醫(yī)學(xué)寄生蟲學(xué)隱孢于蟲肺孢子蟲

1、隱孢于蟲（Cryptosporidium Tyzzer，1907 ）,是一種寄生于宿主消化道的球蟲類寄生蟲。最早由Tyzzer在小鼠胃腺上皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)并命名。1976年后，才證實(shí)本蟲可以感染人體。,隱孢子蟲是一種呈世界性分布的，能引起人和動(dòng)物腹瀉的，重要的機(jī)會(huì)性致病原蟲。 已被公認(rèn)為最重要的人類腹瀉的腸道病原體之一。 由本蟲引起的隱孢子蟲病(cryptosporidiasis)是一種人獸共患病。,種類繁多 至少21種

2、。微小隱孢子蟲（C.parvum）引起腹瀉，機(jī)會(huì)致病，與艾滋病有關(guān)。一、形態(tài) 卵囊呈圓形或橢圓形，直徑3～6?m，囊壁稍厚且光滑，無色，成熟卵囊內(nèi)含4個(gè)裸露的子孢子和由顆粒物組成的殘留體（residual body），子孢子為月牙形，大小約1.5×0.75 ?m，無孢子囊，核1個(gè)，位于蟲體后部。,電鏡觀察下的成熟卵囊。,生活史要點(diǎn) ①隱孢子蟲生活史簡(jiǎn)單，有裂體增殖、配子 生殖和孢子增殖，均在同一宿主體

3、內(nèi)進(jìn)行， 稱為內(nèi)生階段。 ②人和多種家畜(牛、羊、貓、犬、兔等)均 可受染。 ③寄生在宿主小腸上皮細(xì)胞膜與胞質(zhì)間形成 的納蟲空泡內(nèi)，嚴(yán)重時(shí)可擴(kuò)散到整個(gè)消化道。,④ 感染階段為卵囊。卵囊有薄壁和厚壁兩 種類型。厚壁卵囊隨宿主糞便排出時(shí)， 即有感染性，為感染階段，有傳播作用； 薄壁卵囊內(nèi)子孢子在腸腔逸出，直接侵 入腸上皮細(xì)胞，引起宿主體內(nèi)重復(fù)感染。 ⑤ 感染途徑為被

4、卵囊污染的水源和食物經(jīng) 口而感染,⑥在宿主小腸。子孢子---滋養(yǎng)體---Ⅰ型裂殖體。Ⅰ型裂殖體,Ⅰ型裂殖體,第2代滋養(yǎng)體--- Ⅱ型裂殖體--裂殖子-----雌、雄配子體---合子----卵囊。,,卵囊,薄壁卵囊---子孢子逸出--侵人腸上皮細(xì)胞--自體內(nèi)重復(fù)感染,厚壁卵囊 ---隨宿主糞便排出體外,,⑦完成整個(gè)生活史約需5-11天。⑧厚壁卵囊在外界環(huán)境中抵抗力較強(qiáng)，可 在低溫或常溫下存活數(shù)月并保持感染性。,三、致

5、 病1.致病機(jī)制 ①隱孢子蟲寄生在腸黏膜，使腸絨毛萎縮，變 短變粗，或融合、移位和脫落；多種粘膜酶 減少；腸上皮細(xì)胞出現(xiàn)老化和損落速度加快 現(xiàn)象。 ②破壞腸絨毛的正常功能特別是對(duì)脂肪和糖類 的吸收功能障礙，導(dǎo)致患者持久腹瀉。 ③為機(jī)會(huì)性致病原蟲。在免疫功能低下或受損 患者，隱孢子蟲發(fā)育、繁殖迅速，患者發(fā)病 急，腹瀉程度嚴(yán)重，常表現(xiàn)為霍亂樣水瀉， 患者甚至死亡。,三、致 病2.臨床表現(xiàn)

6、:免疫功能正常者，感染后常表現(xiàn)為自限性腹瀉，糞便呈水樣或糊狀，極少有血樣便；伴有消化道癥狀，腹痛、腹脹、嘔吐、納差、乏力等癥狀。免疫功能異常的病人，腹瀉程度較為嚴(yán)重，常為持續(xù)性霍亂樣水瀉，伴有劇烈腹痛、電解質(zhì)紊亂和營(yíng)養(yǎng)不良，是艾滋病的主要致死原因之一。,四、實(shí)驗(yàn)診斷1．病原體檢查 從病人糞便、膽汁、痰液或 支氣管灌洗液等標(biāo)本中查得本蟲卵囊即可 確診。標(biāo)本可以是新鮮的，也可以經(jīng)甲醛 固定。經(jīng)濃縮后的標(biāo)本

