生化試劑參數(shù)

1、生化試劑各機型參數(shù)確定,目錄,生化試劑主要參數(shù)及意義生化試劑其他參數(shù)及意義各機型生化分析儀概括介紹各機型參數(shù)特點,生化試劑主要參數(shù)及意義,生化試劑說明書中各參數(shù)（例：脂肪酶）,項目名稱方法類型反應(yīng)方向測定波長測定溫度樣本體積試劑量分析時間校正方法,生化試劑主要參數(shù)及意義,項目名稱(test name)：常以項目的英文縮寫來設(shè)置。方法類型(assay/Method )（適用于儀器的方法）：方法類型主要分為

2、：終點法和動力學法終點法一點終點法：樣本與試劑混勻一定時間后讀取反應(yīng)終點吸光度，如血糖氧化酶法、總蛋白雙縮脲法、白蛋白溴甲酚綠法等。兩點終點法：（又稱固定時間法）樣本與試劑混勻一定時間后先讀取吸光度A1，延遲一定時間后讀取吸光度A2，計算吸光度差值與標準比較求得結(jié)果。如肌酐苦味酸法等?？上齼?nèi)源性物質(zhì)干擾。,生化試劑主要參數(shù)及意義,動力學法一級動力學法：（兩點速率法）樣本與試劑反應(yīng)不斷消耗反應(yīng)物，反應(yīng)速度不斷減小，吸光度變化不

3、斷減小，在特定時間段內(nèi)進行監(jiān)測，該時間段內(nèi)吸光度升高或降低與樣本濃度成正比，如同型半胱氨酸、總膽汁酸等。零級動力學法：（連續(xù)監(jiān)測法，用于酶活性監(jiān)測）樣本與試劑反應(yīng)，反應(yīng)物可勻速生成某個產(chǎn)物，如NADH，在特定波長下吸光度均勻的增大或減小，增大或減小的速度與樣本濃度呈正比。如堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶等。,生化試劑主要參數(shù)及意義,一級動力學法：（兩點速率法）,生化試劑主要參數(shù)及意義,零級動力學法：（連續(xù)監(jiān)測法，用于酶活性監(jiān)測）,生化試劑主

4、要參數(shù)及意義,反應(yīng)方向(response direction)正向反應(yīng)（UP/INC/+）：吸光度增加。負向反應(yīng)（DOWN/DEC/-）：吸光度下降。測定溫度30℃、37℃、25℃樣本體積（sample volum）一般為2-35μl ，以0.1μl步進。試劑量（regengt volum）一般為20-300μl ，以1μl步進。不同機型生化分析儀的樣本量及試劑量限制不同，樣本與試劑可根據(jù)比例進行增大或減少。,

5、生化試劑主要參數(shù)及意義,測定波長（wavelength）：不同生化分析儀具備不同的波長。可選擇單波長或雙波長。主波長（main wavelength/primary wavelength ）根據(jù)待測物質(zhì)在特定波長下具有最大吸收峰來選擇主波長。副波長（次波長sub wavelength/second wavelength ）可不選擇設(shè)定。副波長可消除樣本溶血，血清渾濁的干擾影響，副波長與主波長越接近越好。檢測時吸光度值為

6、主波長的吸光度減去副波長的吸光度。,生化試劑主要參數(shù)及意義,分析時間：孵育時間（incubate time）一點終點法的孵育時間是指樣本與試劑開始到反應(yīng)終點的時間；兩點終點法是指第一個吸光度反應(yīng)點開始到第二個吸光度點為止時間。一般為5min。延遲時間（delay time）加入第二反應(yīng)試劑后到第一個吸光度監(jiān)測點開始的時間。即樣本與反應(yīng)試劑（第二試劑）混勻開始至第一個吸光度選擇點之間的時間。單試劑一般設(shè)置為30s，雙底物反應(yīng)或酶類

7、反應(yīng)一般設(shè)置為1-3min。連續(xù)監(jiān)測時間（ continuous monitoring time）在延遲時間后的零級反應(yīng)開始，監(jiān)測至少4個點（3個吸光度變化值），一般為1-2min。,生化試劑主要參數(shù)及意義,校正方法（Calibration Type）：可采用標準液（校準液）定標方式或理論K值方式獲取標準曲線。線性定標（ Linear/AB）：兩點定標，標準曲線呈直線。非線性定標（Spline/4AB/polygonal）：

8、多點定標，標準曲線近似于直線。理論K值 （Factor/MB）：多用于連續(xù)監(jiān)測法測定酶活時，無需定標曲線，根據(jù)摩爾消光系數(shù)計算得到結(jié)果。 106× VF= —————— ?×v×L,生化試劑主要參數(shù)及意義,V：反應(yīng)體系總體積（ml）；v：樣本體積（ml）?：摩爾消光系數(shù)（cm2/mol）L：比色杯光徑（cm）；106：將mol換算為μmol,生化試劑其他

9、參數(shù)及意義,試劑吸光度上限、下限/試劑吸光度界限(OD Limt) 底物耗盡限額(substrate exhaust limit)試劑吸光度線性范圍(Linearity） 試劑線性范圍（Technical Limit）前區(qū)檢查限(Prozone Check Limt) 方程式（Fomular）小數(shù)位（Decimal Places）雙份界限（Duplicate Limit）敏感性界限(Sensitivity Limit)

