均小于15.0，符合規(guī)定。 (3)含量測定,2.4.2 溶出度考察2.4.2.2溶出度方法學(xué)考察,①溶出介質(zhì)的選擇以藁本內(nèi)酯為指標(biāo)，考察藁本內(nèi)酯在水、酸水（HCl 9ml→1000ml）、人工胃液中的溶出情況。測定方法：高效液相色譜法。,圖20 對照品HPLC

37、圖,圖21 人工胃液HPLC圖,圖22 芎冰滴丸HPLC圖,表60 溶出介質(zhì)的考察實驗,結(jié)果表明，藁本內(nèi)酯在人工胃液中的溶出率高于水和酸水，故選擇人工胃液為溶出介質(zhì)。,②轉(zhuǎn)速考察結(jié)果見表61。表61 溶出度檢查轉(zhuǎn)速考察結(jié)果,結(jié)果表明，轉(zhuǎn)速對溶出度影響不大，選擇100r/min進(jìn)行實驗。④制備標(biāo)準(zhǔn)曲線⑤精密度試驗⑥重復(fù)性實驗⑦穩(wěn)定性實驗⑧加樣回收率實驗,2.4.2.3溶出度實驗結(jié)果分析同法測定芎冰包合片及膠囊的溶出度。結(jié)果見表67

38、。表67 溶出度實驗結(jié)果,以取樣時間點為橫坐標(biāo)，藁本內(nèi)酯累積溶出百分率為縱坐標(biāo)作圖，得芎冰滴丸、芎冰包合片及芎冰包合膠囊溶出曲線。見圖24。,圖24 溶出曲線對比分析圖,表68 溶出度實驗結(jié)果分析表,圖25 溶出度實驗結(jié)果分析柱形圖,以藁本內(nèi)酯達(dá)到溶出基本完全的時間和最高累積溶出百分率為指標(biāo)進(jìn)行分析，結(jié)果見表68，圖25。,由此可以看出，滴丸無論是達(dá)峰時間還是累積溶出百分率都較好。表明滴丸極大地提高了揮發(fā)油的溶出度。 實驗結(jié)

39、果表明，芎冰滴丸與其它口服固體制劑相比，溶出速度快，累積溶出量高。,,2.5 初步穩(wěn)定性試驗根據(jù)《中國藥典》2019年版藥物制劑穩(wěn)定性實驗指導(dǎo)原則，對芎冰滴丸的基本性狀、含量進(jìn)行了室溫留樣考察。按芎冰滴丸制備工藝制備滴丸三批，密封包裝，置于40℃、RH75%恒溫恒濕條件下，分別于1、2、3、6月時取樣觀察測定，并與0月比較，結(jié)果見表69。 表69 芎冰滴丸初步穩(wěn)定性試驗結(jié)果,上述試

40、驗結(jié)果表明：在室溫條件下放置6個月，滴丸的性狀、含量均無明顯變化，表明在6個月內(nèi)，該制劑的穩(wěn)定性較好。,3 結(jié)論與討論3.1 結(jié)論,本課題本著對中藥材“綜合利用”的宗旨，以川產(chǎn)道地大宗藥材川芎為研究對象，遵循傳統(tǒng)中醫(yī)藥基本理論，結(jié)合現(xiàn)代藥理及臨床實驗結(jié)果，將川芎揮發(fā)油與冰片配伍，制成滴丸，以發(fā)揮快速起效的作用，減輕患者痛苦，豐富臨床劑型，更好地為人類健康服務(wù)。 (1)在進(jìn)行川芎揮發(fā)油提取工藝的研究過程中，以揮發(fā)油得率和藁本內(nèi)

41、酯含量為指標(biāo)采用單因素實驗法和正交實驗法確定了最佳提取工藝； (2)在進(jìn)行川芎揮發(fā)油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、穩(wěn)定性的研究過程中，發(fā)現(xiàn)在-20℃避光、密閉條件下保存時揮發(fā)油質(zhì)量穩(wěn)定；(3)在進(jìn)行芎冰滴丸制備工藝研究過程中，采用藥效學(xué)試驗初步確定了臨床劑量，以圓整度、溶散時限、滴制難易、硬度等為評價指標(biāo)采用單因素實驗法確定了最佳處方，以圓整度、溶散時限、丸重變異系數(shù)為指標(biāo)采用正交實驗法確定滴制的最佳工藝條件；(4)在形成穩(wěn)定的制備工藝的前提下，對制劑的質(zhì)