7、在相差顯微鏡下觀 察卵囊為明亮的雙折光的圓形小體內(nèi)含子 孢子和深色的顆粒狀的殘留體。由于未染 色的卵囊無色透明，且易與標(biāo)本中的非特 異性顆粒相混淆，故需采用染色方法檢查 卵囊。,1．病原體檢查（直接涂片法、濃集法） 常用的染色方法有： 1）金胺-酚染色法 經(jīng)染色的卵囊，需用熒光顯 微鏡觀察。鏡下蟲體呈圓形，發(fā)出乳白色略 帶綠色的熒光，中央淡染；似環(huán)狀。 2）改良抗酸

8、染色法 染色后，標(biāo)本的背景呈藍(lán) 綠色，卵囊為玫瑰紅色，可見內(nèi)部結(jié)構(gòu)。本 法缺點(diǎn)為經(jīng)染色后，標(biāo)本中存在的非特異性 紅色抗酸顆粒易與卵囊相混淆，難以鑒別。,3）金胺酚-改良抗酸染色法 用本法可克服 上述染色法的缺點(diǎn)。本法先用金胺酚染 色后，再用改良抗酸染色法復(fù)染。用光 學(xué)顯微鏡觀察，卵囊同抗酸染色所見， 但非特異性顆粒被染成藍(lán)黑色，兩者顏 色截然不同，極易鑒別，使檢出率和準(zhǔn)

9、 確性大大提高。,2．免疫學(xué)診斷方法 有熒光標(biāo)記單克 隆抗體法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè) 病人糞便卵囊或血清抗體。此二法 均有市售試劑盒。兩者均有高度的 特性和敏感性。,3．分子生物學(xué)方法可用核酸探針或PCR檢測(cè) 糞便中的卵囊。近年新發(fā)展了用生物素 等標(biāo)記的核酸探針結(jié)合PCR法檢測(cè)糞便標(biāo) 本中卵囊，可檢出最底為0.1pg的隱孢子 蟲DNA，相當(dāng)于每克糞便中含有5個(gè)卵囊。 分子

10、生物學(xué)方法的敏感性和特異性都很 高，特別適用于大樣本中少量卵囊的檢查。,五．流行 (1)傳染源：病人、帶蟲者及病畜。 (2)傳播途徑：卵囊污染食物、水 源，經(jīng)口感染。 (3)易感者：人對(duì)隱孢子蟲普遍易 感，免疫功能低下或缺陷者尤 易感染。 　　　感染率0.38%～15.21%,0.92%～97%不等。,六．防治 (1)治療病人、帶蟲者和病畜。常用藥物 有

11、大蒜素、巴龍霉素、螺旋霉素等。 (2)加強(qiáng)人畜糞便管理，防止病人和病畜 糞便中的卵囊污染水源和食物。 (3)注意個(gè)人飲食、飲水衛(wèi)生，提倡喝開 水；避免與病人、病畜接觸。（4）保護(hù)免疫功能低下的人群，增強(qiáng)免疫力。,卡氏肺孢子蟲（Pneumocysis  carinii  Delanoe    et    Delanoe，1912）簡(jiǎn)稱肺孢子蟲，廣泛

12、存在于人和其他哺乳動(dòng)物的肺組織內(nèi)，可引起卡氏肺孢子蟲肺炎（pneumosystis carrinii pneumonia , PCP) 或稱肺孢子蟲?。╬neumocystosis）。本蟲為一種威脅人類健康的機(jī)會(huì)致病寄生蟲。,艾滋病合并卡氏肺孢子蟲感染一例,患者男性，40歲，河北人，已婚， 京津高速路某收費(fèi)站負(fù)責(zé)人。主訴：發(fā)熱、咳嗽4天，氣短、呼吸困難一天。 于1993年6月4日收住人民醫(yī)院呼

13、吸內(nèi)科。,,查體： 體溫38℃，脈搏128次/分，呼吸42次/分，血壓100/70 mmHg。神志清楚，發(fā)育正常，營(yíng)養(yǎng)差。急性病容，呼吸困難，口唇紫紺，皮膚未見黃染及皮疹。全身未觸及腫大的淋巴結(jié)。頸部無抵抗。雙下肺叩診呈濁音，聽診可聞及濕羅音。心律齊，未聞及心臟雜音。腹軟，未觸及肝、脾。,實(shí)驗(yàn)室檢查： 血紅蛋白150g/L（正常男性120~160g/L）,血白細(xì)胞5×109/L（正