10、第一標準吸光度界限(S1 Abs.limt)反應(yīng)過程吸光度界限(Absorbance Limit),生化試劑其他參數(shù)及意義,試劑吸光度上限、下限/試劑吸光度界限(OD Limt) 常用規(guī)定波長及光徑下的吸光度值表示。終點法常在0點讀數(shù)，連續(xù)監(jiān)測法常以反應(yīng)監(jiān)測起始點來判讀該吸光度值。可用于判斷試劑質(zhì)量。檢測試劑空白時，若超過此參數(shù)的限值，則提示試劑可能失效。,底物耗盡限額(substrate exhaust limit)連續(xù)監(jiān)測

11、法或兩點終點法時設(shè)置。根據(jù)吸光度上升或下降設(shè)定MAX-OD/MIN-OD，吸光度超過設(shè)定界限時，代表樣品酶活非常高，底物消耗太快，所測得結(jié)果不能代表真實酶活力。,生化試劑其他參數(shù)及意義,試劑吸光度范圍(Linearity） 線性度不能超過設(shè)定界限，超限時說明吸光度的變化量之間已經(jīng)不成線性或說明底物不足，檢測結(jié)果會變低。試劑線性范圍（Dynamic Range/Technical Limit）與試劑/樣本比值有關(guān)，超出范圍的

12、樣本應(yīng)增加樣本量重測或樣本稀釋后重測。,生化試劑其他參數(shù)及意義,方程式（Fomular）Y=aX+ba為截距，b為斜率。用于校正檢測結(jié)果，一般a為1.000，b為0.000，,小數(shù)位（Decimal Places）主要根據(jù)項目參考范圍的小數(shù)位進行設(shè)定，一般0-2位。,前區(qū)檢查限(Prozone Check Limt) 主要用于免疫比濁法項目，可根據(jù)項目要求選YES或NO，比較終點法后兩個讀數(shù)點的差別，如果后一點比前一點的吸光度低

13、，表示已經(jīng)有抗原過剩，樣本應(yīng)稀釋后重測,生化試劑其他參數(shù)及意義,雙份界限（Duplicate Limit）也稱離散性，是同一個標準液兩次測定吸光度的差值，表示試劑和儀器的重復(fù)性,此值越小表示試劑和儀器的精密度越高,敏感性界限(Sensitivity Limit) 可以檢測的最低吸光度值，也就是檢測最低濃度的可靠性,第一標準吸光度界限(S1 Abs.limt)通常指零濃度標準品的吸光度界限，在終點法和速率法中計算方式不同,生化試劑其

14、他參數(shù)及意義,反應(yīng)過程吸光度界限(Absorbance Limit)在動力學反應(yīng)中,由于高濃度（活性）樣本使底物耗盡，所測吸光度已不可靠,使高濃度的樣本測定值低很多,甚至為負值。為能正確反映測定結(jié)果，需設(shè)置底物耗盡限(某一特定吸光度)，是在反應(yīng)時間內(nèi)反應(yīng)沒有發(fā)生底物耗盡時所能達到的最小(反應(yīng)曲線向下)或最大(反應(yīng)曲線向上)的吸光度值 ，該吸光度即為吸光度界限。可用于確保高濃度（活性）樣本結(jié)果的準確性。,淡藍色字體標注參數(shù)設(shè)定時一般為機

15、器默認。,各機型生化分析儀概括介紹,AU400,AU640,AU2700,AU480,各機型生化分析儀概括介紹,AU系列,各機型生化分析儀概括介紹,各機型生化分析儀概括介紹,日立系列,各機型生化分析儀概括介紹,Beckman CX5,Beckman LX20,各機型生化分析儀概括介紹,Beckmam系列,各機型參數(shù)特點,不同機型分析方法 表示方法 常用選

16、擇項 COBAS Asaay Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point end HITACHI Assay code Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point endOLYMPUS Method RATE/FIXED/ENDBECKMAN

17、 Reaction type RATE1/2/END1/2ABBOTT Reaction defintion Rate /Flex Rate/End,各機型參數(shù)特點,不同機型反應(yīng)方向 表示方法 可選擇項 COBAS INC/DEC

18、 INC/DECHITACHI INC/DEC INC/DECOLYMPUS Reaction Slope +/-BECKMAN Reaction Direction Positive/NegativeABBOTT Reaction Mode

19、 Up/Down,各機型參數(shù)特點,不同機型測定波長 主波長 次波長COBAS Wave(Main/ Sub)HITACHI Wave(Main/

20、 Sub)OLYMPUS Wavelength pri Wavelength secBECKMAN Primary Wavelength Secondary WavelengthABBOTT Wavelength Primary Wavelenght Secon

21、dary 不同機型所具波長數(shù)目不同，一般波長分布為 從紫外線到紅外線340-800nm。參數(shù)設(shè)定時可選擇與項目要求相近的波長。,各機型參數(shù)特點,不同機型反應(yīng)時間：儀器的一個分析周期中，試劑和樣本混合最后一點測定讀數(shù)時間 常見儀器可以選擇的時間COBAS P800 :1~10、15、22分鐘 C501: 3~10分鐘HITACHI ：3、5、8、10、15、22分鐘OLYMPUS

22、固定時間： 8.3分鐘ABBOTT固定時間：9.6 分鐘BECKMAN可達時間：975秒,各機型參數(shù)特點,不同機型試劑加入相應(yīng)時間(分鐘) HITACHI R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) P800 R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) C501 R1 R2(

23、1.5) R3(5) OLYMPUS R1 R2(3.3) ABBOTT R1 R2(5.1),各機型參數(shù)特點,不同機型讀點間隔時間及最大讀點數(shù) 讀點間隔(秒) 最大讀點數(shù) P800 18 34 C501 8