42、量進(jìn)行綜合評價。通過質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定，如鑒別、溶出限量、含量測定等，使滴丸具有了可控性、穩(wěn)定性；(5)以芎冰滴丸、芎冰包合片以及包合膠囊作為比較對象進(jìn)行了溶出度的考察，普通片最高累積溶出百分率僅為11.6%。表明滴丸溶出速度快，而且實驗顯示溶出量高。,3.2 討論3.2.1 不同蒸餾條件對川芎揮發(fā)油內(nèi)在成分的影響,文獻(xiàn)報道的揮發(fā)油提取方法較多，目前關(guān)于川芎揮發(fā)油的提取方法有共水蒸餾法、有機(jī)溶劑浸取法、超臨界流體萃取法、罐組式逆流提取法等

43、。但有機(jī)溶劑浸取法常有有機(jī)溶劑的殘留；超臨界流體萃取法，罐組式逆流提取法成本較高，且提取后藥渣無法再利用；共水蒸餾法是傳統(tǒng)川芎揮發(fā)油提取方法，此法設(shè)備簡單，易操作，投資少，適合在實驗室進(jìn)行，并且提取后藥渣可以再提取酚酸類及生物堿類物質(zhì)，從而實現(xiàn)川芎藥材的分別提取，分部利用，故選擇共水蒸餾法進(jìn)行提取。但共水蒸餾法提取川芎揮發(fā)油的影響因素較多，而在現(xiàn)有的文獻(xiàn)報道中尚未對此法提取條件的改變產(chǎn)生的對揮發(fā)油質(zhì)量的影響進(jìn)行系統(tǒng)研究，因此為了對這一問

44、題進(jìn)行初步的探討，我們對川芎揮發(fā)油質(zhì)量的變化情況進(jìn)行了考察研究。,3.2.3 中藥揮發(fā)油的處理方法,中藥揮發(fā)油可根據(jù)需要制成各種劑型，如將其填充于軟膠囊中，增溶制成液體藥劑，或包合后制成固體制劑。將揮發(fā)油加增溶劑制成液體劑型，其穩(wěn)定性不高，長時間放置后，經(jīng)常出現(xiàn)乳光、渾濁等現(xiàn)象，致使澄明度不符合液體藥劑的質(zhì)量要求。1、制成包合物如采用β-環(huán)糊精及 N-LOK變性淀粉進(jìn)行包合。,2、制成脂質(zhì)體脂質(zhì)體研究也是當(dāng)前一個十分活躍的領(lǐng)域，脂

45、質(zhì)體可以包裹脂溶性和水溶性兩種類型的藥物。脂質(zhì)體除具有靶向性以外，還能降低藥物毒性，增強(qiáng)藥理作用，延長藥物作用時間，增加藥物的體內(nèi)外穩(wěn)定性。脂質(zhì)體本身對人體毒性小，對人體無免疫抑制作用，并且可以靜脈給藥。因此，將揮發(fā)油制成脂質(zhì)體，可以將其固體化 。3、納米技術(shù)將揮發(fā)油進(jìn)一步分散后使粒徑達(dá)到納米水平，可提高藥物的生物利用度，產(chǎn)生許多新的功效。,致 謝,從本文的立題、設(shè)計、實驗和定稿過程中，得到了導(dǎo)師尹蓉莉教授及謝秀瓊教授的悉心指導(dǎo)和

46、誠摯關(guān)懷。感謝老師在我學(xué)習(xí)上的諄諄教導(dǎo)，及對我生活的關(guān)懷與幫助。老師堅定的科學(xué)信念、對醫(yī)藥事業(yè)的執(zhí)著追求和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度將影響我一生。在此，致以最衷心的感謝！在實驗過程中，還得到了制劑教研室向永臣老師及師兄何宇新、黃勤挽的耐心指導(dǎo)和幫助。在此表示衷心的感謝！同時，還得到了楊麗紅、黃媛莉、鐘華、何芳輝等同學(xué)的大力幫助，以及研究生院、藥學(xué)院和制劑教研室的各位領(lǐng)導(dǎo)和老師的大力支持。在此一并致以誠摯的謝意。最后，向三年來給予我關(guān)懷、鼓勵和