14、常4×109~10×109/L），淋巴細(xì)胞（0.4 ×109/L） 。血沉110mm/1h（正常男性15 mm/1h）。 血糖、血鉀、血鈉、血氯正常。 骨髓涂片未見異常。血培養(yǎng)為陰性。血?dú)夥治觯?PaO230~20mmHg（正常103.5-0.42×年齡mmHg）X線檢查：兩肺呈彌漫性羽毛狀和斑片陰影。住院病程：經(jīng)積極抗感染和吸氧等治療，病情未好轉(zhuǎn)，發(fā)展為呼吸衰竭。氣管切開

15、行人工呼吸機(jī)維持，患者神志不清，血壓下降，于1993年6月14日呼吸、循環(huán)衰竭死亡。,抗HIV抗體檢查： ELISA法，陽性；蛋白印跡確認(rèn)（報(bào)告結(jié)果后10小時(shí)患者死亡）。尸體解剖主要發(fā)現(xiàn)：①兩肺彌漫性實(shí)變，間質(zhì)性肺炎，大部分肺泡腔內(nèi)充滿泡沫狀蛋白性滲出物，銀染色顯示大量卡氏肺孢子蟲；②肺門淋巴結(jié)可見酪樣壞死，少量類上皮細(xì)胞和郎罕氏巨細(xì)胞。③兩腎上腺可見核內(nèi)巨細(xì)胞包含體。病理最后診斷：艾滋病患者，繼發(fā)肺卡氏

16、肺孢子蟲病，肺門淋巴結(jié)結(jié)核，巨細(xì)胞病毒感染，因卡氏肺孢子蟲性肺炎導(dǎo)致呼吸、循環(huán)衰竭死亡。,1909 年Chagas 在枯氏錐蟲感染的實(shí)驗(yàn)豚鼠肺印片中發(fā)現(xiàn) .1912年Delanoe夫婦在大鼠肺部發(fā)現(xiàn)并定名為卡氏肺孢子蟲. (Pneumocysti

17、s carinii),◆,◆,屬孢子蟲綱，16s rRNA序列分析，不典型真菌，位于子囊菌和擔(dān)子菌之間.世界各地均有分布，一般認(rèn)為經(jīng)空氣傳播。,◆,◆,◆,◆,本病為艾滋病患者常見并發(fā)癥和主要致死原因之一.,1952年Vanek和Jirovec在患有間質(zhì)性肺炎的死亡病兒肺滲出液中查到該蟲體,（卡氏肺孢子蟲肺炎Pneumocystis carinii pneumonia, PCP）,主要寄生在人或哺乳動(dòng)物的肺泡、肺泡上皮細(xì)胞或肺泡

18、間隙中.可引起間質(zhì)性漿細(xì)胞性肺炎。,生活史中分包囊和滋養(yǎng)體兩個(gè)階段,一、形態(tài),滋養(yǎng)體、包囊前期和包囊?！　?、滋養(yǎng)體外形：　　　　在姬氏染色標(biāo)本中，滋養(yǎng)體呈多態(tài)形。　　2、滋養(yǎng)體大?。骸　　　⌒∽甜B(yǎng)體1~1.5µm,大滋養(yǎng)體2～8µm。　　3、滋養(yǎng)體細(xì)胞結(jié)構(gòu)：細(xì)胞核1個(gè)，深紫色；細(xì)胞質(zhì)淡藍(lán)色。線粒體、核糖體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及空泡、糖原。,4、包囊前期： 3～5µm，形態(tài)多變。 5、包囊形態(tài)：,形狀

19、：呈圓形或橢圓形，包囊細(xì)胞結(jié)構(gòu)：經(jīng)姬氏染色的標(biāo)本，胞質(zhì)為淺藍(lán)色，胞核為深紫色。囊壁不著色，透明似暈圈狀或環(huán)狀，成熟包囊內(nèi)含有8個(gè)香蕉形囊內(nèi)小體（intracystic    bodies），各有1個(gè)核。大?。褐睆綖?～6µm，,包囊，內(nèi)有8個(gè)囊內(nèi)小體，Giemsa染色,二、生活史,,三、致病,健康人感染本蟲多數(shù)為隱性感染，無癥狀，當(dāng)宿主免疫力低下時(shí)，處于潛伏狀態(tài)的本蟲即進(jìn)行大量繁殖，并在肺組織內(nèi)擴(kuò)散導(dǎo)致

20、間質(zhì)性漿細(xì)胞性肺炎。肺組織的泡沫狀滲出物為肺泡內(nèi)蛋白性滲出伴脫落變性的肺泡細(xì)胞，少量巨噬細(xì)胞、蟲體的滋養(yǎng)體和包囊等。,卡氏肺孢子蟲感染,隱性感染,臨床表現(xiàn)：間質(zhì)性肺炎. ① 嬰兒型（流行型）：早產(chǎn)兒、體質(zhì)虛弱和營(yíng)養(yǎng)不良的嬰兒 ② 成人型（散發(fā)型）: 先天性免疫缺陷病、艾滋病、 惡性腫瘤或長(zhǎng)期使用免疫抑制劑等病人,◆,◆,PCP是艾滋病病人最常見的并發(fā)

21、癥，在美國(guó)有60%~80％艾滋病人合并PCP（兒童高于成人）。AIDS中PCP臨床起病隱匿，常為潛在性，進(jìn)展較為緩 慢，從發(fā)病到呼吸功能不全大約需要數(shù)周。主要癥狀有發(fā)燒、干咳、呼吸困難和紫鉗，最終發(fā)展為彌漫性兩肺肺炎。重癥患者如診斷不及時(shí)，2～6周內(nèi)死亡，病死率極高。有的病程短促，可于發(fā)病后4~8天內(nèi)死亡。,AIDS患者PCP的臨床表現(xiàn),◆,◆,◆,◆,◆,,Pathogenesis,,,（宿主免疫力低下時(shí)）,肺組織內(nèi)迅速

22、擴(kuò)散導(dǎo)致PCP,,,,,,四、診斷,（一）病原學(xué)診斷　　　可收集痰液或支氣管分泌物涂片鏡檢，但陽性率很低，應(yīng)用支氣管沖洗術(shù)可提高檢出率。也可進(jìn)行經(jīng)皮穿刺肺活檢、支氣管鏡肺活檢或開胸肺活檢，這些方法雖可靠，但損傷大。,,,A: 3 cysts in bronchoalveolar material, Giemsa stain; the rounded cysts (size 4 to 7 µm) contain 6 to 8

23、intracystic bodies, whose nuclei are stained by Giemsa; the walls of the cysts are not stained; note the presence of several smaller, isolated trophozoites.,B: cysts in lung tissue, silver stain; the walls of the cysts a

24、re stained black; the intracystic bodies are not visible with this stain; baby who died with pneumonia in California.,支氣管分泌物涂片，顯示包囊，甲笨胺藍(lán)染色,（二）免疫學(xué)診斷,常用方法為IFA、ELISA或補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。但由于大多數(shù)正常人都曾有過肺孢子蟲隱性感染，血清中都有特異性抗體存在，故檢測(cè)血清抗體的方法一般不用于

25、肺孢子蟲病的診斷?！　　〗陙恚珼NA探針、rDNA探針和PCR技術(shù)等已試用于肺孢子蟲病診斷，顯示有較高的敏感性和特異性。,血清學(xué)診斷 (Serological diagnosis),▼,▼,分子生物學(xué)診斷（Molecular diagnosis）,PCR及DNA探針技術(shù)應(yīng)用于檢測(cè)肺孢子蟲病的診斷,常用方法:免疫熒光法、免疫組織化學(xué)法及ELIAS等。,五、卡氏肺孢子蟲的流行,本病呈世界性分布，一般認(rèn)為包囊經(jīng)空氣傳播是該蟲的傳播途徑。

26、在正常人群中血清流行病學(xué)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，有1％～10％呈隱性感染。,血清抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在4歲以下兒童中有75%抗體陽性。人類的帶蟲狀態(tài)可持續(xù)多年，提示肺孢子蟲攜帶者可能為本病傳染源。1979年報(bào)告了國(guó)內(nèi)首例腎移植術(shù)后合并PCP的成人患者。至2000年底，我國(guó)大陸報(bào)道已超過百余病例。發(fā)病人數(shù)呈明顯上升趨勢(shì)。,▼,▼,▼,▼,▼,▼,六、防治原則,本病如得不到及時(shí)治療，死亡率很高，如及早治療則可有60％～80％生存。常用藥物有戊烷脒，乙胺嘧